桑叶多糖对2型糖尿病大鼠IRS-2mRNA表达的影响

刘洪凤　宋铁军　杨勇　任岩海　岳辉　李齐　薛继婷　赵聪

【摘 要】目的：观察桑叶多糖对2型糖尿病大鼠胰腺组织胰岛素受体底物-2（IRS-2）mRNA表达的影响。方法：Wistar大鼠尾静脉注射链脲佐菌素（STZ）制备2型糖尿病模型，将其随机分为正常组、模型组、桑叶多糖高、中、低剂量治疗组。给药第8周后，RT-PCR法检测胰腺IRS-2mRNA表达。结果桑叶多糖可上调IRS-2mRNA表达（P<0.01）。结论：桑叶多糖能够改善2型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗，其作用机制可能与上调胰腺IRS-2mRNA表达有关。

【关键词】桑叶多糖;2 型糖尿病;胰岛素受体底物-2

【中图分类号】R284.2【文献标识码】A【文章编号】1005-0019（2019）22-0-01

2型糖尿病高血糖的主要原因是IR，改善IR对于预防和治疗2-DM至关重要。胰岛素受体底物-2（insulin receptor substrate-2， IRS-2）是胰岛素信号传导受体后水平中的重要介质，该基因在表达数量上的缺陷可能参与了IR的形成[1]。桑叶多糖（mulberry leavespolysaccharide，MLP）是桑叶降血糖作用的主要功效成分。本实验从分子生物学角度研究MLP对2-DM大鼠IRS-2基因表达的影响，探讨其降低2-DM大鼠IR的分子生物学机制，以期为治 疗 2-DM 提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料 清洁级 Wistar大鼠60只，2月龄，体重（200±50）g，雌雄各半;MLP购自南京泽朗医药技术有限公司。

1.2 大鼠模型的制备及分组 大鼠适应性喂养 1周后随机选取 50只，给以高脂高糖饮食喂養; 另取正常大鼠10只，给以基础饲料饮食。8周后，共筛选出 IR 模型大鼠 50只，尾静脉注射STZ注射液 25mg /kg。正常组（A）大鼠，注射相 同 体 积 的 柠 檬 酸 钠-柠 檬 酸 缓 冲 液。2d后，以11.1mmol/L≤FPG <33.3mmol /L 且伴有糖耐量减退和IR者为早期 2-DM胰岛素抵抗大鼠模型成功 。选取造模成功的40只大鼠随机分为四组，每组10只，分别为模型组（B）、桑叶多糖高（C）、中（D）、低（E）剂量治疗组。桑叶多糖治疗组分别给予腹腔注射MLP 1.0、0.5、0.25g/（kg·d），正常组和模型组大鼠，每日给予等量无菌饮用水腹腔注射。药物干预8周后处死大鼠取材备用。

1.3 观察指标及检测方法

1.3.1 一般状况 观察各组大鼠饮食情况、行为、毛发光泽度、精神状态、活动状态等。

1.3.2 胰腺IRS-2 mRNA 检 测 Trizol 法提取大鼠胰腺组织总RNA，经琼脂糖凝胶电泳 RNA 显示 18S、28S 两条带，紫外分光光度计测A值计算RNA样品纯度，A260： A280>1.8表明纯度高。应用RT-PCR法检测给药组、模型组、正常组大鼠胰腺组织IRS-2 mRNA表达。PCR 反应条件：94℃，5 min; 94℃，35s; 57℃，45s; 72℃，35s，35cycle;退火温度，60℃。PCR 产物经 1.5% 琼脂糖凝胶电泳后经紫外透射反射分析仪摄片，应用 Quantity One 4.6.2 软件测定吸光度，以IRS-2/β-actin 条带吸光度的比值作为待测基因的相对表达水平。

1.4 统计学方法 统计学处理采用 SPSS 19.0软件进行，计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q 检验，以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况 正常组大鼠精神状态良好，反应灵敏，毛色有光泽，活动正常。模型组大鼠行动迟缓，精神萎靡，毛凌乱且无光泽，多饮、多食、多尿、消瘦较明显。MLP 治疗组大鼠精神状况较好，反应较灵敏，毛色好，较模型组大鼠体重有所增加，较正常组反应灵敏度差，但仍高于模型组。

2.2 大鼠胰腺组织IRS-2 mRNA 表达情况 正常组胰腺组织 IRS-2mRNA 呈高水平表达，扩增后得到 IRS-2（523bp） 和β-actin （452bp）两个片段。图像分析结果显示，与正常对照组相比（9.78±1.67），模型组大鼠IRS-2mRNA 表达明显降低 （3.85±2.39，P<0.01） ; 与模型对照组比较，MLP高、中、低剂量治疗组 IRS-2mRNA 表达明显增高（7.61±1.76、5.95±3.43 、4.27±2.23，P<0.01）。

3 讨论

胰岛素受体是胰岛素信号转导通路中重要信号蛋白，被激活后，可以使下游的IRS1 和 IRS2 磷酸化继而促进脂肪肌肉利用葡萄糖，促进肝脏合成糖原，从而降低血糖。IRS-2在调节胰岛素及控制胰腺β细胞发育中发挥重要作用。桑叶是囯家卫生部门认定的 “药食同源”植物叶，是国际食品卫生组织认定的“人类 21 世纪十大保健食品之一”。 MLP有降血糖、降血脂、抗氧化等功能[2][3]，利用领域广阔，潜力巨大。本研究结果提示，MLP可以改善IR，提示其分子机制可能与上调胰腺 IRS-2mRNA 表达有关。

参考文献

Anjali G， Kaur S， Lakra R， et al.FSH stimulates IRS-2 expression in human granulosa cells through c AMP/SP1，an inoperative FSH action in PCOS patients[J].Cell Signal， 2015， 27（12）： 2452-2466.

任岩海，刘洪凤，韩智学.桑叶多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖血脂的影响[J].中医药学报，2013，41（1）：20-21.

高欣妍，王海英，刘志明.桑叶化学成分及药用功效研究进展[J].广东化工，2017（6）：83.