不同年生野山参中总皂苷和总多糖的含量测定

杨怀雷，徐芳菲，李 蕾，韩士冬，曹志强*

（吉林人参研究院·吉林通化·134001）

人参为五加科 (Araliaceae)植物人参Panax ginsengC.A.Mey的干燥根。以生态不同区分为野山参、移山参和园参[1]。在山野天然生长者被称为野山参。野山参主要生长在我国长白山以及大兴安岭、小兴安岭区域，属于人参的一种。所谓野山参，其实际上也指自然生长在深山中的人参，是不掺杂任何人为干预与技术管理的。野山参在生长过程中会受到自然环境的影响，从而形成相应的根茎、主根等特殊形态[2]。近年来，对于野山参的研究主要集中在培育、鉴别、指纹图谱等方面[3～6]，其总皂苷和总多糖方面的研究报道较少。本文提取了野山参中的总皂苷和总多糖，并采用紫外分光光度法对两者的含量进行测定，为野山参的基础成分研究提供了参考依据，为野山参的质量控制奠定了基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

紫外可见分光光度计（SP-1920），上海光谱仪器有限公司；电热恒温水浴锅（HH-6），金坛市白塔金昌实验仪器厂；电子天平（SQP），赛多利斯科学仪器有限公司；超声波清洗器（KQ500-DE），昆山市超声仪器有限公司；智能高速冷冻离心机（3H16RI），湖南赫西仪器装备有限公司。

1.2 材料

野山参(1～18年生)；人参皂苷Re标准品(中国食品药品检定研究院，批号110754-201827)；葡萄糖(中国计量科学研究院，批号17001)；无水乙醇、甲醇、浓硫酸、苯酚(北京化工厂，分析纯)；香草醛(天津市光复科技发展有限公司，分析纯)。

2 方法

2.1 对照品溶液的制备

2.1.1 人参皂苷Re对照品

精密称取人参皂苷Re对照品10.80mg，置10mL容量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.080mg/mL的人参皂苷Re对照品溶液。

2.1.2 葡萄糖对照品

精密称取葡萄糖对照品25.13mg，置25mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，然后精密移取1mL置10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.10052mg/mL的葡萄糖对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 总皂苷供试品

取不同年生野山参于烘箱中65℃烘干，粉碎，过80目筛。准确称取野山参粉末（1～18年）0.5g，加10mL（20倍量）75%乙醇加热回流2h，重复提取3次，合并滤液，蒸干。残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，超声处理30min使其充分溶解，摇匀，即为总皂苷供试品溶液。

2.2.2 总多糖供试品

准确称取野山参粉末1.0g，加入50mL蒸馏水，浸泡过夜；次日加热回流提取3次，第1次2h，第2、3次均1h，合并滤液，水浴锅蒸至粘稠挂壁。加入20mL 95%乙醇，静置过夜；次日转移至离心管中，10000r/min离心 30min，弃去上清液，干燥（70～80℃），得粗多糖。将粗多糖转移至100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得。测定前用蒸馏水稀释3倍，即为人参多糖供试品溶液。

2.3 溶液的配制

2.3.1 8%香草醛乙醇试液：取香草醛0.8g，加无水乙醇使溶解成10ml，即得。

2.3.2 72%硫酸溶液：取硫酸72mL，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至100mL，摇匀，即得。

2.3.3 5%苯酚溶液：取苯酚1g，加入蒸馏水20mL，摇匀，即得。

2.4 标准曲线的绘制

2.4.1 人参皂苷Re标准曲线

精密吸取人参皂苷Re对照品溶液20、30、40、50、60、70、80、90μL， 置磨口带塞试管中， 水浴蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇试液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振摇混匀后置60℃恒温水浴上加热10min，立即用冰水浴冷却10min，摇匀。以试剂做空白，按照分光光度法于544nm波长处分别测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，质量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，做回归方程。

2.4.2 葡萄糖标准曲线

精密吸取葡萄糖对照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，置10mL试管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入浓硫酸7.0mL，混匀，室温放置5min，沸水加热30min，冷却至室温，以蒸馏水为空白对照，于492nm波长处测定吸光度。以吸光度A为纵坐标，质量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，做回归方程。

2.5 含量测定

2.5.1 总皂苷含量测定

精密吸取供试品溶液20μL，置具塞刻度试管中，蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇试液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振摇混匀后置60℃恒温水浴上将热10min，立即用冰水浴冷却10min，摇匀。以试剂做空白，按照分光光度法于544nm波长处分别测定吸光度，由标准曲线计算出待测样品中总皂苷的质量m。野山参中总皂苷含量(%)(m为总皂苷的质量，V1为供试品溶液取样体积，V2为供试品溶液定容体积，M为样品质量)。

2.5.2 总多糖含量测定

精密量取供试品溶液0.1mL，置10mL具塞试管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入浓硫酸7.0mL，混匀，室温放置5min，沸水加热30min，冷却至室温，以蒸馏水为空白对照，于波长492nm处测定吸光度，由标准曲线计算出待测样品中总多糖的质量m。野山参中总多糖含量(%)(m为总多糖的质量，V1为供试品溶液取样体积，V2为供试品溶液定容体积，M为样品质量，f为稀释倍数)。

3 结果

3.1 标准曲线的绘制

按照“2.4”项下的方法分别对人参皂苷Re和葡萄糖标准曲线进行绘制，得出回归方程。人参皂苷Re的回归方程为y=0.0062x-0.0269，R2=0.9995，表明总皂苷质量在21.60-97.20μg范围内，线性关系良好，标准曲线见图1。葡萄糖的回归方程为y=0.0062x-0.0099，R2=0.9918，表明在总多糖质量在10.052～80.416μg范围内，线性关系良好，标准曲线见图2.

图1 人参皂苷Re标准曲线

图2 葡萄糖标准曲线

3.2 含量测定

3.2.1 总皂苷含量测定

不同年生野山参中人参总皂苷含量测定结果为3.24%～6.37%，结果见表1。

表1 不同年生野山参中人参总皂苷含量测定结果

3.2.2 总多糖含量测定

不同年生野山参中总多糖含量测定结果为17.50%～22.92%，结果见表2。

表2 不同年生野山参中总多糖含量测定结果

4 讨论

本文对不同年生野山参中的人参总皂苷和总多糖含量进行测定，发现野山参中二者含量均较高，但不同年限野山参中二者的含量无显著规律。由于野山参为自然生长在深山中的人参，并未经过任何人工干预，不同年限的野山参的样品采集很难集中在某一固定区域，导致不同年限野山参生长环境也不尽相同，可能对二者的含量有一定影响，同时还应增加野山参样品量，避免检测数据存在个体差异，确保测定结果的准确、稳定、可靠。此外，本次测定未进行多区域平行样本的采集及测定，不同地域、不同环境生长的野山参质量、品质以及内在成分的含量也会略有不同，可能会有未知因素对实验结果产生影响，在进行下一步的实验研究时，应进行多个地域野山参平行样本的采集及测定，使测定结果具代表性。

本文对于野山参中人参总皂苷及总多糖的测定仅仅是初步探索，还需进一步的研究和完善。在样品采集时应尽可能均匀，尽可能在同一区域进行不同年生样品的采样。实验还需进行多地域平行样本的采集，对野山参的质量和品质进行综合评价。本文未对18年以上的野山参进行测定，应覆盖更广的野山参生长年限，探索不同年限野山参中二者含量的内在规律。本文仅对野山参中的人参总皂苷进行测定，未对人参单体皂苷成分进行研究，可对不同年限野山参中单体皂苷含量进行测定，以进一步完善和丰富野山参的有效成分基础研究工作，为野山参的药理研究、质量评价和质量控制提供参考依据。