RP-HPLC法测定淫羊藿软胶囊中淫羊藿苷的含量

尹 雪，丁建秋，姜玮伦，姚慧敏*

(1.通化师范学院吉林省重点实验室长白山药用植物研究实验室，通化134002；2.吉林省白山市第七中学，白山134700)

淫羊藿软胶囊是以朝鲜淫羊藿为原材料，经过提取浓缩纯化后制备而成的软胶囊制剂。2015版 《中国药典》中记述，淫羊藿药材质量控制的指标为淫羊藿苷[1]。研究表明，淫羊藿苷除具有抑制炎症[2]、调节骨代谢[3]的作用外，还可用于增强机体免疫力、延缓衰老[4]、保护神经细胞[5]、治疗老年痴呆[6]、抑制癌细胞的生长。为控制该制剂的产品质量，以淫羊藿苷为检测指标成分，建立了淫羊藿软胶囊的质量控制方法。实验表明该方法简便快捷、分离度好、结果准确可靠。

1 仪器与试药

淫羊藿苷（中国药品生物制品检定所）；淫羊藿软胶囊（实验室自制181209）；华谱高效液相色谱仪；电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液 （30:70）;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:300 nm;柱温:30℃;进样量:10μL。在上述条件下，理论板数按淫羊藿苷计应不低于3 000。

2.2 溶液的配制

对照品溶液的制备：淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加无水乙醇定量制成20.15μg·mL-1的溶液，作为对照品贮备液。

供试品溶液的制备：取本品20粒的内容物，混合均匀，取0.5 g，精密称定，置25 mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，超声处理(功率为500 W，频率为40 kHz)30 min后，滤过，精密吸取续滤液1.0mL，置10 mL量瓶中，用无水乙醇定容，摇匀，即得。

空白辅料溶液的制备：按处方量称取混合辅料，按供试品溶液的稀释倍数用无水乙醇定量，即得。

2.3 系统适用性实验

取对照品溶液，进样测定，记录色谱图。淫羊藿苷塔板数分别为17900，系统适用性实验符合要求。

2.4 专属性实验

分别取混合对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶各10μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由图可知，在本文建立的色谱条件下，淫羊藿苷的保留时间13.253min，淫羊藿软胶囊中各对照品和其他组分达到了完全分离，空白辅料无干扰。

图1 对照品溶液(A)、样品溶液(B)和空白辅料(C)色谱图

2.5 标准曲线的绘制

分别精密吸取对照品贮备液 0.2，0.5，0.8，1.0，1.2，1.5mL至10mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，分别制成系列浓度溶液，摇匀，精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归， 淫羊藿苷在4.03～30.225μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系，其线性回归方程为A=32.127C-5.2678(r=0.9998)，结果表明对照品在相应浓度范围内，样品浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验

取对照品溶液，日内连续进样3次和日间进样3次(连续3d，每天1次)，记录色谱图的峰面积。日内RSD(n=3)为 0.25%，日间 RSD(n=3)为 0.34%，结果表明日内、日间精密度良好。

2.7 稳定性实验

取供试品溶液，分别于 0、1、3、6、12 h，注入液相色谱仪，记录色谱图的峰面积，RSD(n=5)为0.38%，结果表明供试品溶液放置12 h稳定。

2.8 重复性实验

取批号为181209的软胶囊6份，按供试品溶液制备方法制备并测定，记录色谱图的峰面积，RSD为0.35%。

2.9 回收率实验

精密称取已知含量的软胶囊0.5 g，共6份，依次按照2.2项下方法制备供试品溶液。取6份供试品溶液各1mL，精密加入浓度为201.5μg·mL-1淫羊藿苷对照品1mL，进样测定，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。

表1 软胶囊回收率测定结果

软胶囊平均加样回收率分别为99.184%，RSD为0.25%，加样回收率符合含量测定要求。

2.1 0含量测定

分别取三批软胶囊内容物各20粒，按“供试品溶液的制备”方法制备供试品溶液，进样测定，记录色谱图，计算含量，结果见表2。

表2 软胶囊含量测定结果

3 讨论

淫羊藿中含有多种化学物质，化学成分复杂，药理作用丰富。淫羊藿总黄酮类物质最为丰富，在药典中淫羊藿苷的含量是淫羊藿质量评价的一个重要指标。现代药理学研究表明淫羊藿苷可调节骨代谢，并具有神经保护作用、性激素样作用，淫羊藿提取物还可增强机体免疫力、改善心血管功能、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、抗病毒等[7～10]。

本实验考察了500%乙醇、70%乙醇、95%乙醇为该制剂的溶剂，结果发现由于内容物含有大量的表面活性剂，溶剂中只要含有水，就会使溶液存在乳化状态，滤过后仍可能损坏色谱柱，降低其使用寿命。当溶剂选用无水乙醇时，可排除表面活性剂的干扰，而且淫羊藿苷在乙醇中的溶解度大，而且回收率高，符合含量测定的要求。