一例猪巴氏杆菌病的诊断与防控

王久红，孙 琪，于学祥，张丙周，库旭钢，范盛先，何启盖，3

（1.华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070；2.农业微生物学国家重点实验室，武汉 430070；3.华中农业大学动物疫病诊断中心检测实验室，武汉 430070）

猪巴氏杆菌病（Swine pasteurellosis），也称“猪肺疫”、“锁喉风”和“肿脖子病”，主要引起猪只咽喉肿胀、呼吸困难、急性败血症和肺炎等症状。该病广泛分布于世界各地，是猪的一种常见传染病，发病率达40%，死亡率在5%左右，给养猪业造成巨大经济损失[1]。多杀性巴氏杆菌属于猪呼吸道内的一种常见条件性致病菌[2]，根据其荚膜抗原可以分为5 种血清型，即A、B、D、E 和F 型。目前国内猪群中主要流行的是A 型和D 型，因其能产生毒素，又被称为产毒性多杀性巴氏杆菌。该病与气候变化、饲养管理不当等应激因素紧密相关[3]。本文就一例地方黑猪感染巴氏杆菌所致发病开展了一系列的诊断，并有针对性地提出了治疗和防控措施，效果显著。可为猪场巴氏杆菌病的诊断与防控提供参考。

1 发病情况

2019 年1 月，湖北省某地方黑猪猪场，肥育猪只出现精神极度萎靡、呼吸困难、张口伸舌、呈犬坐姿势，后期出现急性死亡等呼吸道疾病症状。到该猪场进行实地调查，该场发病猪只主要集中于肥育后期，其猪舍环境较差，刺激性气味较重，氨气含量严重超标，且养户未及时将发病猪只与无症状猪只隔离。挑选具有明显症状的3 头病（死）猪只解剖观察，发现其口腔及气管内充满泡沫样分泌物（图1A，图1B）；肺脏间质水肿、增宽（图1C，图1D），其它脏器未见明显异常病变。根据场内情况、临床症状和病理剖检，初步怀疑上述症状是由呼吸道细菌感染所致，详细了解该场呼吸道病原感染情况还有赖于实验室诊断。

图1 临床剖检结果

2 实验室诊断

取完整的气管和肺脏进行细菌分离，随后采集肺脏、淋巴结和扁桃体等组织，冷藏保存与平皿一起，迅速带回华中农业大学动物疫病诊断中心进行检测。

2.1 病毒性病原检测

将3 头病死猪只（分别编号1、2、3）对应编号的肺脏、淋巴结和扁桃体等组织合并，加入灭菌PBS，于匀浆器进行研磨，反复冻融3 次，离心取上清液，利用病毒核酸提取试剂盒进行核酸提取，使用华中农业大学动物疫病诊断中心检测实验室建立的PCR 方法进行检测，所用引物由上海生工生物科技有限公司合成，详细序列见表1。

表1 PCR 引物序列

检测结果显示，PRRSV（蓝耳病病毒）、PCV2（圆环病毒2 型）和PRV（伪狂犬病病毒）等病毒性病原检测结果均为阴性（图2A，图2B）。

图2 病料PCR、RT-PCR 扩增结果

2.2 细菌分离鉴定

取完整的肺脏样品进行细菌分离鉴定，在加有血清和NAD 的TSA 平皿上，37 ℃培养24 h，观察分离细菌的菌落形态（图3A，图3B，图3C），根据菌落形态特点初步怀疑其为多杀性巴氏杆菌，并选取疑似致病菌分离纯化培养。使用煮沸法制备模板，采用PCR 方法检测链球菌（SS）[4]、副猪嗜血杆菌（HPS）、胸膜肺炎放线杆菌（APP）、支气管败血波氏杆菌（Bb）[5]、多杀性巴氏杆菌（Pm）[6]（引物由上海生工生物科技有限公司合成）。

图3 细菌分离菌落形态

细菌检测结果显示，该场仅检出多杀性巴氏杆菌（图4），并利用多重PCR[7]方法确定了其血清型，为A 型（图5）。

图4 细菌样品mPCR 扩增结果

图5 细菌模板巴氏杆菌分型PCR 扩增结果

结合猪场的现场调查、病理剖检及实验室诊断，确诊该场是由A 型产毒素型多杀性巴氏杆菌感染引起的猪只发病和死亡。为控制该病在猪场内的进一步发展，我们利用纸片扩散法对分离的A 型多杀性巴氏杆菌进行了药敏试验。

结果显示：该菌株对大部分抗生素敏感，尤其是恩诺沙星、环丙沙星等沙星类抗生素，而链霉素、庆大霉素等药物对其抑制效果不明显，在本试验中该菌仅对林可霉素产生耐药性。详情见表2。

表2 药敏试验结果

3 防控方案

根据诊断情况及猪场的具体问题，给出如下几方面建议。

（1）针对保育及肥育猪群实施拌料给药，推荐使用恩诺沙星连续拌料5 d，停药7 d 后使用环丙沙星连续拌料5 d，均按说明书剂量使用。

（2）产房哺乳仔猪在断奶前可使用恩诺沙星饮水连续给药5 d，用于保健和预防。

（3）针对发病的保育、肥育及母猪群，可选择免疫猪肺疫活疫苗或自家苗（由有资质的科研院所或企业配制）。由于是地方猪种，为避免出现副反应，可先免疫5 头母猪和10 头断奶仔猪观察效果，7 d 后如无副反应，方可全群免疫，需注意一猪一针头。

（4）生产管理。

①实行全进全出生产模式，禁止混群，对发病猪只要及时隔离，并对病死猪进行无害化处理。

②加强消毒，每批次猪群转移后充分消毒并空栏5 d。

③加大空气流通，降低猪舍内氨气含量，改善栏舍空气质量。

4 讨论与结论

采取上述防控方案后，对该场进行跟踪回访，每周统计新发病例及转归病例，评价方案效果，如有效，持续使用该方案，如效果不理想也可及时发现问题。1 个月后，该场猪只病情恢复稳定，可见此防控方案确实可行，具有一定的参考和指导意义。

从本案例的诊断结果来看，猪细菌性呼吸道疾病仍对我国猪场影响极大，需加强综合防控。不当的饲养管理是其发生的一个重要因素，本案例中，通风不良、卫生条件差给致病菌大量增殖提供了条件，且发病猪只与无症状猪只未进行隔离，加剧了病原的传播，故猪场应加强饲养管理，猪舍内要合理通风换气，搞好环境卫生。现阶段，非洲猪瘟给我国养猪业造成了极大的损失，猪场应提高生物安全防控意识，及时隔离发病猪只，并做好消毒工作，在防控非洲猪瘟的同时，加强对PRRSV、PCV2 和PRV 等病毒性和细菌性病原的防控，净化这些病原，提高猪场效益。据场主介绍，该地方黑猪较少使用抗生素和疫苗，从药敏试验结果也可看出，该菌株对大部分抗生素高度敏感，便于细菌性疾病的快速扼制，减少经济损失。抗生素的谨慎使用有利于养殖户保持猪场生产效益的同时，也有利于国家2020 年全面实现“无抗”养殖政策的实施。

本案例经过实地调查、临床观察、病理剖检和实验室诊断的有效结合，做出了合理的综合诊断。并根据检测结果，制定了一系列针对性的治疗及防控措施，通过连续跟踪回访，显示该措施切实可行，行之有效，这为猪场多杀性巴氏杆菌病的诊断和防控提供了基本原则和数据上的支持。