干燥与储存方式对三叶青块根总黄酮含量的影响

洪春桃，沈登锋，魏斌，章建红

(宁波市农业科学研究院 林业研究所，浙江 宁波 315040)

三叶青(Tetrastigmahemsleyanum)为葡萄科(Vitaceae)崖爬藤属(Tetrastigma)植物，又名蛇附子、金线吊葫芦、破石珠、石猴子等，全株可入药，其中块根药效最佳，具有清热解毒、活血止痛和祛风化痰等方面的功效[1-2]。近些年研究发现，三叶青在抗肿瘤、抗炎镇痛，以及保肝等方面具有较好疗效[3-7]，能够治疗支气管炎、肺炎、肝炎、扁桃体炎等，其主要有效成分为黄酮和多糖等物质[8-9]。长期以来，民间一直有服用新鲜三叶青用于治疗感冒等病症的习惯，且疗效独特，但由于鲜品受季节、地区的限制，其在临床应用过程中有诸多不便。而对新鲜的三叶青块根进行干燥处理，既有利于保存，又提高了其在临床使用中的便捷性。本试验比较4种不同干燥方式[10-12]和储藏方式对三叶青总黄酮含量的影响，以期为生产和储存三叶青块根干品方法提供科学的理论基础。

1 材料与方法

1.1 供试材料

本试验所用三叶青块根于2017年11月中旬收获于宁波市农业科学研究院横溪镇大岙村的三叶青基地(浙江市宁波市)。芦丁对照品(批号为20200423，北京索莱宝科技有限公司)、无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、三氯化铝(阿拉丁)、氢氧化钠(国药集团化学试剂有限公司)等均为分析纯试剂。

仪器与设备。电热恒温鼓风干燥箱(型号DHG-9240A，上海齐欣科学仪器有限公司)，分析天平(型号Sartorius，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)，冷冻干燥机(型号SCIENTZ-30ND，宁波新芝生物科技股份有限公司)，真空保鲜机(型号WP300，美吉斯)，恒温水浴锅(型号HWS-28，上海慧泰仪器制造有限公司)，超声波清洗机(型号SB-120D，宁波新芝生物科技股份有限公司)，高速冷冻离心机(型号MULTTFUGE XIR，Thermo Fisher Scientific，USA)，酶标仪(型号GO，Thermo Fisher Scientific，USA)等。

1.2 处理设计

1.2.1 三叶青块根干燥处理

将采集的鲜三叶青块根洗净，沥干，表面无水分后进行称量。分别采用8种干燥方法对三叶青块根进行干燥处理，每个处理重复3次，每个重复分别称取鲜样100 g，干燥处理至恒质量。8种干燥方式分别为：A，自然晒干；B，自然阴干；C，40 ℃电热恒温鼓风干燥箱烘干；D，60 ℃电热恒温鼓风干燥箱烘干；E，80 ℃电热恒温鼓风干燥箱烘干；F，-50 ℃真空冷冻干燥(后续加温至55 ℃)；G，-50 ℃真空冷冻干燥(后续加温至35 ℃)；H，-50 ℃真空冷冻干燥(后续不加热，恒温14.4 ℃)。

1.2.2 储存方法

将-50 ℃真空冷冻干燥(后续系统设置加温至55 ℃)后的三叶青块根用超微粉碎机进行粉碎，粉碎后的样品过200目筛(网孔直径75 μm)，达到纳米级，每份称取10 g，共计60份，进行抽真空封膜包装，再用紫外进行杀菌处理。将30份储藏于-20 ℃冰箱中，另外30份常温储藏于阴凉干燥处，以1.2.1节中F组样品的总黄酮含量作为对照组(即为未储存过的样品)。1 a后对低温储存和常温储藏的样品进行总黄酮含量测定。总黄酮含量按照谢海荣等[13]的方法进行测定。

1.3 统计分析

采用Excel 13.0进行数据分析与绘图，采用SPSS 18.0进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同干燥方法对三叶青块根总黄酮含量的影响

不同干燥方法处理所需时长和三叶青块根总黄酮含量测定结果见表1。A、B组均为传统的干燥方法，含量相对接近，分别为5.38%和5.12%；C、D、E组用电热恒温鼓风干燥箱进行烘干处理，所得的三叶青总黄酮含量较低，尤其是C组，其总黄酮含量仅2.69%；F、G、H组为冷冻干燥处理，所得的三叶青总黄酮含量较高，尤其是F组(-50 ℃真空冷冻干燥，后续系统设置加温至55 ℃)，其总黄酮含量达到8.13%。通过SPSS18.0软件分析可得，除G组外，F组与其他组均存在显著差异，其更好地保留了三叶青块根在干燥过程中的总黄酮成分，与常飞等[14]在葛根中的研究报道相一致。

表1 三叶青块根不同干燥处理方法的总黄酮含量

注：同列数据后无相同小写字母表明差异显著(P<0.05)。

从表1可见，8种干燥处理方法中，电热恒温鼓风干燥箱烘干处理(C、D、E组)用时最短，其次为冷冻干燥(F、G、H组)，传统的晒干和阴干方法用时最长。同时，随着后续加热设定温度的降低，F、G、H组干燥所需时间也越长，其中H组所用时间分别是F组和G组的2.35倍和1.82倍，H组的三叶青块根总黄酮含量绝对值分别比F组和G组低2.47%和1.39%。该现象在传统的晒干和阴干，以及烘干试验中也同样存在，晒干(A组)的用时比阴干(B组)的时间短，总黄酮含量绝对值也比B组高出0.26%；D组耗时比C组短32.5 h，总黄酮含量绝对值高出C组1.99%；E组耗时比C组短37 h，总黄酮含量绝对值高出C组0.56%。E组由于烘干温度过高，虽然试验用时较短，但是三叶青块根的总黄酮在80 ℃高温下有部分分解，所以其总黄酮含量比D组低。说明三叶青块根总黄酮含量随着干燥处理时间的延长而降低。

综上所述，在不同的干燥方法中，真空冷冻干燥更有利于保留三叶青块茎的总黄酮，电热恒温鼓风干燥箱烘干容易造成三叶青总黄酮的分解，而传统的干燥方式如晒干和阴干虽能较好地保留三叶青总黄酮，但是干燥所需时间较长。本研究中采用-50 ℃真空冷冻干燥(后续系统设置加温至55 ℃)的方法干燥三叶青块根是较好的干燥方法，其既能让三叶青块根保持较高的总黄酮含量，还能缩短干燥时间，建议在产业化生产干燥三叶青块根时使用此方法。

2.2 储存方式对冷冻干燥的三叶青块根中总黄酮含量的影响

将冷冻干燥的三叶青块根分别在-20 ℃和常温储存1 a，-20 ℃低温储存1 a的三叶青块根总黄酮含量比未储存时总黄酮含量绝对值降低了0.99%，但是没有显著差异；常温储藏的三叶青块根总黄酮含量绝对值比未储存时降低了2.15%，差异显著(图1)。可见-20 ℃低温储存能有效保留干燥三叶青块根的总黄酮含量，而常温储存不利于三叶青块根总黄酮的保存。因此，建议干燥的三叶青块根在常温下应尽快使用，-20 ℃低温储存的三叶青块根总黄酮含量尽管与未储存没有显著差异，但是有下降的趋势，可能随着储存时间的延长会继续降低，但其有效期至少有1 a。

柱上无相同小写字母表明差异显著(P<0.05)。图1 不同储存方式对三叶青块根超微粉中总黄酮含量的影响

3 小结

随着三叶青种植面积的扩大，三叶青产品也在不断实现多样化，尤其是耐储藏的干燥三叶青块根。为了提高三叶青在临床应用的方便性，三叶青冻干粉也在不断开拓市场[15]，目前价格相对较高。在今后的生产实践中，本研究能更好地为三叶青干燥品的制备提供科学依据。同时本研究也存在一些局限，后续研究应进一步检测储存2 a或3 a以上的三叶青块根干燥品。