桑杜口服液急性毒性和长期毒性试验

奚照寿 姚月琴 陈晓兰

摘要：对桑杜口服液进行急性毒性和长期毒性试验。急性毒性试验：小鼠以最高浓度（4.0 g/mL）、最大给药容积（0.2 mL/10 g）于24 h内灌胃3次桑杜口服液，小鼠體质量正常，精神状态良好，毛色光亮，饮水摄食正常，给药后7 d内未出现中毒和死亡情况，表明桑杜口服液对小鼠无急性毒性。长期毒性试验：取4周龄Wistar大鼠（清洁级）80只，随机分为4组，3个药物剂量组分别灌胃4.0、1.0、0.25 g/mL桑杜口服液1.0 mL，空白对照组灌胃等体积的生理盐水，每天1次，连续给药30 d，每天观察大鼠的给药反应。每周称质量，计算周增质量，并于给药30 d结束时，每组取10只大鼠（雌、雄各半）采血，进行血液细胞学检查、血清生化检查，计算心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、卵巢子宫、睾丸的质量及脏器系数。结果显示，大鼠体质量、脏器系数、血液细胞学指标和血清生化指标无异常，表明桑杜口服液对大鼠无长期毒性。

关键词：桑杜口服液;急性毒性;长期毒性;脏器系数

中图分类号： R285.5  文献标志码： A  文章编号：1002-1302（2019）17-0201-03

药品必须具备安全性、有效性及质量可控性[1]。药品安全性问题一直是学术界、药物管理部门、制药企业极其重视的问题，药品的优劣不仅由有效性强弱来决定，也受到其毒性高低的影响。因此，开展药品的安全性试验成为临床用药安全的重要保障。一般情况下，药品安全性试验由急性毒性和长期毒性试验组成。对于第一类中药、第一类中药制剂还需进行特殊毒理学试验[2]。桑杜口服液富含中药多糖，具有良好的免疫促进作用。本研究根据兽药临床前毒理学评价试验指导原则及相关技术文献的方法，采用桑杜口服液分别进行小鼠经口急性毒性试验、大鼠30 d灌胃长期毒性试验，旨在评价桑杜口服液制剂的安全性，为临床用药提供指导。

1 材料与方法

1.1 药物与仪器

桑杜口服液，浓度为4.0 g/mL（以生药含量计），由扬中牧乐药业有限公司提供，批号为20170418。

全自动血液生化分析仪（Selectra E型），购自荷兰威图科学公司;全自动血细胞分析仪（PE-6800型），购自深圳普康电子有限公司;离心机（BIOFUGE PRIMO R），购自Thermo公司;电子天平（FA1104N），购自上海精密科学仪器有限公司。

1.2 试验动物

60只ICR小鼠（清洁级），体质量18～22 g，雌、雄各半，购自扬州大学兽医学院比较医学中心，动物生产许可证号为SCXK（苏）2012-0004。小鼠饲养在温度（24±2） ℃、湿度60%±20%条件下，饲喂饲料经60Co照射，饮水为灭菌自来水，自由采食与饮水。试验前在以上试验环境中适应3 d。试验前停食12 h，但不限制饮水。

4周龄清洁级Wistar大鼠80只，雌、雄各半，购自扬州大学兽医学院比较医学中心。大鼠饲料经60Co照射，饮水为符合城市饮用水标准的灭菌自来水。大鼠实行自由采食和饮水。

1.3 急性毒性试验方法

1.3.1 动物分组与处理 预试验：取ICR小鼠（清洁级）40只，雌、雄各半，分为高、中、低浓度药物组和空白对照组，每组10只。给药组药物浓度分别为4.0、2.0、1.0 g/mL，空白对照组给以生理盐水。各组1次灌胃给药，给药量为0.4 mL。自灌药后每日观察小鼠饮食、行为及死亡情况。连续观察7 d发现，7 d内小鼠无任何异常。因此根据动物预试验结果不能测出半数致死量（LD50），依据新兽药注册管理办法急性毒性试验技术规范，对桑杜口服液进行最大给药量试验[3]。

正式试验：取ICR小鼠（清洁级）20只，雌、雄各半，以药物的最高浓度（4.0 g/mL）、最大给药容积（0.2 mL/10 g）于24 h内灌胃3次，每次间隔6 h，给药总量为240.0 g/kg。连续观察7 d，同时记录动物中毒时症状和死亡情况。

1.3.2 正式试验观察指标 给药后，观察小鼠的一般状况（包括体质量、精神状态、毛色、自主活动、呼吸、饮食欲、粪便、口鼻分泌物）、中毒症状和死亡情况，连续观察7 d。

1.4 长期毒性试验方法

1.4.1 动物分组与处理 将Wistar大鼠随机分为4个组，每组20只，雌、雄各半。受试动物分高、中、低剂量组，另设正常对照组。桑杜口服液的高、中、低剂量组，分别以最大给药量的1倍、1/4倍和1/16倍（分别为1.0 mL 4.0、1.0、0.25 g/mL 桑杜口服液）灌胃，空白对照组（BC）采用1.0 mL生理盐水灌胃，每天1次，连续灌胃给药30 d。

1.4.2 试验观察 整个试验期间，每天观察并记录大鼠一般行为表现、大鼠中毒及死亡情况。每周称量大鼠体质量及饲料消耗1次。

1.4.3 指标检测及病理学检查

1.4.3.1 血液细胞学指标检测 于给药30 d结束时，取10只大鼠（雌、雄各半），大鼠经全麻后从腹主动脉采血，血液经抗凝处理后，采用全血自动分析仪测定血液中白细胞、中性白细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、红细胞、血红蛋白、红细胞压积和血小板的含量，取各指标平均值。

1.4.3.2 血清生化指标检测 于给药30 d结束时，取10只大鼠（雌、雄各半），大鼠经全麻后从腹主动脉采血，制备血清，采用血液生化自动分析仪检测血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶活性及血尿素、肌酐、葡萄糖、白蛋白、总蛋白、总胆固醇、甘油三酯含量，取各指标平均值。

1.4.3.3 病理检查 于给药30 d结束时，各组取10只大鼠（雌、雄各半），在以上采血结束时进行剖检。称量心、肝、脾、肺、肾、卵巢子宫、睾丸质量，并计算各脏器系数，取各指标平均值;必要时对肝、肾、脾、胃、睾丸、卵巢、十二指肠、结肠等主要脏器进行组织病理学检查。