减味寿胎丸对甲醛胚胎毒性的干预作用

高新源， 王慧颖

[北京中医药大学深圳医院（龙岗）妇科，广东深圳 518112]

甲醛已被世界卫生组织烟草控制框架公约（FCTC）列为烟气优先级管制污染物[1]，它对人类的生殖系统[2-3]、免疫系统[4]、神经系统[5]、循环系统[5]等都有毒害。值得注意的是，大部分装修材料及新购家具含有甲醛成分，尤其是劣质的装修材料，其甲醛成分远远超过健康标准，且据研究报告显示室内甲醛残留时间很长，当它的浓度上升至高峰后会逐渐下降，但可持续残留3～15年，这就使我国城市室内污染非常严重[6-8]。为保障人类生殖健康，防止妊娠缺失及子代缺陷，学者们越来越关注甲醛的生殖毒性[9-11]及治疗[12]。清·张锡纯所创立的寿胎丸由菟丝子、桑寄生、续断、阿胶4味中药组成，具有补肾安胎之功效，临床疗效确切。为进一步探讨寿胎丸对甲醛生殖毒性的拮抗作用，本研究观察了减味寿胎丸对甲醛所致妊娠缺失、胚胎缺陷的干预效果，因维生素C[12]可减少甲醛对体内抗氧化成分的消耗，从而改善胚胎发育毒性，故以其作为阳性对照药物。现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 孕鼠的准备 选用12周龄SD大鼠雌性80只、雄性40只，由广东省医学实验动物中心所提供。实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002；广东省动物实验证明号：00180392、00180394；实验动物质量合格证号：44007200045043、44007200045044。将雌性与雄性12周龄SD大鼠按1∶2或1∶1的比例进行交配，获得57只孕鼠，随机分为5组，即阴性对照组（12只）、模型对照组（11只）、维生素C组（11只）、减味寿胎丸低剂量组（11只）、减味寿胎丸高剂量组（12只）。

1.2 药物及制备 减味寿胎丸组成：盐菟丝子100 g，桑寄生50 g，续断片50 g。加水武火煮沸后文火慢煎成灌胃液。按照60 kg成人与300 g大鼠体表面积的剂量换算公式（系数为4.78）换算大鼠给药剂量。大鼠减味寿胎丸等效剂量为3.19 g·kg-1·d-1，作为本实验的低剂量；高剂量是低剂量的2倍，为6.38 g·kg-1·d-1。维生素C片，100 mg/片，由广东恒健制药有限公司生产，批号：170513。维生素C按照药品说明书以成人给药剂量换算大鼠等效剂量为150 mg·kg-1·d-1。

1.3 试剂与仪器 甲醛（西陇科技股份有限公司）。HOPE-MED 8050F/54全身吸入染毒控制仪（天津合普公司）；MIC-800-CH2O便携式甲醛检测仪（深圳市逸云天科技有限公司）。

1.4 造模 造模方法采用李诗宇[13]、朱嘉伟[14]等的静吸式甲醛吸入染毒方式。自妊娠第1天起至妊娠第15天，除阴性对照组外，其余动物置于全身吸入染毒柜中，根据甲醛不同染毒浓度、不同染毒时间预实验，确定给予110 mg/m3甲醛浓度吸入染毒2 h，每天1次。同时，自妊娠第1天起至妊娠第15天，减味寿胎丸低、高剂量组分别给予减味寿胎丸水煎液（剂量分别为3.19、6.38 g·kg-1·d-1）灌胃，维生素C组给予维生素C溶液（剂量为150 mg·kg-1·d-1）灌胃，模型对照组、阴性对照组给予等体积的纯净水灌胃。均连续15 d。

1.5 观察指标

1.5.1 胚胎着床情况 孕20 d给予孕鼠过量二氧化碳吸入安乐死，剖宫，记录活胎数、吸收胎数、死胎数，计算总胎数、活胎率、吸收胎率。公式：总胎数=活胎数+吸收胎数+死胎数；活胎率=活胎数/总胎数；吸收胎率=吸收胎数/总胎数。

1.5.2 胎仔情况 检查胎仔有无外观异常，并测量胎仔体质量、身长、尾长。

1.5.3 胎仔畸形情况 检查胎仔外观畸形、内脏畸形及骨骼畸形情况。畸形发生率=畸形胎仔数/检查胎仔数。

1.6 统计方法 应用SPSS 21.0统计软件进行数据分析。计量数据以均数±标准差(-x±s)表示，计量资料数据方差齐，或数据经转换后方差齐，采用单因素方差分析，若数据经转换后方差仍不齐，采用秩和检验进行统计分析；计数资料采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 着床情况

2.1.1 活胎情况 模型对照组活胎率较阴性对照组降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；各给药组活胎率较模型对照组升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；减味寿胎丸高剂量组孕鼠活胎率与维生素C组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。具体结果见表1。

表1 各组妊娠母鼠孕20 d活胎情况比较Table 1 Comparison of the data about live fetal in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.1.2 吸收胎情况 模型对照组孕鼠的吸收胎率较阴性对照组升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；各给药组孕鼠的吸收胎率较模型对照组降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；减味寿胎丸高剂量组孕鼠吸收胎率与维生素C组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。具体结果见表2。

2.2 胎仔情况

2.2.1 胎仔体质量 与阴性对照组比较，模型对照组胎仔体质量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与模型对照组比较，各给药组胎仔体质量均升高，其中减味寿胎丸低剂量组有统计学差异（P＜0.05），其余则无统计学差异。具体结果见表3。

表2 各组妊娠母鼠孕20 d吸收胎情况比较Table 2 Comparison of the data of absorption embryo in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

表3 各组妊娠母鼠孕20 d剖检胎仔体质量比较Table 3 Comparison of the fatal body mass in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.2 胎仔身长、尾长 各组胎仔身长、尾长比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。具体结果见表4。

表4 各组妊娠母鼠孕20 d剖检胎仔身长、尾长比较Table 4 Comparison of the fatal body length and tail length in the rats with pregnancy for 20 days of various groups （-x±s，l/mm）

2.2.3 胎仔畸形情况

2.2.3.1 外观畸形 对各组胎仔外观进行检查，均未见到任何畸形。

2.2.3.2 胎仔内脏畸形 阴性对照组（86只）、减味寿胎丸高剂量组（93只）均未见内脏畸形胎仔。模型对照组（81只）畸形胎仔1只，发生率1.2%。维生素C组（82只）畸形胎仔2只，发生率2.4%。减味寿胎丸低剂量组（88只）畸形胎仔2只，发生率2.3%。各组胎仔内脏畸形发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。具体结果见表5。

表5 各组胎仔内脏畸形检查结果比较Table 5 Comparison of the data about malformation ofthe fatal viscera in the rats with pregnancy for 20 days of various groups

2.2.3.3 胎仔骨骼畸形 阴性对照组（96只）均未见骨骼畸形。模型对照组（87只）畸形胎仔14只，发生率16.1%，与阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；维生素C组（88只）畸形胎仔10只，发生率11.4%，与模型对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；减味寿胎丸低剂量组（93只）畸形胎仔5只，发生率5.4%，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；减味寿胎丸高剂量组（99只）畸形胎仔7只，发生率7.1%，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。具体结果见表6。

表6 各组胎仔骨骼畸形检查结果比较Table 6 Comparison of the data about malformation of the fatal skeleton in the rats with pregnancy for 20 days of various groups [n/只（p/%）]

3 讨论

本课题组在前期实验中对寿胎丸进行了复方组成及配伍规律的研究，经药效验证筛选出补肾安胎的优选配比方：菟丝子∶桑寄生∶续断∶阿胶=20∶10∶10∶0，即去阿胶形成本次研究所用的减味寿胎丸。菟丝子为方中君药，正如《医学衷中参西录》所言：“菟丝大能补肾，肾旺自能荫胎也。”其药性平和，能滋补肝肾、固冲安胎，是平补之良药。桑寄生为补益肝肾、养血安胎之要药，为方中臣药，其味苦、甘，平，可协君药补肾填精，固冲安胎，正如《药性论》中记载所言：“桑寄生能令胎牢固，主怀妊漏血不止。”方中续断药性苦辛，微温，入肝、肾经，为本方佐药，可助菟丝子、桑寄生补肝肾、固冲任，使胎气强壮，如《本草疏经》载：“续断，……为治胎产、续绝伤、疗不足、疗金疮、理腰肾之要药也。”减味寿胎丸中君药菟丝子、臣药桑寄生、佐药续断三药相合，能益精填髓，精血同生，肾气旺盛，胚胎稳固。

胚胎着床是复杂精细的生理过程，其受有害环境的影响非常明显，是公认的反映环境中有害因素影响的敏感生物标志物，因此，在进行环境保护和质量评价领域，胚胎着床情况是重要检测指标[15-16]。本研究结果表明，环境中的甲醛通过呼吸而进入体内，可经胎盘屏障进入胎仔，具有胚胎毒性，导致胚胎发育畸形、发育不良甚至是胚胎死亡；而减味寿胎丸及维生素C均可在一定程度上拮抗甲醛对胚胎的毒性，干预甲醛对胎仔的致畸、致死作用，且由于自然界“优胜劣汰”的规律，异常胚胎会被吸收，而减味寿胎丸干预能保证优质胚胎优先发育，促进不良胚胎吸收，减少畸形儿的出现机率。

胚胎毒性还主要表现在胎仔发育水平及发育畸形情况。本研究结果表明，甲醛具有生育毒性，可通过胚胎胎盘转运，对子代的生理发育产生不良影响，造成胎仔体质量减轻，但对身长及尾长无明显影响，还可以导致胎仔畸形尤其以致骨骼畸形最为明显，而减味寿胎丸可拮抗此种毒性，进而增加胎仔体质量，减轻甲醛对胎仔的致畸力，减少胎仔畸形的发生。

综上所述，减味寿胎丸可拮抗甲醛的生殖毒性，保证优质胚胎优先发育，增加胎仔体质量，减轻甲醛的致畸能力，可为临床应用和推广提供依据。