胚胎移植技术在吐根堡奶山羊扩繁中的应用

李卫娟，成文敏，朱兰，孟莉，3，李俊喜，4，董正涛，高华峰，邵庆勇*

(1.云南省畜牧兽医科学院，云南 昆明 650224； 2.云南农业大学，云南 昆明 650224；3.元阳县马街乡畜牧兽医站，云南 元阳 662400； 4.禄丰县动物疫病预防控制中心，云南 禄丰 651200；5.云南羊羊好农牧发展有限公司，云南 宜良 651200)

石林圭山山脉一带是云南奶山羊的主产区，养羊挤奶，制作奶香飘溢、食之嫩滑爽口的奶豆腐(乳饼)具有300多年的历史[1]，形成以圭山羊、萨能高代杂交羊、从国外引进的吐根堡、阿尔卑斯、努比奶山羊为基础的奶山羊生产群体。云南奶山羊品种的多样性加快了云南奶山羊传统产业向现代产业发展的步伐，相继建成投产日处理100t生鲜乳的乳制品加工厂2个。羊奶产品加工企业核心竞争力在于奶源，而奶源的基础是良种，培育适合云南高原气候、山地放牧或舍饲饲养、奶香味浓的奶山羊品种，对支撑产业发展具有重要的现实意义。

吐根堡奶山羊(Toggenburg goat)原产于瑞士东北部圣加伦州的吐根堡盆地，对炎热气候条件和山地牧场具有较好的适应性，因产奶量高被大量引入欧、美、亚、非及大洋洲许多国家进行纯种繁育或地方品种改良，对世界各地奶山羊业的发展起到了重要作用。我国曾于1937年、1982年、1984年先后引入吐根堡奶山羊，在四川、陕西、山西等省区饲养[2]。云南省于2012年引入纯种吐根堡奶山羊冻胚，以圭山山羊为受体进行胚胎移植后开展纯种繁殖和杂交改良工作，生产出的后代表现出较强的适应性及较高的生产性能。选择吐根堡作为杂交改良和良种培育的父本，充分利用高效扩繁技术，迅速提高该品种的数量、质量，是解决良种数量不足的有效途径。2018年9月，在云南羊羊好农牧发展有限公司开展吐根堡奶山羊超数排卵、同期发情、胚胎移植试验。本试验目的是运用超数排卵的方法探索吐根堡奶山羊胚胎移植效果。

1 材料与方法

1.1 试验材料的选择

1.1.1供体羊

从引进冻胚繁殖的后代中选取纯种吐根堡奶山羊经产母羊10只作为供体，所选供体羊外貌符合本品种特征，健康状况优良，无繁殖和生理性疾病，发情周期正常，3～6岁。

1.1.2受体羊

选取本场饲养的云上黑山羊经产母羊100只，受体羊发情周期正常、空怀、健康、2～5岁，营养状况良好，膘情中等，母性好，产奶量高，无生理性疾病。

1.1.3饲养管理

供、受体羊试验前完成驱虫和三联四防苗、小反刍兽疫、口蹄疫、羊痘疫苗免疫注射，给予良好的饲养管理条件，不随意更换饲草料和管理方式。每日饲喂花生秧、蚕豆秸秆糠、玉米青贮，补充维生素A、D和矿物质，供给食盐和清洁饮用水。

1.1.4主要药品与器械

孕酮硅胶栓(CIDR)，新西兰Zoetis Australia公司生产，每个CIDR含孕激素0.3g；垂体促卵泡素(FSH),商品名扶托平(Folltropin-V)，威隆制药(北美)有限公司生产；孕马血清促性腺素(PMSG)，宁波第二激素厂生产；胚胎回收液(PBS)，美国BIONICHE公司生产；胚胎培养液(Holding)，美国ICP公司生产。

1.2 试验方法

1.2.1供体羊超排处理

用“CIDR+FSH法”进行超排处理，处理时间及方法详见表1。于发情周期中的任意一天埋置CIDR硅胶栓并肌注复合维生素A、D、E(Vade)5 mL，第9天换栓，第15～18天连续4 d每天上午7:00和晚上19:00用递减法肌肉注射FSH，总剂量每只羊10.5 mL(367.5IU)。第18天撤栓,同时注射Vade 5 mL，第19、20天试情，采用人工授精方式进行配种，每只供体羊配种3次。

1.2.2受体羊同期发情

受体羊与供体羊同时埋植孕酮硅胶栓、同时撤栓，并肌肉注射PMSG 250 IU。撤栓后用试情公羊进行试情，记录好发情时间。

表1 吐根堡奶山羊超数排卵和同期发情方法

1.3 胚胎回收和移植

1.3.1胚胎收集

供体母羊于发情配种后第7天采用手术法从子宫角回收桑椹胚至囊胚期胚胎。

1.3.2检胚

根据受精情况及胚胎形状将收集到的胚胎分为A、B、C级。

2 结果

2.1 供体羊超排效果

本试验供体羊超排效果见表2，超排处理10只纯种吐根堡奶山羊，回收胚胎和卵子179枚(其中：未受精卵108枚，占60.3%；可用胚胎71枚，占39.7%)，平均每只羊提供可用胚胎7.1枚。

2.2 受体羊同期发情

同期发情处理100只云上黑山羊，撤栓后24～36h 发情85只，同期发情率85%。随机选择46只受体羊进行胚胎移植手术，36只移植胚胎71枚，发情母羊利用率78.3%。

2.3 移植产羔效果分析

移植产羔情况见表3。可用胚胎71枚，移植受体羊36只，产羔母羊23只，产羔40只(死胎1只)，移植产羔率63.89%。按移植胚胎数计算产羔率为56.33%，按产羔母羊计算产羔率为173.91%。

表2 供体羊超排效果统计表

表3 胚胎移植产羔情况统计表

3 小结

国内采用“CIDR+FSH法”对供体羊进行超数排卵，常见递减注射法、等量注射法。不同品种的山羊只均获得可用胚也不同，龙陵黄山羊7.40枚[3]、波尔山羊8枚[4]、努比山羊20.8枚[5]。本试验采用递减法对吐根堡奶山羊进行超排处理，并在注射FSH的第2天第3针时继续保持较高的剂量未见报道。本次试验头均回收胚胎和卵子数19.7枚，头均回收胚胎数7.1枚；造成本次头均胚胎回收率低的原因是否与人工授精技术环节的实施有关，有待进一步验证。选择云上黑山羊作为受体，同期发情率为85%，发情母羊利用率78.3%，产羔率173.9%，只均获纯种羊1.7只，具有较好的利用效益。