HPLC法测定调经益母胶囊中原儿茶醛含量

姚世霞 朱旭江 李 欣

1.甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730070； 2. 甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室，甘肃 兰州 730070

调经益母胶囊处方由益母草、冰糖草、丹参三味药组成，具有调经活血，祛瘀生新的功效，用于月经不调，经期腹痛，产后瘀血不清，子宫缩不良[1]。现行标准号为YBZ16152005-2015Z，此标准中含量测定项选用丹参酮ⅡA作为测定指标。丹参酮ⅡA为唇形科植物丹参Salvia Miltiorrhiza Bge．的脂溶性成分，具有菲醌类的片状刚性结构，在水中几乎不溶，具有抗菌消炎、活血化瘀、抗皮肤衰老等作用[2-3]。调经益母胶囊制剂生产中原药材均采用水煎煮提取，提取的多为水溶性物质。原儿茶醛是常用中药丹参水溶性成分丹酚酸B降解的主要产物之一，具有抗动脉粥样硬化、保护心肌、抗血栓等广泛的药理活性[4]。因此，选用丹参中的水溶性成分原儿茶醛作为测定指标，研究建立了调经益母胶囊中原儿茶醛含量的测定方法，可有效用于样品的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695型高效液相色谱仪；岛津LC20A液相色谱仪；Agilent HC-18(4.6×250 nm，5 μm)色谱柱，资生堂 C-18(4.6×250 nm，5 μm)色谱柱，Agilent TC-18(4.6×250 nm，5 μm)色谱柱；Mettler ME-204电子天平；Mettler MS205DU电子天平(十万分之一)。

1.2 试药 原儿茶醛对照品(批号：110810-200506，中国药品生物制品检定所)；调经益母胶囊样品(批号：S17010101、S17010102、S17010-103、S17010104、S17010105、S17010106、S17010-107、S17010108、S17010109、S17010110，甘肃皇普谧制药有限公司)。流动相所用甲醇为色谱纯(默克)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法与结果

2.1 测定波长的选择 以甲醇为溶剂，在190～400 nm波长内扫描，测得原儿茶醛紫外吸收图谱，如图1所示。可以看出原儿茶醛对照品最大吸收波长278.4 nm处，药典中原儿茶醛测定波长为280 nm[3]，考虑与药典一致，选择280 nm处作为检测波长。

2.2 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-磷酸(7:93)为流动相，柱温30℃，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL；原儿茶醛的检测波长为280 nm。

2.3 溶液的制备

2.3.1 供试品溶液的制备 取本品20粒内容物，混匀，精密称定，取约2.5 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，称定重量，加热回流2 h，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25 mL，用乙酸乙酯萃取5次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL容量瓶中，过滤，即得。

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称定原儿茶醛对照品28.88 mg置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，再精密量取储备液2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.3 阴性溶液的制备 取处方中除去丹参的其他药味，按照制法制备成不含丹参的样品，取适量，按照供试品溶液制备方法同法制备。

2.4 专属性考察 分别取上述3种溶液各10 μL，注入液相色谱仪，结果，在供试品色谱图上，在原儿茶醛对照品溶液保留时间出现相同的色谱峰，紫外图谱一致，分离度、拖尾因子符合要求，阴性溶液未见干扰。如图2所示。

2.5 标准曲线 测定精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20、30 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积积分值。以对照品溶液的进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)作图，绘制标准曲线，计算回归方程为Y=4×106X-2087.1，r=0.9999，结果表明，原儿茶醛在0.0452～0.6787 μg范围内，峰面积与含量有良好的线性关系。

2.6 精密度试验 取对照品溶液10 μL，重复进样6次，记录峰面积，测定结果经计算，RSD为 0.4%，表明仪器精密度良好。

2.7 重复性实验 取同一批样品，按“2.3”项下制备供试品溶液6份，精密量取供试品溶液10 μL，进行测定，计算含量。结果含量平均值为0.2403 mg/g，RSD为2.2%，重复性较好。

2.8 稳定性考察 取供试品溶液1份，分别在0、4、8、12、16、18 h记录峰面积，结果RSD为1.3%，表明供试品溶液在18 h内稳定性均良好，。

2.9 回收率实验 取已知含量的供试品9份，每份约1.25 g，精密称定，至锥形瓶中，分别精密加入一定量的对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，测定，计算回收率见表1。

表1 回收率测定结果 (n=9)

2.10 样品含量测定 结果 按照拟定的方法测定10批次样品含量，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 提取方法的选择 原儿茶醛为丹参中的水溶性成分[5-6]，原儿茶醛测定方法已经比较成熟，大多采用超声提取和回流提取两种方法[7-8]。选择了将样品分别用水和甲醇溶解后采用超声和回流后用乙酸乙酯萃取分离的方法制备供试品溶液，结果采用回流提取的样品，含量明显高于采用甲醇或水超声提取的样品，回流提取的样品采用乙酸乙酯萃取后，样品峰在对照品出峰位置无干扰，未萃取的样品杂质较多，存在干扰，因此，经试验，选择将样品用水回流后用乙酸乙酯萃取作为样品的制备方法。

3.2 流动相的选择 参考文献[7-9]，分别对流动相进行考察，结果流动相甲醇-0.1%磷酸(7∶93)、甲醇-水(10∶90)、乙腈-水(5∶95)均能达到统适用性要求，甲醇-0.1%磷酸(7∶93)为流动相时分离度更高，因此作为测定用流动相。

通过以上实验，采用拟定的方法测定调经益母胶囊中原儿茶醛含量的方法准确度、精密度、专属性、线性关系及耐用性良好，可作为调经益母胶囊的质量控制方法。