苍术-玄参有效部位配伍对糖尿病模型小鼠的治疗作用研究

杨 惠，刘颖新，孔兴欣，陈 容，蒋梅香，刘利利

(湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012)

苍术-玄参药对记载于《施今墨对药》[1]，大量临床实践证明，二者配伍使用，对糖尿病有较好的治疗效果[2]。在前期研究中已经从药理和成分分析上证实了苍术-玄参药对的降糖作用，且主要降糖有效部位为多糖和正丁醇部位[3]。因此，本研究在前期基础上，进一步筛选出该药对降糖有效部位的最优配伍比例，并对降糖机制进行了探讨，为苍术-玄参药对更好地服务临床提供参考依据。

1 材料

1.1 仪器与试剂

盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司，批号：ABB9058，规格：0.5 g/片)；链脲佐菌素(STZ，美国Sigma公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。三诺安准血糖仪 (长沙三诺生物传感技术有限公司)；7100型全自动生化分析仪 (日本日立公司)；KS-600EI超声波清洗机(郑州万博仪器设备有限公司)。

1.2 药材

苍术、玄参药材均购自长沙佰佳药材公司，经湖南中医药高等专科学校冯传平教授鉴定，分别是菊科植物茅苍术(Atractylodeslancea(Thunb.)DC.)的干燥根茎、玄参科植物玄参(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根。苍术-玄参药对多糖部位、正丁醇部位由本实验室自制。

1.3 动物

SPF级ICR雄性小鼠，体重 20～22 g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，合格证号：SCXK(湘)2014-0011。

2 方法

2.1 动物模型的制备

小鼠适应性喂养1 w后，再连续喂养高脂饲料4 w，禁食不禁水12 h后，按照120 mg/kg剂量腹腔注射STZ溶液(pH4.4的柠檬酸钠缓冲液配置)[4-5]，小鼠尾静脉取血测定空腹血糖值 (FBG)，空腹血糖≥11.1 mmol/L判定为造模成功。

2.2 分组与给药

将造模成功的小鼠随机分为6组，每组10只，分别为模型组、二甲双胍组、多糖-正丁醇部位1∶1配伍组(糖醇1∶1组)、多糖-正丁醇部位1∶2配伍组(糖醇1∶2组)、多糖-正丁醇部位2∶1配伍组(糖醇2∶1组)。根据前期课题组对苍术-玄参药对有效部位的研究，确定正丁醇和多糖部位每日给药量分别为0.29 g/kg、1.93 g/kg，二甲双胍组0.25 g/kg。空白组和模型组每天1 g给予0.5%CMC-Na，每日1次，连续4周。

2.3 指标测定

2.3.1 空腹血糖的测定实验 给药4周后，小鼠尾静脉取血，采用血糖仪和试纸测定其空腹血糖(FBG)

2.3.2 按照试剂盒要求对小鼠肝脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性进行测定。

2.4 统计分析

3 结果

3.1 对糖尿病小鼠空腹血糖(FBG)的影响

与空白组比较，模型组小鼠的空腹血糖(FBG)水平显著升高(P<0.01) ;与模型组比较，阳性药物组、多糖-正丁醇各配伍组小鼠空腹血糖(FBG)水平显著下降(P<0.01，P<0.05)，其中，糖醇2∶1组对小鼠空腹血糖(FBG)降低更为明显(P<0.01)。结果见表1。

组别剂量(g·kg-1)空腹血糖(mmol·L-1)给药前给药4周后空白组—7.25±1.347.53±1.22模型组—19.85±4.08##22.76±4.17##阳性药物组0.2519.47±3.82##14.95±3.15∗∗糖醇1∶1组2.2219.63±4.53##17.86±3.97∗糖醇1∶2组2.51 19.69±3.51##17.71±4.09∗糖醇2∶1组4.15 19.37±4.32##15.60±3.61∗∗

注：与空白组比较：#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01，下同。

3.2 对糖尿病小鼠肝脏抗氧化能力的影响

与空白组比较，模型组小鼠肝脏中SOD和GSH-Px的活性显著降低，MDA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较，多糖-正丁醇部位配伍组均能显著升高小鼠肝脏中SOD和GSH-Px的活性，降低MDA含量(P<0.05，P<0.01)。其中，糖醇2∶1组对MDA水平的降低更为显著(P<0.01)。结果见表2。

表2 苍术-玄参有效部位配伍对糖尿病小鼠SOD、GSH-Px活性和MDA含量的影响

4 讨论

糖尿病是一种慢性代谢性疾病，以胰岛素抵抗、慢性炎症及胰岛β细胞受损为主要特征。近年来，糖尿病发病率有逐年增加的趋势，对人类健康产生了严重的危害[6]。链脲佐菌素(STZ)属于广谱抗生素，能特异性地损伤胰岛β细胞而诱发糖尿病。同时，STZ对机体毒性较小，动物存活率高。因此，常用于糖尿病动物模型的制备[7]。

中药药对是方剂配伍的核心。目前，国内对于中药药对的配伍研究主要集中在饮片-有效部位-有效成分配伍三个层次[8]，而有效部位和有效成分配伍则更容易阐明药对的药效物质基础和作用机制[9]。因此，从经典药对的有效组分入手，并进行配伍优化研究已成为阐释药对配伍机制科学内涵的重要途径[8]。苍术-玄参药对出自《施今墨对药》，临床上二者相须为用，对糖尿病有良好的治疗效果[10]。在前期研究中发现，该药对的多糖和正丁醇部位具有良好的降糖作用。因此，本研究从有效部位配伍入手，考察多糖和正丁醇降糖有效部位的最优配比，并探讨可能的降糖作用机制。从实验结果可以看出，多糖-正丁醇部位各比例配伍均能降低糖尿病小鼠的空腹血糖。其中，糖醇2∶1配伍组降糖作用最为显著，糖醇1∶1和1∶2配伍组在降糖作用和对糖尿病小鼠肝脏抗氧化能力的影响上程度相当，这在一定程度上可以反映出正丁醇比例的变化对糖尿病小鼠治疗作用的影响关系不大。

现代研究证明，机体处于高糖状态时所产生的氧化应激反应可以使机体自身的抗氧化体系失衡[11]，体内的自由基会造成生物膜的脂质过氧化损伤，形成脂质过氧化物[12]，脂质过氧化的主要中间产物MDA的水平可以反映出机体脂质过氧化的程度，间接的反映出细胞受损程度[13]。GSH-Px可还原MDA，使体内MDA 的含量降低从而起到抵御氧化损伤的作用。SOD作为体内具有清除自由基功能的酶，可以降低自由基对机体的氧化胁迫，其活性能够反映出机体的抗氧化能力[14]。因此，可以通过对体内SOD，GSH-Px活性和MDA水平的测定来考察机体的抗氧化能力。实验结果显示：与空白组比较，模型组小鼠肝脏组织MDA水平显著升高，SOD和GSH-Px的活性显著降低，表明糖尿病小鼠的抗氧化能力下降。与模型组比较，苍术-玄参药对的多糖和正丁醇部位配伍各比例均能显著增强GSH-Px和SOD活性，而对MDA水平降低显著。这提示多糖-正丁醇部位配伍在一定程度上能够提高链脲佐菌素(STZ)所致糖尿病小鼠的抗氧能力。这可能是苍术-玄参药对多糖和正丁醇提取部位配伍降糖作用的机制之一。