狗肝菜中有机酸的提取工艺及含量测定

姚山梅

(广西崇左市凭祥市夏石中学 广西 凭祥 532600)

1.材料与方法

1.1 实验材料。仪器 KQ3200B型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；烘箱(上海福玛实验设备有限公司)；电子天平(奥豪斯仪器上海有限公司)；密封型摇摆式中药粉碎机(无锡市江成液压机械公司)

试剂 无水碳酸钠基准试剂(天津市化学试剂批发公司)；邻苯二甲酸氢钾(天津市光复科技发展有限公司)；氢氧化钠(分析纯,成都市科龙化工试剂厂)；盐酸(分析纯,广东省精细化学品工程技术研究开发中心)；酚酞(成都市科龙化工试剂厂)；溴甲酚绿 (成都市科龙化工试剂厂)；甲基红(成都市科龙化工试剂厂)；甲基橙(广州化学试剂厂)；95%乙醇(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)

样品 狗肝菜，购自崇左菜市场

1.2 实验方法。采用单因素实验、正交实验,探究乙醇浓度、料液比、超声波提取时间及温度对狗肝菜中总有机酸提取量的影响规律，利用酸碱滴定法对其总有机酸的含量进行测定，最终确定最佳提取条件。

工艺流程：采集狗肝菜→清洗→烘干→粉碎→乙醇浸润→超声波振荡→总有机酸含量测定

2.结果与分析

2.1 单因素实验。

2.1.1 不同乙醇浓度对提取效果的影响。准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度65℃、超声提取时间30min、料液比﹝狗肝菜叶粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30的条件下，分别在乙醇浓度55%，65%,75%，85%,95%条件下提取，比较不同乙醇浓度对提取物中总有机酸含量的影响，乙醇浓度小于75%之时,有机酸含量随着乙醇浓度的增大而增加,但超过75%时,总酸含量反而下降。这可能是因为乙醇浓度过小时，不利于有机酸的浸出；浓度过大时，引起产物结构的变化。因此提取有机酸乙醇的浓度为75%时为最优。

2.1.2 不同料液比对提取效果的影响。准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度为65℃、超声提取时间为30min,乙醇浓度为85%的条件下，分别于液料比为1:10,1:20,1:30，1:40,1:50的条件下提取，比较不同料液比对提取物中总有机酸含量的影响，当料液比小于1:30时，有机酸提取率随着料液比的增加而增加；当料液比大于1:30时，有机酸提取率反而下降。这可能是因为料液比过小时，浸提液太小，从而影响有机酸提取；若加水过多，不利于后浓缩，因此提取有机酸料液比为1:30时为最优。

2.1.3 不同提取时间对提取效果的影响。准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取温度65℃、料液比﹝狗肝菜叶粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇浓度为85%的条件下，分别超声提取20min,30min，40min,50min,60min，比较不同超声提取时间对提取物中总有机酸含量的影响，随着时间的延长，有机酸提取率先上升后下降。说明有机酸浸出过程与时间密切相关，时间过短，有机酸浸出不充分，但时间过长，可能影响产物结构的变化，从而使提取率降低。因此提取有机酸超声提取时间为35min时为最优。

2.1.4 不同提取温度对提取效果的影响。准确称取5份狗肝菜叶粉末各1.0000g，在超声提取时间30min、料液比﹝狗肝菜叶粉末(g)：乙醇(ml)﹞1:30,乙醇浓度为85%的条件下，分别在超声提取温度55℃，60℃,65℃，70℃,75℃条件下提取，比较不同超声提取温度对提取物中总有机酸含量的影响，当提取温度小于70℃时，随着温度的升高，狗肝菜有机酸提取率随之增大；当温度继续升高，有机酸提取率呈下降趋势。说明温度升高有利于有机酸的浸出，但温度过高会影响有机酸的稳定性。因此提取有机酸超声提取温度为65℃时为最优。

2.2 验证性实验。精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g3份，在最佳组合条件,即乙醇浓度75%，料液比1:30，提取时间35min，提取温度65℃的条件下，按拟定方法进行提取，测定，计算含量。在此最佳参数组合条件下，有机酸含量的平均值为7.03%，提取率大于正交试验表中的任何一组，为最佳选择。

2.3 精密度实验。精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g，在最佳组合条件，即乙醇浓度75%，料液比1:30，提取时间35min，提取温度65℃的条件下，按拟定方法进行提取，平行测定5次，计算含量。相对标准偏差RSD为1.02%，表明该工艺提取方法测定总酸含量精密度良好。

2.4 稳定性实验。精密称取狗肝菜叶粉末1.0000g，在最佳组合条件，即乙醇浓度75%，料液比1:30,超声时间35min，超声温度65℃的条件下,按拟定方法进行提取,分别于0h，2h，4h，6h，8h，12h进行含量测定,计算含量。相对标准偏差RSD为1.35%，表明该工艺提取方法测定总酸含量在12h内是稳定的。

3.讨论

虽然中草药中有机酸类成分的提取分离及测定方法有很多，但其适用范围条件各有所差异。要选择出一种适合的提取分离和分析测定方法,除了要考虑所需要分析的有机酸类成分的结构组成和性质外，还需要充分考虑提取物中其它物质成分可能对有机酸造成的干扰。因此，在实际应用中要根据具体情况做具体分析,综合各因素考虑,以确定出最佳的提取分离及测定方法。