丝裂原活化蛋白激酶4和波形蛋白联合检测对子宫内膜癌的早期诊断价值

王 冰, 杨 勇

(陕西省安康市中心医院, 1. 妇科; 2. 核医学科, 陕西 安康, 725000)

子宫内膜癌属于妇科常见恶性肿瘤，是造成患者死亡的主要妇科肿瘤之一，相关数据显示，每年大约有20万新发病例。若未及时发现并进行准确诊断，随着疾病进展，症状不断加重，给患者带来较大伤害，甚至危及生命安全，因此临床选择有效检测方式成为关键[1]。丝裂原活化蛋白激酶4(MAP2K4)属于编码MAP激酶信号家族基因的主要成员之一，由于丝裂原活化蛋白激酶通道能够介导细胞反应的信号系统，广泛存在于多类细胞中，在细胞生长发育及凋亡中具有重要意义。若多种激酶组分出现异常活化可导致疾病发生[2-3], MAP2K4被激活后出现双重特异性，促进细胞凋亡并使其发生恶性转化。丝裂原活化蛋白激酶信号通路是细胞外信号受到刺激后产生细胞核反应的共同通路，也是介导上皮细胞、间充质转化的细胞内信号分子，其中上皮细胞、间充质转化主要是上皮细胞在特殊状况下发生间质细胞分化，其特征以上皮细胞黏附分子表达降低为主，同时可能发生波形蛋白的重新表达[4-5]。虽然其在炎症、癌症转移等疾病中具有重要作用，但关于MAP2K4和波形蛋白同时表达的报道较少。本研究探讨MAP2K4和波形蛋白联合检测在子宫内膜癌早期诊断中的意义，现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择本院2016年5月—2018年1月纳入的103例子宫内膜癌患者作为研究对象，年龄38～57岁，平均(3.58±1.02)岁; 绝经49例，未绝经54例; 组织学分型: 低分化者21例，中分化者35例，高分化者47例; 国际妇产科联合会(FIGO) Ⅰ期81例, Ⅱ、Ⅲ期22例; 淋巴转移者12例，未转移者91例; 肌层浸润深度≥1/2者16例，肌层浸润深度<1/2者87例。分别提取所有患者的子宫内膜癌组织标本，每份标本分成2份，分别检测MAP2K4、波形蛋白以及二者联合检测的阳性表达情况。

1.2 研究方法

试剂选择SP试剂盒、兔抗人MAP2K4单克隆抗体、兔抗人波形蛋白单克隆抗体、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒等。收集所有研究对象的子宫内膜癌组织标本，选择4%中性福尔马林固定，利用石蜡包埋，保持4 μm厚度持续切片并烤干。严格参照链霉亲合素-生物素酶复合物法，免疫组化操作均遵照试剂盒说明书进行，一抗按照1∶100稀释。另外，选择已知的阳性片作为对照，而磷酸盐(PBS)缓冲液代替一抗成为空白对照。其中MAP2K4和波形蛋白的表达均定位于胞浆，也可能出现胞核着色，细胞浆或者核内存在棕黄色颗粒为阳性。选择400倍显微镜随机观察视野，按照阳性细胞数量所占比例、着色强度评分，采用所有得分相乘后的总分评价阳性结果。

1.3 观察指标

① 阳性细胞所占比例: 无记为0分, ≤10%记为1分, 11%～50% 记为2分, 51%～75%记为3分, >75%记为 4分; ② 着色强度评分: 棕褐色记为3分，棕黄色记为2分，淡黄色记为1分，无色记为0分。判断免疫组化的结果主要依照上述2个方面进行评价，若 ① ② 二者得分的乘积为0～1分记为阴性(-)，若乘积为2～3分记为阳性(+)，乘积≥4分记为强阳性()。选择2名经验丰富的专业人员对免疫组化染色结果进行独立读片，若出现意见分歧可讨论后提出统一结果。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 MAP2K4与波形蛋白的表达及临床病理

因素的相关性

MAP2K4检测阳性24例，强阳性15例，阴性64例; 波形蛋白检测阳性32例，强阳性35例，阴性36例, MAP2K4检测阳性率为37.86%(39/103), 低于波形蛋白的阳性率65.05%(67/103), 且阳性细胞所占比例积分及着色强度评分低于波形蛋白检测，差异均有统计学意义(P<0.05), 见表1。

MAP2K4的阳性表达与患者的FIGO分期、淋巴转移有显著相关性(P<0.05), 而波形蛋白的阳性表达与患者的FIGO分期、组织学分型、浸润深度及淋巴转移有显著相关性(P<0.05), 见表2。

表1 MAP2K4与波形蛋白阳性细胞所占比例积分及着色强度评分对比 分

与MAP2K4检测比较, *P<0.05。

表2 MAP2K4与波形蛋白表达及临床病理因素的相关性(n=103)

2.2 灵敏度、特异性

MAP2K4检测的灵敏度、特异性分别为71.84%(74/103)、73.79%(76/103); 波形蛋白检测分别为80.58%(83/103)、85.44%(88/103); 联合检测分别为92.23%(95/103)、95.15%(98/103)。MAP2K4和波形蛋白联合检测的灵敏度、特异性，高于单一检测，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

近年来，中国子宫内膜癌的患病率逐年升高，其发生率约占女性生殖系统恶性肿瘤的第2位，已成为威胁女性身心健康及日常生活的主要疾病。若能够尽早发现并及时给予有效治疗，可快速稳定病情，延长生存周期[6]。MAP2K4属于丝裂原活化蛋白激酶信号传导途径中主要成员，能够刺激P38 MAPK、c-Jun N末端激酶，并主要定位于染色体片段，通常在人上皮性肿瘤上，尤其是乳腺癌、卵巢癌按照7%～10%的速度丢失[7-8]。因此, MAP2K4被公认为肿瘤抑制基因，但也曾有报道[9]提出MAP2K4对部分肿瘤可能存在促进作用。

本研究结果发现, MAP2K4检测阳性率低于波形蛋白阳性率65.05%(67/103), 且阳性细胞所占比例积分及着色强度评分较波形蛋白显著更低(P<0.05), 这提示了波形蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达相对更高。进一步分析二者与临床病理因素的相关性后发现, MAP2K4的阳性表达与患者的FIGO分期、淋巴转移有关，而波形蛋白的阳性表达与患者的FIGO分期、组织学分型、浸润深度及淋巴转移有关。说明MAP2K4及波形蛋白均与患者的病情进展有一定关联。事实上，波形蛋白属于中间丝的常见蛋白质，可广泛分布于正常间质细胞中，具有保证细胞完整的作用，并具有抵抗应力[10-12]。临床上曾有较多报道表明，波形蛋白在多种上皮癌中出现过表达，可加速病灶生长，导致预后不良。由于上皮细胞、间充质转化与胚胎发育密切相关，因此在肿瘤转移过程中也存在一定作用，使上皮细胞失去活性，减少基质的黏附，导致细胞变形后活性增强，同时得到间质细胞的特性，提升肿瘤细胞的攻击能力，促进远处转移[13-15]。而波形蛋白属于β链蛋白/T细胞因子中的靶点，并在细胞黏附、转移及细胞传导中具有重要意义。若其表达在上皮细胞、间充质转化中提高，说明存在肿瘤转移现象，而此种现象的发生主要可能是由于其与MAP2K4共同参与到了丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路这一介导细胞反应的重要信号通路而致使肿瘤转移的。此外，本研究结果表明, MAP2K4和波形蛋白联合检测的灵敏度、特异性，显著高于单一检测，提示MAP2K4、波形蛋白在子宫内膜癌中均具有一定的诊断价值，同时可用来评价疾病发展及转移情况，为治疗及预后提供前提。其中波形蛋白可促进疾病发展、分化、肌层浸润、淋巴结转移情况，可成为评估疾病的主要指标[16], 而AP2K4则可较好地反映出肿瘤转移情况。因此, MAP2K4和波形蛋白检测均在子宫内膜癌中具有不同程度的诊断价值，但单一检测的灵敏度、特异性并不理想，联合检测后可增强诊断结果的准确性，为治疗及预后提供保障。综上所述, MAP2K4和波形蛋白联合检测可预测疾病发展、浸润及转移情况，对子宫内膜癌的治疗具有重要作用。