IgG性质冷反应性类抗-M特异性自身抗体的鉴定与输血

任 明，江梦天，强 文，杨 茹

(武汉血液中心输血研究室，湖北武汉 430030)

MNSs血型系统中M抗原在中国人中的比例为78.37%，抗-M是一个人血液中常见的抗体，多为自然产生，以IgM性质为主，且只在低于37 ℃时有反应，故临床意义不大，部分为IgG性质抗体，可导致严重的新生儿溶血病[1]，类抗-M属于类特异性自身抗体，目前国内报道较少。本实验室最近发现1例M抗原阳性的急性白血病患者抗体鉴定呈现抗-M特异性，对其进行抗体鉴定和相关特性检测和分析，证实该抗体为IgG性质冷反应性类抗-M特异性自身抗体，报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者，男，2岁1月，2018年5月因全血细胞减少入院，诊断为急性淋巴细胞白血病，既往无输血史。入院查得RBC 2.34×1012/L，Hb 59g/L，WBC 2.2×109/L，PLT 37×109/L，血型O型RhD阳性，意外抗体筛查阳性，送至本科室进行检测。

1.2试剂与仪器 单克隆抗-A、抗-B血清、IgM抗-D、抗-IgG,C3d抗人球蛋白试剂及筛选细胞均由上海血液生物技术有限公司提供；ABO反定型细胞为自制；其余还包括谱细胞、IgG抗-M、IgG抗-N(Sanquin)，2-巯基乙醇(2-Me，Baso)、低离子抗人球蛋白卡(Bio-Rad)。主要仪器包括KA-2200离心机(日本KUBOTA)、ID-Incubator 37 SI 达亚美卡式孵育器、ID-Centrifuge 12 SⅡ卡式离心机(Bio-Rad)和国华HH-60恒温水浴箱。

1.3方法 采用试管法对患者ABO血型、MN表型定型；用盐水介质法及盐水抗人球蛋白法进行抗体特异性鉴定；吸收试验采用4 ℃吸收60 min，洗涤采用冰盐水，放散试验采用56 ℃热放散10 min；其他试验严格按照输血技术操作规程[2]和相关试剂说明书操作。

2 结 果

2.1血型鉴定 患者血型为O型RhD阳性，MN血型表型为MN。

2.2直接抗人球蛋白试验 试管法多特异性抗人球蛋白为阴性；红细胞4 ℃盐水洗涤3次后，微柱凝集卡多特异性抗人球蛋白试验为弱阳性(1+w)。

2.3意外抗体鉴定(患者血清和红细胞放散液) 患者血清在室温盐水介质中呈现抗-M特异性，37 ℃抗人球蛋白介质中未检出抗体；患者红细胞56 ℃热放散10 min，放散液利用抗人球蛋白微柱凝集卡分别在37 ℃和4 ℃进行抗体鉴定，前者未检出抗体，后者呈现抗-M特异性，见表1。

2.4抗体性质检测 将血清2-Me处理后，分别在4 ℃、室温、37 ℃条件下孵育10 min，与MM表型谱细胞(MM cell)、NN表型谱细胞(NN cell)反应，同时用原血清平行对照试验，提示该抗体为IgG性质冷反应性抗体，且最佳反应温度为4 ℃，其血清学反应结果见表2。

2.5吸收放散试验鉴别类特异性抗体 盐水试管法条件下患者血清与NN cell在4 ℃呈现凝集反应，而2-Me处理血清呈阴性反应，说明患者血清中存在冷抗体，故对患者血清2-Me处理后，利用MM、NN表型的红细胞进行吸收试验(4 ℃、60min)和放散试验(56℃、10min)；利用MM cell、NN cell检测吸收后血清及放散液，显示该抗体能被MM表型红细胞吸收并放散，能被NN表型红细胞吸收但放散液未检出抗体，其血清学反应结果见表3；利用谱细胞鉴定吸收后血清及放散液抗体特异性，抗体鉴定结果见表4。

表1 患者血清、红细胞抗体放散液与谱细胞反应格局

注：NS为盐水介质；卡为抗人球蛋白微柱凝胶卡；/表示该项无数据

表2 血清和2-Me在不同温度下孵育处理后与表型谱细胞反应的情况

表3 吸收后血清和放散液在不同温度下的凝集情况

表4 吸收后血清和放散液与谱细胞反应格局

注：反应条件为微柱凝胶卡4 ℃孵育15 min

2.6输血情况 筛选O型RhD阳性、NN表型洗涤红细胞，并经盐水介质法、4 ℃抗人球蛋白微柱凝胶卡进行交叉配血，且交叉配血相合的血液予以输注，患者共输血3次，每间隔10 d输注1 U，其输血前后相关指标见表5。

表5 输血前后RBC、HGB、HCT指标对比

3 讨 论

自身抗体多发生于自身免疫性疾病患者血清中，通常与筛选细胞、谱细胞呈现非特异性凝集；少数自身抗体特异性呈现与某一抗原明显相关，涉及Rh、Kidd、Duffy、Kell、MNSs等血型系统，国内报道其发生频率为4.4%～8.6%[3-4]。自身抗体的特异性依据其是否能被抗体相对应抗原阴性的红细胞吸收，分为真实特异性自身抗体和类特异性自身抗体，前者不能被抗体相对应抗原阴性红细胞吸收；后者不仅能被抗体相对应抗原阳性红细胞吸收也能被抗原阴性红细胞吸收，多为类似Rh系统血型抗体，类抗-M特异性较为少见[5]，国内报道类抗-M特异性自身抗体中，有1例产妇，1例新生儿，2例AIHA患者[6-9]。

本病例中，抗体鉴定呈现室温反应性抗-M特异性，但患者红细胞MN表型鉴定为M抗原阳性，且既往无输血史，于是进一步查找原因。该患者红细胞直接抗人球蛋白试验呈弱阳性，对红细胞进行放散试验后鉴定放散液抗体特异性，发现该抗体在4 ℃能检出，而37 ℃不能检出(表1)。该抗体2-Me处理前后与MM cell在室温反应凝集强度无明显变化(表2)，说明该抗体为IgG性质且能在室温盐水介质中发生凝集反应，而在37 ℃、室温、4 ℃条件下与MM cell反应凝集强度依次增强，证实该抗体为冷反应性抗体，且4℃反应最佳。利用MM和NN表型的红细胞分别对血清进行吸收与放散试验，发现二者吸收后血清均未检出抗体，表明该抗体能被MM和NN表型红细胞吸收；MM表型红细胞吸收后放散液与MM cell在4℃存在反应性，其凝集强度1+(表3)，明显弱于2-Me处理血清与MM cell在4 ℃的凝集强度3+(表2)，分析可能是抗体较弱且亲和力较低，在洗涤过程中容易解离，从而导致凝集减弱，同理，NN表型红细胞吸收后放散液与MM cell不反应，亦可能是抗体在吸收放散试验过程中存在损失导致假阴性反应。依据表3反应情况，进一步对吸收后血清及放散液利用抗人球蛋白凝胶卡在4 ℃进行抗体鉴定，结果显示NN表型红细胞能吸收该抗体但放散液未检出抗体，MM表型红细胞能吸收并放散该抗体且抗体特异性为抗-M，进一步验证了表2的结果，结合患者自身存在M抗原，综合分析该抗体为IgG性质冷反应性类抗-M特异性自身抗体。

该患者诊断为急性淋巴细胞白血病，未使用过免疫抑制剂类药物，推测可能由于疾病本身导致类抗-M特异性自身抗体产生，该抗体与新生儿M溶血病中的抗-M抗体有相似之处[9-11]，二者相比，均属于IgG性质冷反应性抗体，但本例患者标本属于类特异性自身抗体，而M溶血病中的抗-M抗体则属于同种免疫性抗体。针对此类抗体，除了选择不含抗体对应抗原的血液外，还应依据抗体特性，选择该抗体最佳反应条件进行交叉配血试验，避免常规试验方法漏检导致假阴性结果。本病例依据该抗体的特征，选择O型RhD阳性、NN表型且盐水介质及4 ℃抗人球蛋白凝胶卡交叉配血试验相合的洗涤红细胞予以输注，患者共输血3次，每间隔10 d输注1 U洗涤红细胞，输注后患者面色较输注前红润，RBC、HGB、HCT均明显上升(表5)，取得了较好的输注效果。