反相HPLC测定精制马拉硫磷溶液方法探讨

陈向丹 王峻 胡深 万珊 董书香

摘要：建立了精制马拉硫磷溶液中马拉硫磷含量的反相HPLC测定方法。采用C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），检测波长225 nm，流动相为甲醇∶水（60∶40），流速1.0 mL/min。结果表明，马拉硫磷在0.050～1.500 mg/mL与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为0.999 8，平均回收率为101.6%，RSD为0.9%。该方法简便、准确、快速、重现性好，可用于该制剂的含量测定。

关键词：马拉硫磷;反相HPLC法;含量测定

中图分类号：O657.7+2         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2019）21-0170-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.21.037

Abstract： To establish a method for the determination of malathion content in malathion solution  by RP- HPLC. The C18 chromatographic column （4.6 mm×150 mm，5 μm） was used to detect the wavelength 225 nm， the mobile phase was methanol water （60∶40）， and the flow rate was 1.0 mL/min. The results showed that malathion in the range of 0.050～1.500 mg/mL， there was a good linear relationship between concentration and peak area， the correlation coefficient was 0.999 8（n=6）， the average recovery rate was 101.6%， RSD was 0.9%; the method is simple， accurate， rapid and reproducible， and can be used for determination of the content of this preparation.

Key words： purified malathion; RP-HPLC; determination of content

马拉硫磷（Malathion）是一种农业上广泛应用的高效、低毒、接触性有机磷类杀虫剂[1]， 对人畜毒性较低， 在高等动物体内代谢速度快、代谢毒性小、残效期短并具有触杀、胃毒、熏蒸等作用， 是一种较早应用的有机磷杀虫剂。马拉硫磷微溶于水，室温下溶解度为145 mg/L，易溶于丙酮、三氯甲烷等有机溶剂。在微酸性介质中较稳定，在碱性介质中易分解，不能与碱性农药混用，对铁有腐蚀性[2]。兽用马拉硫磷原药及制剂测定方法为气相色谱[3，4]。但由于气相色谱法测定马拉硫磷含量的方法受很多条件影响，如方法中对照品及内标物质的使用量很大，特别是内标物丙体六六六[5]不易获得，给检验工作带来了诸多麻烦。为了更好地控制产品质量[6]，本研究建立了以反相高效液相法测定精制马拉硫磷溶液中马拉硫磷的含量，为该药的质量控制提供了一种新方法。

1  材料与方法

1.1  仪器与试剂

岛津20AD高效液相色谱仪，配紫外检测器;Agilent Eclipse Plus C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）;Mettler AE240电子天平;MILIPORE超纯水处理器。马拉硫磷对照品（①含量为99.5%，来源于国家标准物质，批号70542;②纯度≥99.5%，来源于Dr.Ehrenstorfer GmbH，批号C14710000）;甲醇，色谱纯，美国TEDIA公司;水为二次纯化水。马拉硫磷原料、辅料，精制马拉硫磷溶液样品（批号为170316、170317、170318）均由武汉某已获兽药GMP认证的公司提供。

1.2  样品准备与处理

取适量精制马拉硫磷溶液，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液;另精密称取马拉硫磷对照品25 mg同上操作，作为对照品溶液。

1.3  色谱条件

色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂;流动相为甲醇∶水（60∶40）;流速1.0 mL/min;检测波长225 nm;进样量10 μL。

2  结果与分析

2.1  检验波长的选择

精制马拉硫磷溶液分别在200～400 nm进行紫外扫描，马拉硫磷在波长为（225±2） nm处有最大吸收，分别选定了225、230和245 nm在相同试验条件下测定。结果显示，在波长为225 nm时干扰最少，且在此波长下可以得到较好的峰形，故选用225 nm作为检测波长。

2.2  色谱条件的选择

本试验选择反相HPLC法测定精制马拉硫磷溶液中马拉硫磷的含量，仪器及试剂普适性更强。试验发现，流动相比例影响出峰时间和马拉硫磷与辅料杂质之间的分离度，甲醇大于75%时分离度不能满足《中国兽药典》的规定，降低甲醇比例可改善分离度，但保留时间会延长，且不同色谱柱分离效果不同，本试验选择的色谱柱及色谱条件经验证适用于样品含量测定，在此色谱条件下，马拉硫磷的保留時间为11.106 min，分离效果较好（图1）。

2.3  方法评价

2.3.1  线性试验  称取马拉硫磷对照品250 mg，置于50 mL量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密量取贮备液适量，用甲醇分别稀释至马拉硫磷浓度为0.050、0.125、0.25、0.500、1.000、1.500 mg/mL，各取10 μL进样，记录色谱图，以浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积（mV）为纵坐标进行线性回归（图2），得回归方程：y=4 373.4x-47 977，r=0.999 8，可见在此色谱条件下马拉硫磷在0.050～1.500 mg/mL线性关系良好。

2.3.2  专属性试验  在“1.3”色谱条件下，马拉硫磷与杂峰分离效果好，含量测定不受其他杂质峰的干扰（图3、图4）。

2.3.3  回收率试验  按处方比例配制成45%的马拉硫磷溶液，按“1.3”色谱条件进行测定，按外标法计算马拉硫磷的含量及回收率（表1）。由表1可知，精制马拉硫磷溶液的平均回收率为101.6%，RSD为0.9%。

2.3.4  精密度試验  取对照品溶液（马拉硫磷500 μg/mL），按“1.3”色谱条件进行测定，连续进样6次，测得马拉硫磷峰面积平均值为2 175 165，RSD为0.3%。

2.3.5  稳定性试验  取对照品溶液（马拉硫磷500 μg/mL），按“1.3”色谱条件进行测定，室温下，在不同时间（0、2、4、6、8、10、12、24 h）分别进行测定，测得马拉硫磷峰面积平均值为2 185 441，RSD为0.8%，表明供对照品溶液在室温下放置24 h稳定。

2.3.6  样品的测定  分别取同一厂家不同批号的样品，采用“1.2”样品处理及“1.3”色谱条件进行测定，试验结果见表2。从表2中可以看出，两种方法测定出的含量结果基本一致，反相HPLC法可作为精制马拉硫磷溶液中主药的含量测定的参考方法。

3  结论

反相HPLC法测定精制马拉硫磷溶液中马拉硫磷含量时，操作简单、快速，结果准确可靠，可作为该制剂的含量测定方法，特别是对兽药企业的内部质量控制方面有一定的指导作用。

参考文献：

[1] 杨  彬，王洪成，陈  明.马拉硫磷原药中马拉硫磷含量的高效液相色谱法分析[J].精细化工中间体，2007，37（5）：70-72.

[2] 苏加强.高效液相色谱法测定农药中的马拉硫磷[J].今日科苑，2012（20）：115.

[3] 兽药国家标准（化学药品、中药卷）第一册[M].北京：化学工业出版社，2013.

[4] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典[M].北京：中国农业出版社，2016.

[5] 兽药质量标准2017年版化学药品卷[M].北京：中国农业出版社，2017.

[6] 文  娜.超高效液相色谱法代替气相色谱法测定氟乐灵含量[J].中国化工贸易，2013，1（1）：149.