牙周牙髓联合病变牙周袋内厌氧菌的培养检测和药敏试验

林璐，张春春，沈肖明

龙岩人民医院 （福建龙岩 364000）

牙周牙髓联合病变指患牙同时出现牙髓炎症、牙周破坏的一种细菌感染性疾病[1]。目前，牙周牙髓联合病变是导致失牙的主要原因，备受人们重视，而彻底消除感染源是该病的主要治疗原则。相关研究发现，厌氧菌感染是导致牙周牙髓联合病变牙周袋发生的主要原因，临床多采取抗生素治疗[2]。基于此，对牙周牙髓联合病变牙周袋内厌氧菌进行培养检测，并开展药敏试验，可以提高抗生素的治疗效果，对改善患者症状，提高患者生命质量具有重要意义。本研究对74例牙周牙髓联合病变患者厌氧菌进行培养检测，并开展药敏试验，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年4月至2017年4月我院收治的牙周牙髓联合病变患者74例，其中男38例，女36例；年龄24～68岁，平均（46.86±3.14）岁。本研究获得我院医学伦理委员会审核批准。

诊断标准：存在牙髓炎、根尖周炎病史；X线检查显示根尖周区、牙根侧存在齿槽骨破坏的X线透影区，可探到牙周袋、电活力测验敏感、温度测验疼痛（或者无反应）[3]。

纳入标准：确诊为牙周牙髓联合病变；患者自愿签署同意书[4]。

排除标准：3个月内应用过抗生素治疗的患者；存在全身性疾病的患者；精神障碍患者[5]。

1.2 细菌培养及检测

（1）试剂：10%羊血Oxoid布氏血琼脂培养基，10%脱纤维羊血的Oxoid 厌氧菌基础琼脂培养基，青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林（所有药物试剂均由中国药品生物制品检定所提供）。（2）采样及接种：对患者进行采样前，先用浓度为3%的过氧化氢（广东恒健制药有限公司，国药准字H44023919，100 ml/瓶）漱口，用纱条隔湿，用碘酊、乙醇棉球对患牙、牙龈进行消毒3次，达到无菌；去除菌斑后，将纸尖放置在深牙周袋中20 s，在1 h内将其置于羊血琼脂培养基平板上，放入厌氧袋内，进行厌氧培养。（3）培养及鉴定：设置培养温度为35～38 ℃，时间为48～72 h，CO2、H2、N2浓度分别为5%、10%、85%；应用的培养基为10%脱纤维羊血的Oxoid厌氧菌基础琼脂培养基、选择性培养基（加入卡那霉素100 mg/L），培养后得到的细菌进行耐氧试验2次，保证所有细菌均为专性厌氧菌；对各致病菌进行分离、革兰染色，在电子显微镜下进行观察，并应用API20a试剂（厌氧菌鉴定试剂条，江苏泽源生物科技有限公司）进行生化鉴定；加入甘油、脱纤维羊血（20%、80%）在温度为-70 ℃下进行保存，留备药敏试验。

1.3 药敏试验

采用琼脂稀释法进行药敏试验，将菌落悬浮在厌氧琼脂Wikins-Chalgren液体培养基（上海信裕生物科技有限公司）中，调整菌落浓度至1×106cfu/ml，借助多点接种器点种于10%脱纤维羊血布氏培养基中（含抗生素），培养时间为45 h，最低抑菌浓度（MIC）为无菌落形成或者形成菌落数量低于5个，用2个10%羊血布氏平板（不含抗生素）分别作为有氧对照、厌氧对照，质控菌株为 ATCC25285（脆弱拟杆菌）。以美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准为依据，对各抗生素的耐药浓度判断如下：青霉素、甲硝唑、克林霉素、阿莫西林最低抑菌浓度分别为不低于2 mg/L、32 mg/L、8 mg/L、16 mg/L[6]。

2 结果

2.1 厌氧菌分布结果

74例牙周牙髓联合病变患者经耐氧试验，结果显示，厌氧菌检出率为100%，分离厌氧菌株77株，其中牙周源性牙周牙髓联合病变培养的厌氧菌37株（48.05%），牙髓源性牙周牙髓联合病变培养的厌氧菌40株（51.95%），经生化鉴定，以链球菌属最多，其次为普雷沃属，见表1。

表1 厌氧菌分布结果[株（%）]

2.2 药敏试验结果

药敏试验结果显示，克林霉素耐药最高，其次为青霉素，见表2。

表2 药敏试验结果

3 讨论

牙髓组织和牙周组织在解剖学方面是相互沟通的，因此两者的感染和病变可以互相影响和扩散，导致联合病变的发生。牙周牙髓联合病变的发生包括3种：（1）牙周发生细菌感染进而导致牙髓病变；（2）牙髓病变感染导致牙周病变；（3）牙周、牙髓独立存在，并出现交叉感染[7]。牙周牙髓联合病变的发生对人们的牙齿健康具有极大的危害，且影响人们的生活与工作，因此，采取积极的治疗至关重要[8]。在对患者进行治疗时，选取有效的抗生素将直接影响整体疗效，因此，治疗前需要掌握致病菌分布情况，并进行药敏试验，找出最敏感的抗生素，从而合理应用，达到治疗的目的。

本研究结果显示，分离出的77株厌氧菌株，经生化鉴定，以链球菌属最多，其次为普雷沃属；耐药试验方面，克林霉素耐药最高，分析原因在于，克林霉素可以渗透牙骨质，对生物膜形成具有抑制作用[9-10]。

综上所述，牙周牙髓联合病变与厌氧菌关系密切，药敏试验可以找出敏感的治疗药物，为临床治疗提供借鉴依据。