胰岛素样生长因子ⅡmRNA 结合蛋白3 与膀胱癌相关蛋白BCA7 在膀胱癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

程钰，卢柳，程肇平

安康市中心医院病理科，陕西 安康7250000

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，好发于 膀胱黏膜[1]。相关统计数据显示，膀胱癌发病率居西方国家位居第二，仅次于前列腺癌；中国膀胱癌发病率为6.61/10 万，居全部恶性肿瘤发病率的第九位。近年来，膀胱癌的发病率不断上升，且随着年龄增长而升高，50～70 岁为高发年龄，发病人群男性多于女性，随着吸烟人数的不断增多，每年全球膀胱癌新发例数约35 万，严重威胁患者的生命健康[2-3]。研究表明，新发膀胱癌患者中，尿路上皮癌所占比例高达90%，非肌层浸润性占70%～80%，肌层浸润性占20%～30%，随时间推移，部分非肌层浸润性膀胱癌患者会发展为肌层浸润性膀胱癌或复发，50%的肌层浸润性膀胱癌患者术后甚至出现肿瘤细胞远处转移[4-5]。膀胱癌患者预后呈多变和无法预测的特点，临床寻求有效且准确预测预后的肿瘤特异性标志物尤为重要。经生物学基因检测发现，胰岛素样生长因子ⅡmRNA 结合蛋白3（insulin-like growth factorⅡmRNA binding protein 3，IMP3）与膀胱癌相关蛋白BCA7 蛋白在膀胱癌患者呈现高表达水平，在预测膀胱癌患者预后方面可发挥作用[6]。本研究通过免疫组化法检测IMP3 和膀胱癌相关蛋白BCA7 在膀胱癌患者中的表达，并分析其与患者临床特征和预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011 年6 月至2015 年6 月安康市中心医院收治的膀胱癌患者。纳入标准：经病理组织学检查确诊为膀胱癌；肿瘤无远处转移且术前未接受新辅助化疗或放疗。排除标准：合并心、肝、肾等脏器严重功能不全；合并凝血功能和精神障碍；临床资料和随访资料缺失或不完整。采用世界卫生组织（WHO）1973 分级法进行组织学分级，采用国际抗癌协会2002 年TNM 分期法进行临床分期。依据纳入和排除标准，本研究共纳入121 例膀胱癌患者，男93 例，女28 例；年龄28～80 岁，平均（60.42±3.25）岁。取121 例膀胱癌患者的膀胱癌组织和32 例对应癌旁正常组织标本浸泡于10%甲醛中，石蜡包埋。

1.2 免疫组化法检测IMP3与BCA7蛋白的表达情况

取121 例膀胱癌患者的膀胱癌组织和32 例相应的癌旁正常组织，4 μm 厚石蜡切片，梯度乙醇常规脱蜡水化，枸橼酸盐（pH=6.0）加热抗原修复，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）冲洗3次，每次5 min，二甲苯脱蜡，每次15 min，于0.3%过氧化氢中孵育10 min后，PBS冲洗3次，每次5 min，胎牛血清封闭30 min。加入稀释浓度为1∶100的兔单克隆抗体，4 ℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3次，每次5 min，加入生物素标记的二抗，37 ℃孵育30 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色、脱水、透明和固定。免疫组化染色操作步骤按照试剂盒说明书进行，以PBS 代替一抗作为阴性对照。

结果判定：由两名病理专家依照评分等级标准[7]进行免疫组化评分，BCA7 依据染色强度和阳性细胞所占比例进行评分：依据染色强度，无染色计0分，弱染色计1 分，中等强度染色计2 分，强染色计3 分；依据阳性细胞所占比例，阳性细胞所占比例为0%计0 分，阳性细胞所占比例为1%～50%计1分，阳性细胞所占比例为51%～75%计2 分，阳性细胞所占比例为≥76%计3 分；将染色强度和阳性细胞所占比例评分相加，≤4 分为BCA7 低表达，≥5 分为高表达。IMP3 定位于细胞质，细胞质呈棕褐色或棕黄色染色为阳性，依据染色强度和阳性细胞所占比例进行评分：依据染色强度，无染色计为0分，淡黄色染色计1 分，棕黄色染色计2 分，棕褐色染色计3分；依据阳性细胞所占比例，阳性细胞所占比例≤5%计0分，阳性细胞所占比例为6%～25%计1分，阳性细胞所占比例为26%～50%计2 分，阳性细胞所占比例≥51%计3分；将染色强度和阳性细胞所占比例评分相加，＞1分为阳性，0～1分为阴性。

1.3 随访方法

采用电话、短信、回院复查和上门随访的方式对121 例膀胱癌患者进行为期3 年的随访，随访时间10～60 个月，平均（27.40±14.80）个月，以患者死亡或随访结束为随访终点，随访截止时间为2018年6 月，记录患者的生存情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0 软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；IMP3 和BCA7 蛋白表达情况与膀胱癌患者预后的影响因素采用Logistic 回归分析；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IMP3 和BCA7 蛋白的表达情况

121 例膀胱癌患者膀胱癌组织中IMP3 阳性表达率65.29%（79/121），高于癌旁正常组织的0%；121例膀胱癌患者膀胱癌组织中BCA7蛋白的高表达率为73.55%（89/121），低表达率为26.45%（32/121）。

2.2 不同临床特征膀胱癌患者膀胱癌组织中IMP3和BCA7 蛋白表达情况的比较

不同性别、年龄、肿瘤直径及肿块数目膀胱癌患者膀胱癌组织中IMP3 和BCA7 蛋白表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；不同组织学分级、T 分期和复发情况膀胱癌患者膀胱癌组织中IMP3 蛋白表达情况比较，差异均有统计学意义（χ2=22.049、7.501、4.061，P＜0.05）。不同组织学分级、T 分期和复发情况膀胱癌患者膀胱癌组织中BCA7 蛋白表达情况比较，差异均有统计学意义（χ2=7.053、7.646、11.790，P＜0.05）。（表1）

2.3 不同IMP3 与BCA7 蛋白表达情况膀胱癌患者3 年生存率比较

IMP3 阳性表达宫颈癌患者的3 年生存率为35.44%（27/79），低于阴性表达患者的65.62%（21/32），差异有统计学意义（χ2=9.117，P=0.002）；BCA7 蛋白高表达宫颈癌患者的3年生存率为42.70%（38/89），低于低表达患者的59.38%（19/32），差异有统计学意义（χ2=13.464，P=0.000）。

2.4 膀胱癌患者预后情况影响因素的单因素及多因素分析

经单因素分析可见，组织学分级、T 分期、复发情况、IMP3 蛋白表达情况和BCA7 蛋白表达情况可能与膀胱癌患者的预后有关（P＜0.05）。多因素Logistic 回归分析结果显示，组织学分级为G3级、T分期为T2～T4期、IMP3 阳性表达与BCA7 高表达是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。（表2）

3 讨论

胰岛素样生长因子家族mRNA 结合蛋白成员是RNA 结合蛋白IMP3。基因筛选法发现，IMP3在胰腺癌和良性胰腺组织中表达情况不同，为肿瘤组织表达的K 同源蛋白[8]。此外，IMP3 是一种分泌性蛋白，可结合胰岛素样生长因子（insulin-like growth factor，IGF），对细胞的生长、分化、凋亡、运动和黏附起调节作用，对IGF 与IGF2 型受体发挥作用，对凋亡抑制效应、有丝分裂效应和细胞运动起促进作用[9-10]。研究发现，肿瘤组织的发生发展与IMP3 有关[11]。本研究采用免疫组化法检测IMP3 蛋白在膀胱癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，结果发现，膀胱癌组织中IMP3 蛋白的表达高于癌旁正常组织，表明IMP3 蛋白在膀胱癌组织中阳性表达，此外，本研究结果显示，IMP3 蛋白的表达可能与肿瘤组织学分级、T 分期和复发情况有关，即肿瘤分级越高、T 分期越晚、肿瘤复发，IMP3蛋白阳性表达率就越高，表明肿瘤的恶性程度与IMP3 表达情况有关。相关分析结果显示，IMP3 阳性表达患者3 年生存率低于阴性表达患者，多因素Logistic 回归分析结果显示，IMP3 蛋白表达阳性是膀胱癌患者预后的独立危险因素，进一步表明IMP3 表达参与了膀胱癌的发生发展过程，影响了膀胱癌患者的预后，IMP3 表达可作为预测膀胱癌患者预后的重要指标之一。

表1 不同临床特征膀胱癌患者膀胱癌组织中IMP3 和BCA7 蛋白的表达情况（n=121）

表2 膀胱癌患者预后情况影响因素的单因素及多因素Logistic 回归分析

目前，膀胱癌发病原因与机制尚不明确，但可知其与激活的原癌基因与失活的抑癌基因有关，在膀胱癌发生发展中发挥重要作用[12]。研究结果表明，患者的预后与多种肿瘤标志物相关，如RNA结合基序蛋白3、脆性组氨酸三联体、胞内连接蛋白α、上皮型钙黏蛋白和原钙黏蛋白10 等[13～15]，但关于预测膀胱癌患者预后生物分子标志物的研究较少，这可能与尚未完全阐明的膀胱癌患者的具体发病机制有关。既往逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR）验证及生物信息学筛选发现，BCA7 已确定为膀胱癌高表达基因，癌旁正常组织中BCA7 mRNA水平明显低于膀胱癌组织，全身其他正常组织中几乎未发现BCA7 mRNA的表达，表明BCA7基因在膀胱癌发生发展中可发挥重要作用，对膀胱癌患者的预后有预测作用[16～18]。本研究经免疫组化法检测发现，BCA7 蛋白在癌旁正常组织中的表达水平明显低于膀胱癌组织，表明BCA7 蛋白在癌旁正常组织中低表达，在膀胱癌组织中高表达，符合既往mRNA 表达水平结果[19]。本研究结果显示，膀胱癌组织学分级、T分期和复发情况与BCA7 蛋白表达水平有关，组织学分级越高、T分期越晚、肿瘤复发，BCA7 蛋白高表达率越高，这可能与膀胱癌恶性程度和基因表达情况有关，BCA7蛋白可作为膀胱癌的原癌基因。本研究比较BCA7蛋白高表达患者与低表达患者的生存率，结果显示，BCA7 蛋白高表达患者的生存率低于低表达患者，同时，多因素Logistic 回归分析也发现，BCA7 蛋白表达水平是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素，表明BCA7 蛋白高表达膀胱癌患者的预后较差，BCA7 蛋白在肿瘤进展中发挥致癌作用，可能为一个理想的膀胱癌预后标志物[20]。

综上所述，IMP3与BCA7蛋白在膀胱癌组织中高表达，其表达情况与患者的预后相关，IMP3与BCA7蛋白可作为评估膀胱癌患者预后的有效标志物。