阿奇霉素联合孟鲁司特钠对肺炎支原体肺炎儿童NOD样受体蛋白-3炎症小体通路的影响

段瑞强，李长青

（河南省新郑市人民医院 儿科，河南 郑州 451100）

肺炎支原体肺炎（mycoplasmal pneumoniae pneumonia，MPP）发病比较复杂，与肺泡上皮细胞损伤或免疫炎症反应存在一定的联系，而NOD 样受体蛋白 -3 （NOD-like receptor pyrin domain 3，NLRP3）炎症小体是免疫炎症反应领域的研究热点［1］。目前该病临床上主要采用大环内酯类抗生素治疗，其中阿奇霉素为临床大部分医院首选抗生素，但单独使用疗程较长，症状改善缓慢［2］。而孟鲁司特钠为一种白三烯受体拮抗剂，能有效改善患儿的临床症状［3］。本研究主要探讨阿奇霉素联合孟鲁司特钠对肺炎支原体肺炎儿童NLRP3炎症小体通路的影响，为临床治疗提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017 年1 月至2019 年 1 月在本院接受治疗的108 例肺炎支原体肺炎患儿作为研究对象。均符合临床诊断标准［4］，均无先天性免疫功能缺陷和肿瘤疾病，近期未使用过激素治疗；排除精神障碍患儿以及其他感染的患儿。所有患儿按照随机数字表法分成两组，对照组54 例，男32 例，女 22 例；年龄 3～12 岁，平均（7.25±1.27）岁；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。观察组 54 例，男 32 例，女 22 例；年龄 3～12 岁，平均（7.25±1.27）岁；病程 3～20 d，平均（9.24±4.23）d。两组患儿的性别、年龄、病程等一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经院伦理委员会批准，所有患儿家属均签署知情同意书。

1.2 方法

两组均给予吸氧、化痰、止咳和抗感染治疗，在此基础上，对照组患儿采用注射用阿奇霉素（东北制药集团沈阳第一制药有限公司，批号：H20000426）治疗，10 mg/（kg·d），加 5% 葡萄糖125～250 mL 静脉滴注，持续5 d。症状改善后，口服阿奇霉素干混悬剂（辉瑞制药有限公司，国药准字：H10960112），10 mg/（kg·d），3 d 后，停用 4 d，持续治疗3 周。在此基础上，观察组加用孟鲁司特钠（鲁南贝特制药有限公司，批号：H20080340），1 次/d，≥6 岁的患儿 5 mg/次，＜6 岁的患儿 4 mg/次，治疗3 周。

1.3 临床疗效

①显效：发热咳嗽等完全缓解，胸部X 线片及血常规指标完全正常；②有效：患儿症状、体征明显改善，胸部X 线片及血常规指标好转；③无效：上述症状、体征及检查指标均无明显好转或恶化。总有效率=（显效例数+有效例数）/总例数×100%。

1.4 样本的采集及检测

抽取空腹静脉血10 mL 分装乙二胺四乙酸抗凝管和非抗凝管。抗凝管肝素抗凝，加入人淋巴细胞分离液，2 000 rpm 离心15 min，分离外周血单个核细胞 （peripheral blood mononuclear cell，PBMC）。非抗凝管3 500 rpm 离心15 min，分离血清，酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA） 法测定白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18 水平。

1.5 实时定量聚合酶链式反应测定NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白、Caspase-1 mRNA水平

采用Trizol 试剂提取PBMC 总RNA，测定纯度。按照逆转录试剂盒说明将总RNA 合成cDNA采用LightCycler 96 实时荧光定量聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR） 仪 （Roche Diagnostics 公司，德国）进行基因扩增，引物序列由上海英骏公司提供。NLRP3 上游序列：5´-ACAGGCAATGCGTATCGTGA-3´，下游序列：5´-AAACCTAAACCAAAGGATCGGA-3´，产物 330 bp；ASC 上游序列：5´-TTACGGCTCGCACAGACAC-3´，下游序列：5´-TAGAGTGCTAGCAACGGCTTG-3´，产 物 141 bp； Caspase-1 上 游 序 列 ： 5´ -TCTAAAATCTCGCACGGGCA-3´，下游序列：5´-GACTCAACACAGCAACCAGC-3´，产物 182 bp；βactin 上游序列：5´-TCTTCTTCTGCAACTGGCG-3´，下 游 序 列 ： 5´-GACTGGGGTATCCAAGTGGG-3´，产物231 bp。采用相对定量2-△△Ct 法比较目的基因相对表达水平。

1.6 统计学方法

采用SPSS 17.0 软件处理数据。计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验；计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验，临床疗效采用秩和检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床疗效比较

观察组总有效率为96.30%，优于对照组的83.33%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组临床疗效比较

2.2 两组IL-1β、IL-18水平比较

与治疗前比较，两组IL-1β、IL-18 水平均明显下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后观察组IL-1β、IL-18 水平均明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 两组NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平比较

与治疗前比较，两组NLRP3、凋亡相关斑点样 蛋 白 （apoptosis-associated speck-like protein，ASC）、Caspase-1 水平均明显下降，差异有统计学意义 （P＜0.05）。治疗后观察组 NLRP3、ASC、Caspase-1 水平均明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 两组治疗前后IL-1β、IL-18 水平比较 （，pg/mL）

表2 两组治疗前后IL-1β、IL-18 水平比较 （，pg/mL）

注：†与治疗前比较，P＜0.01。

组别对照组观察组t值P值IL-1β IL-18治疗后128.28±16.57†101.48±15.29†8.735 0.000例数54 54治疗前6.52±1.26 6.49±1.35 0.119 0.905治疗后3.49±1.07†2.68±1.02†4.026 0.000治疗前172.46±18.59 174.58±17.95 0.603 0.548

表3 两组治疗前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比较 （）

表3 两组治疗前后NLRP3、ASC、Caspase-1 水平比较 （）

注：†与治疗前比较，P＜0.01。

组别对照组观察组t值P值ASC治疗后1.53±0.15†1.32±0.11†8.296 0.000例数54 54 NLRP3治疗前2.02±0.18 2.05±0.16 0.915 0.362治疗后1.78±0.15†1.59±0.13†5.959 0.000治疗前1.72±0.17 1.75±0.18 0.890 0.375治疗后1.52±0.13†1.38±0.14†5.385 0.000 Caspase-1治疗前1.89±0.16 1.87±0.15 0.252 0.504

2.4 不良反应

两组患者治疗后均未出现明显的不良反应。

3 讨论

MPP 是儿童常见临床疾病，临床上主要采用大环内酯类抗生素治疗，最为广泛的为阿奇霉素，该药化学结构稳定，抗菌效果明显，无明显的副作用［5］。但单独使用阿奇霉素对患儿的炎症反应以及免疫机能的修复效果不明显。而孟鲁司特钠可以拮抗白三烯受体，降低白三烯水平，并达到缓解机体的炎症反应，缓解患儿的临床症状。本研究中，观察组采用阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗肺炎支原体肺炎，临床疗效明显优于对照组，与既往研究结果一致［6］。

有文献显示，MPP 的发生与细胞的炎性反应存在一定的联系，当MPP 发生时易诱发全身性炎性反应，并对机体造成损伤，促进机体免疫细胞分泌并释放多种炎症因子，加重机体的损伤［7］。IL-1β 来源于单核巨噬细胞，为一种前炎性因子，而激活的IL-1β 能诱导其他炎症因子的表达，协同其他因子共同参与炎症的发生和进展［8］。而IL-18来源于单核巨噬细胞和树突状细胞，IL-18 前体在IL-1β 的作用下，形成有活性的IL-18，参与MPP病理过程［9］。本研究中，患儿接受相应的治疗后，观察组患儿的IL-1β、IL-18 下降幅度明显优于对照组，提示阿奇霉素联合孟鲁司特钠能有效调节炎症因子水平，发挥抗感染效果。

有研究显示，MPP 的发生与过量的宿主免疫反应有关，固有免疫可以有效抵御病原微生物入侵，并通过活化下游信号通路，诱发免疫应答和炎症反应［10］。NLRP3 为 NOD 样受体家族成员，易被活性氧等因素活化。因此，MPP 发生后，氧自由基水平的增加是激活NLRP3 的重要途径，并募集pro-caspase-1 和ASC 共同组建大分子蛋白复合体，即NLRP3 炎症小体。NLRP3 炎症小体被活化后，可调节Caspase-1 活化，并剪切IL-1β 前体，激活IL-1β 成熟和分泌，IL-1β 作为促炎因子诱导大量炎症因子释放［11］。本研究中，观察组NLRP3、ASC、Caspase-1 水平明显低于对照组，说明阿奇霉素联合孟鲁司特钠对肺炎支原体肺炎儿童具有保护作用。

综上所述，阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗儿童肺炎支原体肺炎临床效果明显，其机制可能与其调节者NLRP3、ASC、Caspase-1 炎性体基因的表达有关，但具体机制有待进一步研究。