草果化学成分的研究

柳 航 王 敏 许 耶 张海霞 葛卫红∗

（1.南京大学医学院附属鼓楼医院药学部， 江苏 南京210008； 2.南京鼓楼大药店有限公司， 江苏 南京210008）

草果为姜科豆蔻属植物草果Amomum tsao⁃koCrevost et Lemarie 的干燥成熟果实，别名草果仁、草果子，主产于广西、云南、贵州等省，其功效燥湿温中、截疟除痰，用于寒湿中阻、脘腹胀痛、痞满呕吐、疟疾寒热、瘟疫发热。前期研究表明，草果主要含有萜类（二萜、单萜）、黄酮类、酚类、二芳基庚烷类成分［1⁃4］，其提取物具有显著的抗炎、抗氧化作用［5⁃6］。本实验对草果95%乙醇提取物进行初步研究，从中分离得到10 个化合物，化合物2、4～8 为首次从该植物中发现。

1 材料

Waters ACQUITY UPLC I⁃Class ／XEVO TQD 超高效液相质谱联用仪（美国Waters 公司）；Varian Mercury⁃400 核磁共振仪（美 国Varian 公 司）；INOVA⁃600 核磁共振仪（美国Inova 公司）；薄层色谱用硅胶GF254、柱色谱硅胶（100～200、200～300 目）（青岛海洋化工厂）；安捷伦1200 高效液相色谱仪带二极管阵列检测器（美国安捷伦公司）；QuikSep 50 I 型中压液相、QuikSep⁃50Ⅱ型高压制备液相色谱仪（北京慧德易科技有限公司）。YMC⁃Park ODS⁃A C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）、YMC⁃Pack Ph（20 mm×250 mm，5 μm）分析柱，YMC⁃Pack Ph（4.6 mm×150 mm，5 μm）、YMC⁃Park ODS⁃A C18（20 mm×250 mm，5 μm）制备柱（日本YMC 公司）。聚酰胺填料（河北沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；C18反相ODS 填料（日本YMC 公司）。所用试剂均为分析纯或色谱纯（国药集团化学试剂有限公司）。

草果2017 年6 月购自安徽亳州（产地云南曲靖），经南京鼓楼医院张海霞副主任中药师鉴定为姜科豆蔻属植物草果Amomum tsao⁃koCrevost et Lemarie 的干燥成熟果实，样本保存于南京鼓楼医院临床药学研究室（GL20170001）。

2 提取与分离

20 kg 药材用95% 乙醇煎煮提取3 次，每次2 h，合并提取液，60 ℃减压回收溶剂得到10 L 浓缩液，等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取3 次，萃取液减压浓缩，得到石油醚萃取物102.4 g、乙酸乙酯萃取物280.6 g、正丁醇萃取物117.3 g。乙酸乙酯萃取物（280.6 g）经聚酰胺经柱色 谱，乙 醇⁃水（0 ∶ 100、30 ∶ 70、60 ∶ 40、95 ∶5）洗脱，得到4 个流分A～D，流分B 经硅胶柱，石油醚⁃乙酸乙酯（100 ∶0～1 ∶2）梯度洗脱，得到15 个流分B1～B15，B4经高压制备HPLC 分离纯化，得化合物5（11 mg）、6（16 mg）、8（9 mg）；B13经高压制备HPLC 分离纯化，得化合物9（16 mg）、10（26 mg）。流分C 经硅胶柱，石油醚⁃乙酸乙酯（100 ∶8～1 ∶2）梯度洗脱，得21 个流分C1～C21，C17经高压制备HPLC 分离纯化，得化合物4（15 mg）、7（13 mg）。流分D 通过中压制备HPLC，甲醇⁃水（20 ∶80～45 ∶55）梯度洗脱3 h，每约350 mL 收集1 份，得到24 个流分D1～D24，D3通过高压制备HPLC 得化合物1（7 mg），D5得化合物2（8 mg），D12得化合物3（24 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：111 ［M＋H］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C6H6O2。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：8.85（2H，s，1，6⁃OH），6.61（2H，m，H⁃2，5），6.76（2H，m，H⁃3，4）；13C⁃NMR（100 MHz，DMSO⁃d6）δ：145.6（C⁃1，6），116.1（C⁃2，5），119.8（C⁃3，4）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为邻苯二酚。

化合物2：白色针晶（甲醇）。ESI⁃MSm／z：189 ［M ＋Na］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分 子式为 C9H10O3。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.08（1H，d，J＝7.8 Hz，H⁃2，6），6.74（1H，d，J＝7.8 Hz，H⁃3，5），2.82（1H，t，J＝7.2 Hz，H⁃1′），2.61（1H，t，J＝7.2 Hz，H⁃2′）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：132.9（C⁃1），131.5（C⁃2，6），115.9（C⁃3，5），159.3（C⁃4），36.9（C⁃1′），30.7（C⁃2′），178.5（C⁃3′）。以上数据与文献 ［8］基本一致，故鉴定为对羟基苯丙酸。

化合物3：白色固体（甲醇）。ESI⁃MSm／z：181 ［M ＋H］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C9H8O4。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.11（1H，d，J＝1.8 Hz，H⁃2），6.82（1H，d，J＝8.4 Hz，H⁃5），6.99（1H，dd，J＝8.4，1.8 Hz，H⁃6），7.45（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃7），6.33（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃8）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：128.5（C⁃1），114.9（C⁃2），147.1（C⁃3），149.2（C⁃4），115.3（C⁃5），121.6（C⁃6），146.7（C⁃7），115.3（C⁃8），172.6（C⁃9）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为咖啡酸。

化合物4：棕色无定形粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：335 ［M＋Na］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C15H20O7。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.06（1H，d，J＝1.8 Hz，H⁃3），6.76（1H，dd，J＝7.8，1.8 Hz，H⁃5），6.78（1H，d，J＝7.8 Hz，H⁃6），3.29（2H，d，J＝6.0 Hz，H⁃7），5.95（1H，ddt，J＝16.8，10.2，6.0 Hz，H⁃8），5.02（1H，m，H⁃9a），5.06（1H，m，H⁃9b），4.74（1H，d，J＝7.2 Hz，H⁃1′）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：140.1（C⁃1），147.5（C⁃2），120.1（C⁃3），131.7（C⁃4），125.6（C⁃5），117.8（C⁃6），41.4（C⁃7），134.0（C⁃8），116.5（C⁃9），103.5（C⁃1′），75.0（C⁃2′），78.0（C⁃3′），71.5（C⁃4′），78.5（C⁃5′），62.6（C⁃6′）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为1⁃O⁃β⁃D⁃吡喃葡萄糖⁃2⁃羟基⁃4⁃烯丙基苯。

化合物5：淡黄色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：279 ［M＋H］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C15H18O5。1H⁃NMR（400 MHz，DMSO⁃d6）δ：6.24（1H，d，J＝9.2 Hz，H⁃2），7.96（1H，d，J＝9.2 Hz，H⁃3），7.53（1H，d，J＝8.8 Hz，H⁃5），7.03（1H，d，J＝8.8 Hz，H⁃6），3.86（3H，s，7⁃OCH3），2.87（1H，m，H⁃1′a），2.80（1H，m，H⁃1′b），3.52（1H，m，H⁃2′），1.13（3H，s，H⁃4′），1.13（3H，s，H⁃5′）；13C⁃NMR（100 M Hz，DMSO⁃d6）δ：160.6（C⁃2），112.6（C⁃3），144.8（C⁃4），116.1（C⁃4a），126.9（C⁃5），107.9（C⁃6），160.5（C⁃7），56.2（7⁃OCH3），112.1（C⁃8），153.1（C⁃8a），25.0（C⁃1′），72.0（C⁃2′），76.2（C⁃3′），25.6（C⁃4′），25.5（C⁃5′）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为2′，3′⁃dihydroxyl⁃osthole。

化合物6：无色针状结晶（甲醇）。ESI⁃MSm／z：197 ［M＋H］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C11H16O3。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：5.79（1H，s，H⁃3），2.02（1H，m，H⁃5a），1.56（1H，dd，J＝14.4，3.6 Hz，H⁃5b），4.24（1H，m，H⁃6），2.45（1H，dt，J＝13.8，3.6 Hz H⁃7a），1.77（1H，overlapped，H⁃7b），1.79（3H，s，H⁃8），1.31（3H，s，H⁃9），1.50（3H，s，H⁃10）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：175.3（C⁃2），114.2（C⁃3），186.5（C⁃3a），38.0（C⁃4），48.8（C⁃5），68.1（C⁃6），47.3（C⁃7），89.8（C⁃7a），28.3（C⁃8），31.9（C⁃9），27.8（C⁃10）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为（＋）⁃loliolide。

化合物7：白色无定形粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：257 ［M ＋ H］＋，结 合1H⁃NMR 和13C⁃NMR谱，推测其分子式为C15H28O3。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：3.20（1H，dd，J＝11.4，4.2 Hz，H⁃1），1.92（1H，m，H⁃2a），1.54（1H，m，H⁃2b），1.67（1H，m，H⁃3a），1.50（1H，m，H⁃3b），1.55（1H，m，H⁃5），1.63（1H，m，H⁃6a），1.51（1H，m，H⁃6b），1.51（1H，m，H⁃8a），1.35（1H，m，H⁃8b），1.66（1H，m，H⁃9a），1.38（1H，m，H⁃9b），1.64（1H，m，H⁃11），0.93（3H，d，J＝6.6 Hz，H⁃12），0.91（3H，s，J＝6.6 Hz，H⁃13），0.99（3H，s，H⁃14），1.06（3H，s，H⁃15）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：78.2（C⁃1），27.2（C⁃2），39.4（C⁃3），70.0（C⁃4），44.5（C⁃5），28.4（C⁃6），72.0（C⁃7），30.0（C⁃8），34.6（C⁃9），38.8（C⁃10），39.0（C⁃11），17.2（C⁃12），17.4（C⁃13），11.8（C⁃14），29.5（C⁃15）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为1β，4β，7α⁃trihydroxy⁃eudesmane.

化合物8：白色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：297 ［M＋H］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C15H20O6。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.13（1H，s，H⁃2），7.86（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃4），6.45（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃5），2.14（3H，brs，H⁃6），2.29（1H，dd，J＝13.8，7.2 Hz，H⁃3′a），1.91（1H，dd，J＝13.8，10.2 Hz，H⁃3′b），3.87（1H，m，H⁃4′），1.88（1H，dd，J＝13.2，11.4 Hz，H⁃5′a），1.75（1H，dd，J＝13.2，7.2 Hz，H⁃5′b），1.35（3H，s，H⁃7′），1.11（3H，s，H⁃9′）；13C⁃NMR（150 MHz，CD3OD）δ：166.4（C⁃1），118.8（C⁃2），149.9（C⁃3），132.1（C⁃4），131.5（C⁃5），20.4（C⁃6），81.9（C⁃1′），87.6（C⁃2′），42.0（C⁃3′），64.2（C⁃4′），40.6（C⁃5′），52.2（C⁃6′），17.9（C⁃7′），177.9（C⁃8′），14.0（C⁃9′）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为R⁃5⁃（1R，5S⁃dimethyl⁃3R，4R，8S⁃trihydroxy⁃7⁃oxabicyclo ［3，2，1］⁃oct⁃8⁃yl）⁃3⁃methyl⁃2Z，4E⁃pentadienoic acid。

化合物9：黄色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：347 ［M＋Na］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C20H20O4。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.92（2H，t，J＝7.2 Hz，H⁃1），2.86（2H，t，J＝7.2 Hz，H⁃2），6.29（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃4），7.42（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H⁃5），6.89（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H⁃6），6.99（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃7），7.06（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃2′，6′），6.72（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃3′，5′），7.16（1H，brs，H⁃2″），6.81（1H，d，J＝8.4 Hz，H⁃5″），7.03（1H，d，J＝8.4 Hz，H⁃6″），3.91（3H，s，3″⁃OCH3）；13C⁃NMR（125 MHz，CD3OD）δ：31.1（C⁃1），43.4（C⁃2），202.7（C⁃3），128.9（C⁃4），146.0（C⁃5），125.2（C⁃6），143.8（C⁃7），133.2（C⁃1′），130.3（C⁃2′，6′），116.2（C⁃3′，5′），156.6（C⁃4′），129.7（C⁃1″），111.1（C⁃2″），149.2（C⁃3″），149.4（C⁃4″），116.5（C⁃5″），122.9（C⁃6″），56.5（3″⁃OCH3）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为tsaokoarylone。

化合物10：黄色粉末（甲醇）。ESI⁃MSm／z：317 ［M＋Na］＋，结合1H⁃NMR 和13C⁃NMR 谱，推测其分子式为C19H18O3。1H⁃NMR（600 MHz，CD3OD）δ：2.93（2H，t，J＝7.2 Hz，H⁃1），2.86（2H，t，J＝7.2 Hz，H⁃2），6.28（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃4），7.40（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H⁃5），6.86（1H，dd，J＝15.6，10.8 Hz，H⁃6），7.00（1H，d，J＝15.6 Hz，H⁃7），7.06（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃2′，6′），6.72（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃3′，5′），7.38（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃2″，6″），6.80（2H，d，J＝8.4 Hz，H⁃3″，5″）；13C⁃NMR（125 MHz，CD3OD）δ：30.9（C⁃1），43.2（C⁃2），202.9（C⁃3），128.8（C⁃4），146.2（C⁃5），124.9（C⁃6），143.7（C⁃7），133.3（C⁃1′），130.3（C⁃2′，6′），116.1（C⁃3′，5′），156.1（C⁃4′），129.2（C⁃1″），130.2（C⁃2″，6″），116.7（C⁃3″，5″），160.2（C⁃4″）。以上数据与文 献 ［16］基本一 致，故鉴定 为7⁃bis⁃（4⁃hydroxyphenyl）⁃4E，6E⁃heptadien⁃3⁃one。