全血中EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌患者预后中的临床意义

吴非常，温尊北，吴祥成，谢 地

(高州市人民医院肿瘤内一区，广东 茂名 525200)

鼻咽癌为比较常见的恶性肿瘤之一，在肿瘤细胞中，EB病毒属于疱疹病毒。在人体中，其存在形式主要以潜伏感染为主。所以在全血中，EBV的基因产物已经出现。EBV、NPC之间的关系密不可分的，可以为诊断NPC提供可行依据。现阶段，检测血液中，EBV基因的方法，常规聚合酶链反应、实时荧光定量PCR等得到了广泛的应用[1]，其中，后者具有良好的灵敏度，所以在检测NPC患者全血中的EBV、DNA时，实时荧光定量PCR得到了充分的体现。

1 资料与方法

1.1一般资料：初诊NPC组为30例，NPC放疗组为20例，NPC伴转移患者为13例，NPC治愈后复查组为20例，其中，男40例，女43例，年龄35～78岁，平均(56.5±10.6)岁。加强实时荧光定量PCR方法的应用，对标本中EBV、DNA含量进行检测。

1.2方法

1.2.1样本采集:在检测EBV、DNA时，乙二胺四乙酸二钠抗凝得到了广泛的应用，而且各个研究对象采集的外周血应为3ml，冻存的最佳温度应为-20℃。

1.2.2DNA提取与基因扩增：使用核酸提取试剂盒，将每一个标本中的DNA提取出来，借助nanodrop紫外分光光度计，对核算的OD260/280和OD230/260的比值进行检测[2]，以此来给予提取核酸的浓度和纯度的评估提供一定的依据。

1.3实时荧光定量PCR测定结果判读：在实时荧光定量PCR测定过程中，如果PCR循环次数增加，会增强样本的相对荧光强度。在设置基线时，第1～15个循环中的平均相对荧光强度×10倍标准差，保证与此基线时所经历的循环次数相符合，称为循环阀值(Ct)。在实际操作过程中，获取Ct值以后[3]，结合值大小，可以对所测标本的阳性与否进行判断，再借助标准曲线，定量分析未知模板，从而对该样本的DNA含量进行计算。

1.4统计学分析方法：选用SPSS15.0进行数据处理，计量资料用均数±标准差表示，组间比较采用t检验；计数资料用率(%)表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

4组患者全血中EBV、DNA的检出率和拷贝数对数值对比如表1所示，组间EBV、DNA的检出率对比，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

现阶段，在治疗NPC患者过程中，通过对全血中EBV、DNA含量的反复检测，旨在为监测治疗效果提供一定的帮助。一般来说，NPC对放疗具有一定的敏感性，但是治疗仍然难以取得成功。这主要是因为根治放疗后的远处转移等所致。在本次研究中[4]，主要分为初诊NPC组、NPC伴转移组、NPC放疗组、NPC治愈组[5]，旨在对NPC患者是否对放疗产生敏感性进行研究，而且也可以对患者的治疗效果进行有效预测。

在本文中，借助荧光定量PCR法[6]，对不同组间患者血液中的EBV、DNA进行检测，结果阳性率分别76.67%、100%、61.54%、25%，而且不同组间的平均拷贝数的对数值分别为4.56、4.97、2.06、1.35，表明NPC组比放疗组、治愈后复查组要高一些，而且放疗组也比治愈后复查组要高，这与其他研究结果相一致，提示EBV极容易造成NPC的出现。

表14组患者全血中EBV、DNA的检出率和拷贝数对数值对比

组别例数EBV、DNA检出率[例(%)]EBV、DNA平均拷贝数的对数值初诊NPC组3023(76.67)4.56NPC伴转移组2020(100.00)4.97NPC放疗组138(61.54)2.06NPC治愈组205(25.00)1.35P值<0.05<0.05