高蛋白、高脂肪类人参食品中人参皂苷的检测方法研究

郭畅冰，徐芳菲，李 蕾，杨怀雷，谢丽娟，王国明，曹志强*

（吉林人参研究院·吉林通化·134001）

人参（Panax ginsengC.A.Mey）为五加科人参属多年生草本植物，素有“百草之王”的美誉，在我国最早的本草学著作《神农本草经》中记载，人参具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智之功效[1]。一直以来人参均作为中国传统名贵中药材广泛用于药物、药膳及食物滋补，在中国已被广泛应用了几千年[2]。随着人们生活水平和健康意识的提高，近年来以人参为主要原料，开发的人参保健食品和食品日益增加，在2012年国家卫生部批准人参进入新资源食品后，人参的产业链迅速增长，各类人参食品应运而生[3～4]。因为卫生部规定了人参进入食品的用量为每日不超过干参3g，如何精准确定人参的添加量是多少，便成为质量检验单位的最新课题。由于人参食品中油脂、蛋白含量大，传统检测方法很难在去除干扰的前提下准确检出人参食品中的人参皂苷成分，如果不能准确检测其含量，可能消费者会因为食用过量而损害身体健康。因此，急需寻求一种简便快捷、操作性强的人参食品中人参皂苷含量的检测方法。本文采用乙醇提取-大孔树脂法与传统药典法提取方法进行对比、分析，探究可行性高、方便简单的检测方法，并对本方法的药材转移率及加样回收率进行研究[5]。

1 仪器与材料

1.1 实验材料

人参粉、人参蛋糕（吉林人参研究院自制）。

1.2 实验试剂

对照品人参皂苷Rg1、Re、Rb1均购于吉林大学天然药物化学实验室，纯度均≥98%。正丁醇、硫酸、三氯甲烷、乙醇、氢氧化钠、甲醇、乙腈，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯试剂，大孔树脂：D101大孔吸附树脂，山东鲁抗立科药业有限公司。

1.3 实验仪器

高效液相色谱仪（Thermo UltiMate 3000，美国）；十万分之一电子天平（BT125D，赛多利斯科学仪器有限公司）；超声波清洗仪（KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司）；超纯水机（ELGA（DI）；威立雅水处理技术（UK））；数显式恒温水浴锅（HH-6，金坛市江南仪器厂）。

2 实验方法

2.1 供试品溶液的制备

表1 供试品溶液的制备

2.2 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成1ml各含0.2mg的混合液，摇匀，即得。

2.3 人参皂苷Rg1+Re、Rb1含量的测定

2.3.1 色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长203nm。理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于5000。具体参数见表2。

表2 色谱条件

2.3.2 测定

分别精密吸取各供试品溶液10μL，注入高效液相色谱中，按2.4.1色谱条件进行测定，计算。

3 结果与分析

3.1 人参食品中人参皂苷含量的测定结果

精密称取供试品，每种方法平行称取三份试样，按照“2.1”项下制备，进行分析，不同前处理发方法检测的人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量，结果见表3，图谱见图 1、图 2、图 3。

表3 对比两种前处理方法检测不同皂苷含量

通过表中数据所示，方法2（乙醇提取-大孔树脂法）中人参皂苷各指标的含量明显高于方法1（药典法）。

图1 人参皂苷Rg1、Re、Rb1混合标准品HPLC色谱图

图2 方法1供试品溶液HPLC色谱图

图3 方法2供试品溶液HPLC色谱图

3.2 药材转移率

取人参药材600mg，平行称取三份试样，按照“2.1”项下方法2制备，进行分析，结果见表4、表5。

表4 人参药材中人参皂苷的含量

表5 人参蛋糕的药材转移率

通过表中数据所示，三次平行实验的药材转移率＞85%，提示该方法（方法2：乙醇提取-大孔树脂法）提取率高，方法科学合理。

3.3 精密度实验

取同一供试品溶液，按照“2.1”项下方法2连续测定5次，结果见表6。

表6 精密度实验 （n=5）

3.4 稳定性实验

取同一供试品溶液，按照“2.1”项下方法2在0、3、6、20、24h测定，结果见表 7。

表7 稳定性实验 （n=5）

3.5 重现性实验

取同一批号样品，平行5份，按照“2.1”项下方法2独立进行测定，结果见表8。

表8 重现性实验（n=5）

3.6 回收率实验

采用加样回收率法，分别称取样品6份 （含量为Rg1+Re=0.352mg/g， 其 中 Rg1 为 0.085mg/g，Re 为0.275mg/g，Rb1 为 0.302 mg/g)，每份约 7.5g，分别在样品中加入对照品溶液1ml（对照品溶液：精密称取人参皂苷Rg16.52mg、人参皂苷Re20.25mg、人参皂苷Rb122.09mg，加甲醇定容于10ml量瓶中，摇匀），按2.1中方法2进行处理，以甲醇定容于5ml量瓶中，摇匀，精密吸取10μl注入液相色谱仪中，测定，结果见表9。

表9 各成分的回收率实验

4 结论

高蛋白、高脂肪类人参食品中糖类、脂肪类含量较高，传统药典方法检测人参皂苷含量偏低，本实验采用乙醇提取和D101大孔树脂吸附法相结合提取高蛋白、高脂肪类人参食品中人参皂苷。通过与传统药典方法对比，根据测得的Rg1+Re、Rb1皂苷含量可知，本方法明显优于药典方法，提取的皂苷含量约是药典法的3倍且重复性好。从提取皂苷含量来看，本方法提取率高，且操作简便。而且本方法的药材转移率及加样回收率均可达85%以上。由此可见本方法可作为高蛋白、高脂肪类人参食品中人参皂苷的检测方法，对人参食品中人参添加量的控制具有重要意义。