cobas s201核酸混样检测系统性能确认研究

侯云 冯秋霞 杨忠思 青岛市中心血站 检验科 （山东 青岛 266071）

内容提要： 目的：确认cobas s201核酸检测混样系统在使用前，其检测性能是否满足血液筛查的要求。方法：对cobas s201检测病毒学标志进行符合率、检测限、灵敏度和特异性验证。结果：cobas s201检测系统符合率验证合格；其HBV、HCV、HIV-1 95%检出限分别为2.08IU/mL、9.17 U/mL、25IU/mL；其灵敏度和特异性结果为“通过”。结论：cobas s201核酸检测系统的性能验证符合要求，可以满足血站血液筛查需求。

《血站技术操作规程（2015版）》规定血液筛查检测方法需要血清学检测的同时进行病毒核酸检测[1]，我站于2010年作为卫生部血站核酸检测试点单位，开始使用核酸混检系统cobas s201仪器对献血者标本进行病毒核酸检测，以降低经输血传播疾病的风险。本文就cobas s201核酸检测仪器的性能确认方法进行探讨，确认其性能是否可以满足血液筛查的要求。

1.材料与方法

1.1 标本来源

①阴性标本：将酶免和核酸检测结果是合格的标本进行汇总，作为阴性标本。②阳性标本：使用北京康彻思坦公司生产的HBV DNA质控品（100IU/mL）、HCV RNA质控品（500 IU/mL）HIV-1 RNA质控品（1000IU/mL）。③脂血、溶血标本：重度脂血标本为甘油三酯大于6.3mmol/L，因脂血报废的其他检测项目均合格的血浆。溶血标本为血红蛋白含量约为5000mg/L，将不足量报废的血液标本在-80˚C下冷冻10min制得，酶免和核酸检测合格。

1.2 仪器与试剂

Cobas s201核酸系统（美国罗氏），cobas TaqScreen MPX试剂盒（美国罗氏，批号324501），cobas TaqScreen MPX质控品（美国罗氏，批号：326265）。

1.3 方法

1.3.1 符合率验证。以参加卫生部临床检验中心的室间质评数据分析，成绩在80%以上则认为该项目的正确度符合要求。

1.3.2 检出限验证。将病毒质控品用阴性血浆进行倍比稀释，HBV浓度分别为：10IU/mL、5IU/mL、2.5IU/mL、1.25IU/mL、0.60IU/mL；HCV浓度分别为50IU/mL、25IU/mL、12.5IU/mL、6.25IU/mL、3.00IU/mL；HIV-1浓度分别为100IU/mL、50IU/mL、25IU/mL、12.5IU/mL、6.25IU/mL。每个样本重复实验10次，使用统计软件分析该系统对HBV、HCV、HIV-1的95%检测限及置信区间。

1.3.3 灵敏度和特异性验证。计算本实验室参加卫生部临检中心室间质评的40个标本的对比结果，将结果输入表1通过公式计算各项性能指标。

1.3.4 统计方法。应用SPSS19.0软件计算该系统分析物95%检出限及置信区间。

2.结果

2.1 符合率验证结果

本实验以最近4次参加的卫生部临检中心室间质评成绩100%，认为实验验证合格。

2.2 检出限验证结果

HBV、HCV、HIV-1 95%检出限分别2.08IU/mL、9.17 U/mL、25IU/mL，其中HBV、HIV-1 95%检出限低于厂家提供的检出限，而HCV 95%检出限高于厂家（6.8IU/mL）提供的检出限。

2.3 灵敏度和特异性验证结果

通过公式计算核酸检测结果灵敏度和特异性均为100%，可判定该项目灵敏度和特异性验证结果为“通过”（见表1）。

3.讨论

病毒核酸检测是从基因水平进行血液筛查的方法，相较于血清学检测，有更高的特异性和灵敏性，其可检测出血液标本中极低含量的病毒，大大缩短了病毒检测的“窗口期”[2]。Cobas s201核酸检测仪器的混样系统、提取、扩增的各个环节需要仪器的自动化完成，各个环节人为干扰因素少，故仪器的检测性能直接关系到实验结果的准确性和可靠性[3]。本文通过对Cobas s201核酸仪器的符合率，检出限，灵敏度和特异性，以及抗干扰能力等参数进行性能方面的探讨。

表1. 灵敏度和特异性验证公式

检出限的验证，检出限指检测仪器能检测到的分析物的最小含量或最低浓度。目前核酸系统验证方法多是购买适合本实验室仪器检测的血清盘，统计分析检测系统对该血清盘的检出率。姚凤兰等用此方法对Procleix Ultrio Assay核酸检测系统的检出限进行验证[4]。血清盘验证方法可以准确计算出95%最低分析物检测值，可以与厂家说明书上的数据进行比较，并可以直观的判定该检出限是否在该实验室检测系统性能判定的范围内。本实验室采取先对病毒质控品进行倍比稀释，再依据初步检测结果选取包含反应性和非反应性样本的浓度范围，一共五个浓度的标本，分别检测10次，最后应用统计软件分析该检测系统对分析物的95%的检出限。此方法可以很大程度上减少检测试剂的浪费，同时可以计算出95%最低检测限数值，使其与厂家提供的数值有可比性。结果显示该系HBV、HIV-1低于厂家的检出限，而HCV高于厂家给出的检出限，差异的原因可能是所选标本株，或是标本验证次数少引起的偏差，其他实验室同样有类似的偏差[4,5]。

符合率的验证是为了确认本实验结果与真值的一致性，Cobas s201检测系统是混检系统，混检结果为反应性时要进一步拆分确定哪一个标本为阳性标本。本实验以最近4次参加的卫生部临检中心室间质评成绩100%，认为实验验证合格。灵敏度和特异性验证是通过检测数据与赋值材料数据的对比，验证本实验室定性实验的敏感度和特异性为“通过”。

本实验分别从符合率、检出限、灵敏度和特异性等方面来验证Cobas s201检测系统的检测性能，结果显示均符合要求，满足我站血液筛查需求。