肝康灵颗粒的质量标准研究

★ 余学如 章海

(南昌市第九医院药剂科 南昌 330002)

肝康灵颗粒是由绵茵陈、金钱草、赤芍、栀子、茯苓、田基黄、虎杖及白马骨等8味药材与适量辅料加工而成，是南昌市第九医院院内制剂(标准号为GZJ-0159-(1)-2006)，具有清热利湿、凉血活血的功效，主要用于病毒引起的急性黄疸性肝炎等症，临床效果良好，疗效确切[1]。肝康灵颗粒中虎杖具有凉血活血、清热解毒等功效，虎杖苷是虎杖中的重要有效成分之一，具有重要的开发和临床应用价值[2]；茵陈则具有保肝利胆、利湿退黄等功效[3]。该制剂现有的质量控制方法以赤芍定性鉴别和卫生学检查为主，无含量测定等项目，质量控制单一。为了加强该制剂的质量控制，更好地保证其临床疗效，本研究分别对虎杖、绵茵陈进行薄层色谱(TLC)定性鉴别，同时采用高效液相色谱法(HPLC)对肝康灵颗粒中虎杖苷进行定量分析。

1 仪器与试药

岛津LC-20ADXR型超快速高效液相色谱仪；Millipore Simplicity超纯水器(思克密坦博公司)；AUW220D型电子分析天平(日本岛津)；AB135-S型十万分之一天平(Mettler Toledo)。

肝康灵颗粒(南昌市第九医院自制，批号151201、151202、151203，规格:7 g / 袋)；大黄素(批号110741-200506)、茵陈对照药材(批号121555-201101)及虎杖苷对照品(批号111575-200502，纯度为99.94 %)均购于中国食品药品检定研究院；硅胶G薄层色谱板(购于青岛海洋化厂)；甲醇、乙腈为色谱纯(Fisher公司)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别

2.1.1 虎杖 取本品颗粒，研细，取粉末3.0 g，加水30 mL和浓硫酸2 mL，回流30 min，过滤，滤液用三氯甲烷萃取两次，每次20 mL，合并三氯甲烷层，水浴蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即为供试品。另取大黄素对照品1 mg，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，为对照品溶液。照2015版《中国药典》四部中薄层色谱法(通则0502)试验，取上述二种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层液为展开剂，放入，展开，取出，晾干，在日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点，阴性对照品无干扰。

2.1.2 绵茵陈 取本品颗粒，研细，取粉末3 g，加乙醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，加乙酸乙酯萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯层，蒸干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另茵陈对照药材0.2 g，加甲醇5 mL，超声处理20 min，取上清液作为对照品溶液。照2015版《中国药典》四部中薄层色谱法(通则0502)试验，取上述二种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(4∶2)为展开剂，放入，展开，取出，晾干，再喷以10 %硫酸乙醇，在365 nm下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同蓝色斑点，阴性对照品无干扰，见图1。

2.2 虎杖苷的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:月旭C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相∶乙腈与水(18∶82)；流速:1.0 mL / min；检测波长:306 nm；柱温:25℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取虎杖苷对照品0.00551 g ，置于250 mL棕色容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含有虎杖苷22 μg的溶液(按对照品含量计)。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末0.3 g，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，称定重量，超声处理30 min(功率250 W，频率50 kHz)，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足失重，摇匀，过0.45 μm滤膜，取续滤液，即得。

图1 绵茵陈薄层色谱图

2.2.4 阴性对照溶液的制备 按肝康灵颗粒的处方规格和制备工艺，制成缺虎杖药材的样品，同“2.2.3”项下制备方法，制成虎杖阴性样品。

2.2.5 专属性试验 取虎杖苷对照品、供试品及阴性对照溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行分析，结果，阴性溶液中未出现虎杖苷，表明阴性无干扰，见图2。

A.虎杖苷对照品;B.供试品;C.阴性样品

2.2.6 线性试验 取虎杖苷对照品溶液，分别进样1、4、7、10、13、16 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以进样量(μg)为横坐标X，峰面积(A)为纵坐标Y，进行线性回归，得虎杖苷在0.022～0.352 μg内呈良好线性，回归方程为Y=3 254 281.385 3X+2230.381(r=0.9999)。

2.2.7 精密度试验 精密吸取虎杖苷对照品溶液(浓度为0.022 mg / mL)10 μL进样，连续进样6次，记录峰面积，结果虎杖苷峰面积的RSD为0.35 %。表明仪器精密度好。

2.2.8 稳定性试验 取同一批(批号：151202)样品，按供试品制备项下方法制备溶液1份，分别于0，1，4，8，12 h各取10 μL进样，记录峰面积，结果测得虎杖苷峰面积的RSD为0.51 %。表明肝康灵颗粒溶液在12 h内稳定。

2.2.9 重复性试验 取同一批(批号：151202)样品，按供试品制备项下方法制备溶液6份，各取10 μL进样，记录峰面积，测得虎杖苷平均含量为2.53 mg/g，RSD为2.65 %，表明该方法重复性较好。

2.2.10 加样回收率试验 分别称取已知含量的同一批样品(151202)约0.3 g共六份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入以稀乙醇为溶剂，浓度为0.01576 mg/mL的虎杖苷对照品溶液25 mL，称重，超声处理30 min(功率250 W，频率50 kHz)，放冷，补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

表1 虎杖苷加样回收率实验

2.2.11 样品测定 分别称取3批样品粉末0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入稀乙醇25 mL，称重，超声处理30 min(功率250 W，频率50 kHz)，放冷，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。取样注入高效液相色谱仪，根据线性方程计算虎杖苷含量，结果见表2。

表2 肝康灵颗粒中虎杖苷含量 mg/g

3 讨论

在TLC鉴别中，借鉴2015年版《中国药典》中TLC法并参照有关文献，对虎杖和绵茵陈进行薄层鉴别试验，结果表明虎杖和绵茵陈色谱分离良好，阴性对照无干扰，故采用虎杖、绵茵陈作为该制剂定性鉴别是可行的。资料表明，TLC用于鉴定参榆颗粒中的茵陈时具有斑点清晰和分离度好等优点[4]； TLC用于鉴定痛风胶囊中的虎杖时亦具有斑点清晰和阴性无干扰等优点[5]。

根据选取的指标化学成分，本实验考察不同溶剂的提取(甲醇、50 %甲醇、70 %甲醇、乙醇、水、稀乙醇)以及不同的提取方法(超声、回流)，结果发现，稀乙醇为最佳提取溶剂，提取方式选择超声。在流动相的选择上，参考了2015版《中国药典》中虎杖药材项下虎杖苷的测定方法，比较了乙腈-冰醋酸水溶液、乙腈-水，乙腈-磷酸水，结果发现乙腈-水对色谱峰的分离效果好，峰形对称，无拖尾现象。

三批样品中，虎杖苷的含量差异不大，稳定可控。由于医院制剂的质量要求面临严峻的考验，本实验可为肝康灵颗粒质量控制提供一定的依据，保证该制剂的临床疗效。