血清和全血平板凝集方法检测鸡白痢抗体的差异比较

刘洋，潘海萍，陈轮锋，严丽端，严专强，王占新，鲁俊鹏

（1.温氏食品集团股份有限公司，广东 新兴 527439；2.广东温氏南方家禽育种有限公司，广东 新兴 527439）

鸡白痢沙门菌可引起雏鸡大批量死亡， 产蛋鸡产蛋率下降，成年鸡多呈隐性感染，可长期带毒和排毒。鸡白痢沙门氏菌为细胞内寄生菌，利用药物治疗只能临床治愈而不能根除， 且药物预防和治疗容易产生耐药性， 给家禽养殖业带来严重的经济损失[1]，被中国农业部列为二类动物疫病。《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020）》中明确要求到2020 年全国所有种鸡场沙门氏菌病达到净化标准。 平板凝集试验以其方便、快速、实用等特点成为国内外鸡白痢抗体检测最常用的诊断方法之一，检测对象主要包括全血、血清等。 目前我国大部分养殖场都采用平板凝集的方法开展鸡白痢沙门氏菌的净化工作。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器 鸡白痢-鸡伤寒多价染色抗原、鸡白痢-鸡伤寒阳性血清和阴性血清均购自中国兽医药品监察所。

1.2 试验方法 将中海的凝集抗原在室温回温30min，采集100 只（大部分为即将淘汰的阳性鸡）20 周龄的竹丝鸡进行平板凝集试验测定鸡白痢抗体，每份样品均按照4 种不同方法进行检测，比较各检测方法检测结果的差异， 具体操作按照试剂说明书进行，见表1。 结果判定以阴、阳性对照血清成立时，在2min 内出现肉眼可见的75%的片状明显凝集颗粒判为强阳，50%凝集颗粒判为弱阳，25%小凝集颗粒则判为疑似。

表1 样品的不同检测方法

2 结果与分析

2.1 不同检测方法的阳性率 全血平板凝集试验中， 将全血与中海抗原分别按照1:1、2:1、3:1 混合进行反应，血清平板凝集试验则按照血清与抗原1:1 反应，试验的操作与结果判断均按说明书进行。检测结果见表2 所示。

表2 全血和血清平板凝集检测结果

从表2 可知，血清平板凝集阳性率为81%，全血与抗原2:1 和3:1 阳性率均为79%，全血与抗原1:1 阳性率最低，仅71%。因此，采用血清平板凝集检测鸡白痢抗体，阳性率最高，阴性率最低。

2.2 组间检测结果的比较分析 在所有的全血平板凝集试验中 （1:1、2:1、3:1）， 全血与抗原2:1和3:1 检出率高于1:1， 且全血与抗原2:1 和3:1检出的阳性样品包括全血和抗原1:1 检出的所有阳性样品。全血和抗原按照2:1 和3:1 检测结果相差不大，仅4 份样品检测结果具有差异，全血和抗原2:1 检出为强阳， 全血和抗原3:1 检出为弱阳。全血与抗原1:1 检出的有17 份弱阳性和8 份疑似阳性样品， 采用2:1 则分别检出为强阳性和弱阳性。因此，在全血平板凝集实验中，全血与抗原2:1检测效果优于3:1 和1:1。

全血与血清平板凝集对比试验中， 全血和抗原2:1 与血清平板凝集阳性符合率最高，达97.53%。所有阳性样品中，仅2 份样品检测结果具有差异，即血清平板凝集检测为弱阳，而全血与抗原2:1 凝集试验检测为可疑。

3 讨论

目前，在鸡白痢抗体检测方法中，微量凝集试验、ELISA 和平板凝集试验等方法较常见。 微量凝集试验则采用96 孔板进行，容易判断结果，但操作较繁琐，持续时间长（37℃，18～24h）[2]。 ELISA 适用于实验室大批量检测，检测灵敏度高，但目前国内商品化的ELISA 试剂盒大部分都是针对D 群沙门氏菌， 可检出鸡白痢沙门氏菌、 禽伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等产生的抗体[3]，检出率高于实际鸡白痢阳性率。平板凝集试验存在易于操作、反应时间短、成本低的优势，但通过肉眼是否出现凝集颗粒对读取结果的工作人员要求高， 是目前最常用检测鸡白痢抗体的方法。

平板凝集主要包括全血平板凝集和血清平板凝集两种， 其中全血平板凝集的优点在于反应速度快、耗时短、操作简便、适合在现场进行大批量的检测等优点， 在生产实践中多被采用[4]；但是该方法检测结果容易受肉鸡舍环境温湿度、 粉尘等干扰，且室温过高容易造成全血凝固的现象；血清平板凝集可在实验室进行， 可保证实验室的检测环境符合要求，但工作量增加，耗时长，不能当场检测出结果并淘汰阳性鸡。

本研究通过对比不同比例全血和抗原平板凝集与血清平板凝集试验， 发现血清平板凝集检测方法阳性检出率高于全血平板凝集， 且包括全血平板凝集所有的阳性样品， 这与蒋维维等的报道一致[5,6]。 在全血平板凝集中以全血与抗原2:1 混合的检测效果最佳。 因此， 鸡场进行鸡白痢净化时，建议首选血清平板凝集的方法进行检测，有利于推进净化历程。 对于无法大规模推广血清平板凝集的种鸡场， 在保证鸡舍环境符合检测要求的前提下，可考虑采用全血与抗原2:1 的的方法。

鸡白痢的防控和净化是一项长期而系统的工程，不仅需要更精确的检测方法来淘汰阳性鸡，更重要的应是以生物安全措施为重点，落实“鼠不进舍、料不见天、粪不落地、精准消毒、精准检测”等生物安全等细节措施[7]，做好鸡群各个阶段的饲养管理、公母鸡分开饲养、加强卫生措施等环节，切断水平传播与垂直传播等环节，消除病鸡、带菌鸡和隐性感染鸡， 避免带菌公鸡的精液传染给母鸡的人工授精途径[8]，逐步实现鸡白痢的净化。