冰冻切片出现“瑞士奶酪”现象的因果与规避

祝鉴知

（安徽省马鞍山市人民医院 安徽 马鞍山 243000）

为了制备术中快速诊断组织学切片，需要采用冷冻方法促使生物样本硬化，而冷冻却会损伤细胞膜，破坏生物样本组织细胞形态(见图1)。鉴于此，我们要做的是分析冷冻损伤的成因和后果，以使这种损伤最小化，尽可能地规避这种损伤。

1.资料与方法

1.1 一般资料

恒温冷冻制片机型号：Thermo A7890103，设定工作室温度：-20℃，设定冷冻台温度-40℃。实验分析所用样本均来自于本院病理科术中快速，80例样本均采用乳腺上皮恶性肿瘤标本[1]。

1.2 方法

为了揭示出样本冻结速度与冰冻损坏率之间的关系，进而标识出临床适用的、可撑控的冻结速度，本文依照不同的冰冻条件，即通过不同的操作程式来实现。将80例标本分成4组，每组20例。取材规格统一为2×1×0.2cm，制片完成后镜下观察。取材规格依照病理取材技术操作规范[2-3]。

第1组：20例样本，取样后，均直接放置在未开启的冷冻台上，即在工作室温度-20℃条件下完成冻结。

第2组：20例样本，在工作室温度-20℃条件下，先将样本放置在冷冻台上，而后再开启冷冻台，冷冻台在开启后温度逐渐降至-40℃，并完成冻结。

图1 受损伤与未受损伤切片的对比

第3组：20例样本，是首先开启冷冻台，再取材，约5分钟左右，这时冷冻台温度已达-40℃，再将样本放置冷冻台冷冻，并完成冻结。

第4组：20例样本，首先开启冷冻台(同第3组)，再开启“冷冻加速”，取材约5分钟后，冷冻台温度达-40℃，再将样本放置冷冻台，并完成冻结。

2.结果

实验结果列于表1，其表明，第1组样本冻结完成时间在2’21”至2’39”之间，平均为2’28”，20例标本组织细胞全部出现损伤现象，损伤率为100%。第两组样本冻结完成时间在1‘25“至1’45”之间，平均为1‘33”，其中有6例都出现了多孔及组织形态攺变，损伤率为30%。第3组样本冻结完成时间在1’15”～1‘30”之间，平均为1’21”，有1例受损，损伤率为5%。第4组样本冻结完成时间在1‘02“～46”之间，平均为53”。镜下观察20例组织切片，无1例损坏。

可以看出，即使是同种病组织、组织取材尺寸亦相同的同一组20例样本，在同一冷冻台上，以相同的冷冻条件下测试，它们的冻结速度也不是相同的，足可见样本个体差异性的影响。

表 实验结果一览表

图2表示出冰冻切片损伤率随冷冻速度(以平均表示)的变化，在冷冻速度53”～2’28”区间(1’35”)，冰冻损伤率近乎呈直线从0%急剧上升到100%，损伤率对冷冻速度的敏感可见一斑。而在冷冻速度53”以下区间，即在第4组冷冻条件下，冰冻损伤率稳定地保持0损伤，因此适合于术中冰冻制片使用。

图2 损伤率随冻结时间的变化

3.讨论

生物材料的导热性能差，冻结时会出现温度梯度，使样本在缓慢冰冻时逐渐形成大量晶体，特别是在远离冻结表面的部分，切片后大的晶体在组织切片上呈现出“瑞士奶酪”的形态。所以取材尺寸不应过厚过大，取材规格应依照病理取材技术操作规范[6]，面积大小一般为2×1厘米，厚度为0.2～0.4厘米。如果组织取材过厚，会由于生物材料导热性差而导致组织内局部冻结速度慢而产生冰晶，损伤组织，影响诊断。

然而在样本被成功冷冻成玻璃体后并不能一直保持玻璃形态。固体水的玻璃体形态是不稳定的，当温度高于-121℃时无定形水即开始逐渐重组为立方冰并膨胀，但重要的是这是一个缓慢的转换过程，这使得冰冻快速制片有足够的时间能够完成。

通过探索，逐步加快组织冰冻速度，缩短组织冰冻时间，有效地减少甚至消除了冰冻制片中出现的“瑞士奶酪”现象。使术中冰冻快速制片中的组织损害得到非常大的改善，提高了病理诊断准确性。