高效液相色谱法同时测定五味子糖浆中五味子醇甲及苯甲酸钠含量

李 玲，赵 猛，王秋实

（江苏省连云港市食品药品检验检测中心，江苏 连云港 222006）

五味子糖浆处方收载于2015 年版《中国药典（一部）》[1]，由五味子单味药材经加工并添加防腐剂及香精等辅料制成。五味子醇甲为其中主要活性成分[2]，苯甲酸钠为其中的防腐剂。过量摄入防腐剂对人体有一定的毒性，在某些国家已限制或禁止使用[3]。本研究中参考文献[4-5]，建立高效液相色谱法同时对五味子糖浆中的五味子醇甲和苯甲酸钠进行含量测定，为提高制剂质量标准提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

e2695 型高效液相色谱仪，包括2998 二极管阵列检测器、Empower 色谱工作站（美国Waters 公司）；BP211D 型十万分之一电子分析天平（德国Sartorius 公司）；Seven Multi 型酸度计（瑞士Mettler Toledo 公司）；KH-700DE 型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

1.2 试药

五味子糖浆（广西邦琪药业集团有限公司，批号为171010；太极集团四川南充制药有限公司，批号为2017006；三门峡广宇生物制药有限公司，批号为170901；上海海虹实业集团巢湖今辰药业有限公司，批号为180506，180915）；五味子醇甲对照品（批号为110857-201815，含量99.7%），苯甲酸钠对照品（批号为100433-201702，含量99.7%），均购自中国食品药品检定研究院；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：1%三乙胺溶液（用磷酸调pH 至3.0，A）-甲醇（B），梯度洗脱（0 ～10 min 时55%A，10 ～12 min 时55%A→40%，12 ～35 min 时40%A）；流速：1.0 mL / min；检测波长：250 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

分别称取待测成分对照品各适量，精密称定，置同一100 mL 容量瓶中，加甲醇超声（功率250 W，频率40 kHz，下同）处理，放冷至室温，加甲醇定容，摇匀，即得五味子醇甲和苯甲酸钠质量浓度分别为0.196 2 mg/mL 和1.190 0 mg/mL 的混合对照品贮备液；精密量取5 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得混合对照品溶液。精密量取样品5 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇20 mL，超声处理20 min，放冷至室温，加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方和工艺制备缺五味子和苯甲酸钠的阴性样品，依法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取混合对照品溶液、供试品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。理论板数按五味子醇甲峰和苯甲酸钠峰计均不低于3 000；分离度均大于1.5，基线分离良好。

专属性试验：取混合对照品溶液、阴性对照品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。阴性对照品溶液在与混合对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明方法专属性良好。

线性关系考察：精密吸取混合对照品贮备液1，2，5，10，15 mL，分别置25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得系列混合对照品溶液；精密吸取10 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、待测成分质量浓度（X，μg/mL）为横坐标进行线性回归，得五味子醇甲和苯甲酸钠回归方程分别为Y1=22 157X1-16 685（r1=0.999 9）和Y2=3 713X2-14 993（r2=0.999 9）。结果表明，五味子醇甲和苯甲酸钠质量浓度分别在7.85 ～117.70μg/mL 和47.58 ～713.80μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一混合对照品溶液适量，按拟订色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果五味子醇甲和苯甲酸钠峰面积的RSD分别为0.48% 和0.26%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为180915）适量，分别于室温下放置0，2，6，12，18 h 时按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果五味子醇甲和苯甲酸钠峰面积的RSD分别为1.45%和0.78%（n=5），表明供试品溶液在室温放置18 h 内基本稳定。

重复性试验：精密称取样品（批号为180915）6 份，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果五味子醇甲和苯甲酸钠含量的RSD分别为0.56%和0.84%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为180915）5 mL，共6 份，分别加入低、中、高质量浓度的混合对照品贮备液，依法制备供试品溶液，再按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取样品各适量，分别依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，平行测定3 次，记录峰面积并计算样品含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（mg/mL）

3 讨论

对五味子醇甲和苯甲酸钠进行全波长扫描，结果显示，五味子醇甲在250 nm 波长处均有最大吸收，苯甲酸钠在229 nm 和274 nm 波长处有最大吸收，苯甲酸钠在274 nm 波长处的吸收值与250 nm 相近，故选择250 nm作为2 种成分的共同检测波长。

参考药典方法处理样品，采用甲醇作为提取溶剂，同时五味子醇甲和苯甲酸钠均溶于甲醇，结果能提取完全；另外，对比超声时间10，20，30 min 对提取效率的影响，发现超声20 min 后有效成分即能溶出。

国家标准相关规定明确了防腐剂在糖浆剂中的使用限量[6]，但并未规定含量测定方法。由于防腐剂苯甲酸钠有一定毒性[3]，目前有些品种口服液已将其作为检查项加入质量标准中，因此同时检测五味子糖浆中的活性成分及防腐剂的含量，不仅简化了检验过程，而且还可为提高糖浆剂的质量标准提供参考。