COX-2、Survivin在不同分型腮腺多形性腺瘤及恶性多形性腺瘤中的表达和意义

乔 柱 邹 越 张 帅 赵 虎

多形性腺瘤（pleomorphic adenoma，PA）是最常见的一种涎腺肿瘤，多发生于腮腺组织，占涎腺上皮源性肿瘤的50%以上，组织学上具有多样性，以黏液和软骨样组织的出现为特征[1]。Seifert[2]等将多形性腺瘤根据上皮基质和细胞所占比例先分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，后简分为细胞丰富型、其它型和基质丰富型。基质丰富型比较易复发，而细胞丰富型则容易恶变，并且多形性腺瘤瘤细胞的复发与恶变存在着潜在相关性[3]。恶性多形性腺瘤（malignant pleomorphic adenoma，MPA） 也可被叫作癌在多形性腺瘤中（carcinoma ex pleomorphic adenoma，ca ex PA），在涎腺恶性肿瘤中约可占到15%～20%。90%以上的恶性多形性腺瘤是因多形性腺瘤恶变所导致，并且其恶性程度显著高于常见的涎腺恶性肿瘤[4]。本研究通过检测环氧合酶COX-2、凋亡抑制蛋白Survivin 在基质丰富型、其它型和细胞丰富型多形性腺瘤中的表达，以探讨COX-2、Survivin 在不同分型腮腺多形性腺瘤中的表达及意义，从而对腮腺多形性腺瘤不同分型的诊断与治疗提供一定的帮助。

资料和方法

1.一般资料：研究对象收集保定市第一中心医院2010 年9 月～2014 年6 月66 例腮腺多形性腺瘤与18 例恶性多形性腺瘤组织石蜡病理标本。所选择石蜡标本均病理学诊断明确，组织包埋完整，临床病历资料真实可靠，取材前无其它头颈肿瘤疾病史以及放化疗史。其中男性患者39 例，女性患者45例。将所有腮腺肿瘤标本切片行HE 染色处理后置镜下观察，经两位病理科医师采用双盲法独立阅片，按照Seifert 和Donath[2]组织分型标准将多形性腺瘤进一步分为基质丰富型、其它型、细胞丰富型。设立四个实验组：A 组（多形性腺瘤基质丰富型）20 例，男性患者6 例，女性患者14 例，平均年龄大小50.4岁；B 组（多形性腺瘤其它型）24 例，男性患者11例，女性患者13 例，平均年龄大小53.8 岁；C 组（多形性腺瘤细胞丰富型）22 例，男性患者12 例，女性患者10 例，平均年龄大小48.7 岁；D 组（恶性多形性腺瘤）18 例，男性患者10 例，女性患者8 例，平均年龄大小54.8 岁。各组中的性别、平均年龄等临床病例因素的差异无统计学意义（P＞0.05），可排除上述因素的干扰具有可比性，见表1。

表1 临床病例资料

2.方法：将所有涎腺肿瘤标本切片后首先行HE染色处理后置镜下观察，经两位病理科医师采用双盲法独立阅片分型后分组。COX-2 和Survivin 的检测采用SP 免疫组化法。根据各组实验显色结果，采用计算机彩色病理图文分析系统对其进行采图与定量分析。该课题应用Motic Med 6.0 软件系统进行镜下采图摄片后进行统一分析，每例组织切片随机选取10 个不相重叠视野下拍摄，并统一调整进光量、感光度等测量信号数值，以Jpeg 格式存储图像[5]。采集图像后对图像进行测量分析，显微镜下细致观察病理切片的表达情况，选择阳性表达标本进行测量，不表达切片计为0。本实验图像应用IPP6.0 软件测得积分光密度值。积分光密度（integrated optical density，IOD）综合考虑了面积因素、染色强度比MOD 值更为准确。IOD 的值越高表明阳性表达染色越强。

3.统计学处理：检验采用SPSS 22.0 对各组IOD结果统计后，计量资料使用均数±标准差（±s）表示，数据采用单因素方差分析和t检验。

结果

1.COX-2 计量表达结果：COX-2 在A、B、C、D各组中的表达，呈现由基质丰富型多形性腺瘤、其它型多形性腺瘤、细胞丰富型多形性腺瘤到恶性多形性腺瘤中依次增强的趋势，存在显著差异，P＜0.01，具有统计学意义，见表2。其中细胞丰富型多形性腺瘤（C 组）强度值较基质丰富型、其它型多形性腺瘤（A、B 组）高，存在显著差异，P＜0.01，具有统计学意义。同时其余各组间对比P＜0.05，具有统计学意义。

2.Survivin 计量表达结果：Survivin 在基质丰富型多形性腺瘤（A 组）中的表达相对较弱，与在其它型（B 组）、细胞丰富型（C 组）多形性腺瘤中表达存在显著差异，P＜0.01，具有统计学意义，见表2。其中Survivin 在恶性多形性腺瘤（D 组）中的表达最为显著，与在多形性腺瘤（A、B、C 组）中表达存在显著差异，P＜0.01，具有统计学意义；Survivin 在细胞丰富型多形性腺瘤（C 组）中的表达比在其它型（B组）、基质丰富型（A 组）多形性腺瘤中表达较强，存在差异，P＜0.05，具有统计学意义。

表2 COX-2、Survivin 各组中IOD 值表达情况

讨论

多形性腺瘤作为涎腺良性肿瘤具有缓慢生长的特性，同时其在生物行为上具有的一定侵袭性与复发性，WTO 标准将其归类为临界瘤。Seifert[2]等将多形性腺瘤根据上皮基质和细胞所占比例先分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，后简分为细胞丰富型、其它型和基质丰富型。一般认为，细胞丰富型容易发生恶变，并且临床中一半以上的恶性多形性腺瘤来自此种分型。

COX-2 又称为环氧合酶-2，为Xie 等[6]于1991年得到的一种新型环氧合酶族的诱导性酶。目前认为COX-2 主要参与肿瘤、炎症等病态组织中前列腺素的合成。多项实验研究表明该因子在大多数正常组织中不表达或低表达，而在许多良性癌前病变及恶性肿瘤中高度表达。本实验研究结果表明：COX-2 蛋白在腮腺多形性腺瘤A、B、C、D 各组中表达的积分光密度值（IOD），各组之间呈现明显递增趋势，差异具有统计学意义（P＜0.05），代表COX-2在腮腺多形性腺瘤中的良恶性及病理分型中呈正相关性。在一定程度上反映了良性多形性腺瘤在组织形态分布中细胞丰富型的癌变倾向，提示了细胞丰富型多形性腺瘤（C 组）在良性多形性腺瘤中的恶变倾向最大。Survivin 作为凋亡抑制蛋白家族中的新成员，是目前发现的功能最强的抑制凋亡因子，在抑制细胞凋亡，参与细胞周期调节、促进肿瘤血管形成等方面发挥重要的作用[7]。目前实验研究发现在胃癌、前列腺癌、肺癌、乳腺癌等[8～11]均有其表达，使Survivin 蛋白有望成为一种新型广谱肿瘤标记物。本实验IOD 值定量结果中Survivin 在细胞丰富型多形性腺瘤（C 组）较其余两组分型强度高，且具有统计学意义（P＜0.05），可提示此分型具有较高恶变生物学倾向，具体恶变程度有待于进一步的研究。

综上所述，本课题应用免疫组织化学的方法，分析了不同分型腮腺多形性腺瘤及恶性多形性腺瘤中COX-2 和Survivin 的蛋白表达情况，提示了与多形性腺瘤恶变程度存在着正相关。但两种蛋白在肿瘤生成、发展、恶变中相互作用的具体机制还未完全阐明，有待于更全面、更深入的实验研究做进一步证实，从而为提高腮腺多形性腺瘤的临床诊疗水平提供坚实理论基础和技术支撑。