不同产地卷柏属药用植物的HPLC指纹图谱研究

2020-02-22 01:03李焕婷贾克文高博闻
北方药学 2020年11期
关键词:产地甲醇供试

李焕婷,安 明,贾克文,张 茹,高博闻

(包头医学院,内蒙古 包头 014040)

1 前言

在我国出产的卷柏属植物约为70多种,其中有20多种具有药用价值[1],广泛分布于我国东北、华北、华东、中南及陕西、四川等地。垫状卷柏又名九死还魂草,为中国药典2015年版所收载品种,其化学成分结构复杂,生物活性强,具有活血通经之功效[2]。

近几年,越来越多的学者对卷柏中化学成分进行分析,因此,在卷柏中通过提取分离并鉴定出一系列新的、复杂的化合物。其中,黄酮类、酚炔类等化合物都具有较好的药理活性。卷柏分布极其广泛,具有良好的药用价值,但是对于不同产地卷柏化学成分的研究比较少。本次实验以我国不同地区的卷柏为研究对象,利用HPLC法分析不同地区卷柏化学成分的差异;通过指纹图谱处理软件分析不同种卷柏的共有峰、相似度,为其临床用药、质量控制提供依据。

2 实验仪器与材料

2.1 实验仪器

实验中主要仪器见表1。

表1 实验仪器

2.2 实验材料与试剂

实验中所用到的五种产地卷柏及所用试剂见表2和表3。

表2 卷柏药材来源

表3 实验试剂

3 实验方法

3.1 色谱条件

色谱柱为Ultimate LP-C18(4.6mm×250mm,5.0μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液,采用梯度洗脱(见表4),流速1.0mL/min,检测波长330nm,柱温为30℃,进样量为20μL。

表4 流动相梯度洗脱条件

3.2 供试品溶液的制备

称取卷柏粉末约2g,置于小烧杯中,精密加入80%(体积分数下同)甲醇20mL,保鲜膜密封,用电子天平称其质量,在50℃下超声提取40min,放冷,然后再一次称其质量,用80%甲醇补足差量,摇匀,过滤,再经0.45μm的微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液进样。

3.3 方法学考察

3.3.1精密度实验

精密量取供试品溶液S3,按照3.1中所列的色谱条件24小时内连续进样六次。

3.3.2重复性实验

精密量取供试品溶液S3六份,按照3.1中所列的色谱条件24小时内连续进样六次。

3.3.3稳定性实验

精密量取供试品溶液S3,按照2.1中所列的色谱条件24小时内每隔4小时检测一次。

4 结果与讨论

4.1 卷柏样品HPLC指纹图谱与相似度评价

按照3.1中所列的色谱条件,测出5个样品的高效液相色谱图,将5个色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版。经系统处理,得到5种产地供试品的相似度(见表5)、共有峰(见图1),最终确立了6个峰为5个样品的共有峰,同时得到这6个共有峰在5个供试品HPLC色谱图中的保留时间、峰面积(见表6)。共有峰的选取原则为5批样品都含有的峰,且出峰时间合适并与其临近的峰分离良好[3]。

表5 HPLC图谱相似度评估结果

表6 共有峰的峰面积与保留时间

4.2 方法学考察结果

4.2.1精密度实验

实验表明,主要共有峰相对保留时间RSD均小于2.67%,相对峰面积RSD均小于4.31%,表明该方法精密度良好。

4.2.2重复性实验

实验表明,主要共有峰的相对保留时间RSD小于1.78%,相对峰面积RSD小于2.56%,表明该方法重复性良好。

4.2.3稳定性实验

实验显示,共有峰的相对保留时间均小于2.93%,相对峰面积的RSD值小于1.24%,表明样品溶液在一定时间内稳定性好。

4.3 讨论

4.3.1检测波长的选择

于全波长检测器下对供试品溶液进行分析,在波长330nm处色谱峰最多、紫外吸收良好,最终确定在330nm波长下对供试品溶液进行检测。

4.3.2流动相的选择

通过选用不同流动相(甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸)、不同洗脱条件进行实验,结果甲醇-0.1%磷酸水在相应梯度条件下得到的色谱峰分离效果最好。

5 结论

在指纹图谱处理软件中,以湖北卷柏HPLC图谱为参照,以中位数法生成对照图谱,时间窗宽度为0.20,进行色谱峰自动匹配,生成了5种产地卷柏的指纹图谱,并得到6个分离度较好的共有峰;各共有峰的相对保留时间一致,相对峰面积则存在较大差异,说明不同来源的卷柏生长表型不同,但含有一定的共有成分,只是含量有所差异;5种产地卷柏相似度高达0.901~0.983,说明各地卷柏所含化学成分极其相似。该实验方法简单易行,可作为卷柏质量控制及指纹图谱建立的方法。

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