两种免疫分析仪测定血清甲胎蛋白的比对分析

叶梦霞 李扬宇 秦雪君

甲胎蛋白是含有一条多肽链的糖蛋白，主要在胎儿的肝脏和卵黄囊中产生并分布在其他器官中。受孕约30天，在胎儿的血循环中可检测到甲胎蛋白，随后分泌到胎儿血清中，妊娠第13周时达到峰值，之后逐渐降低直到胎儿出生。在良性肝脏疾病中，血清甲胎蛋白常有一过性增高。甲胎蛋白是肝细胞癌的一种肿瘤标志物，具有较高的敏感性和特异性，广泛应用于临床的筛查，早期诊断和治疗[1]。因此，为了满足日常工作的需要，本科在原来l台Beckman Coulter Access DXI800的基础上又添置了1台Abbott I4000（均为酶促化学发光）。为了确保结果的可靠性和可比性，比较两种仪器的结果，以避免由于结果之间的差异过大而导致临床诊断错误。

1 资料与方法

1.1 一般资料

样本：本研究经患者同意，经医院伦理委员会批准，连续5日（2019年3月4—8日），每日收集8例患者的新鲜血清标本（无溶血、脂血、黄疸），包括低、中、高值，覆盖分析方法的线性范围，并根据项目规范的要求进行保存。

1.2 仪器与试剂

Beckman Coulter Access DXI800和Abbott I4000化学发光免疫检测仪。两种仪器都使用制造商提供的试剂和校准品。

1.3 方法

1.3.1 实验原理 两种仪器的检测原理都是双抗体夹心法。

1.3.2 方法选择、质量控制和标本测定 Beckman Coulter Access DXI800化学发光免疫检测系统参加了全国室间质评，成绩优秀，所以用作参比方法（X），Abbott I4000化学发光测定为待评方法（Y），实验前对仪器常规维护保养并做质控，确保质控在控后测定样本，连续5日，每日在两台仪器测定符合要求的8份患者新鲜血清，收集得40组数据。

1.4 观察指标

统计所得甲胎蛋白数据，首先筛查离群值，之后进行精密度比较，再计算出线性回归方程，观察结果是否具有统计学意义，最后进行偏倚评估两台仪器检测结果是否具有统计学意义。

1.5 统计学处理

1.5.1 离群点检查 同时超过相对偏差和绝对偏差平均值的4倍，判断为离群点。

表1 两台仪器检测甲胎蛋白的精密度比较（ng/mL）

表2 两台仪器检测结果的偏倚评估

1.5.2 相关性分析 计算数据得到回归方程及相关系数R2。如R2≥0.95，可以认为X的取值范围合适，线性回归统计的斜率和截距是可靠的，两种仪器的结果具有良好相关性。

1.5.3 偏倚评估 目前，临床上常以甲胎蛋白20 ng/mL和400 ng/mL作为临床诊断的临界值[2]，选择这两点与所使用仪器线性范围所达到的水平代入回归方程，以计算待评方法（Y）和参比方法（X）之间的标准误（SE）和相对偏倚（SE%）。SE= lYc-Xcl，SE%=（SE /Xc）×100%。本实验甲胎蛋白的允许总误差（TEa）为25%，SE%＜1/2TEa为临床可接受标准。

1.5.4 统计学软件 使用SPSS 17.0软件对数据进处理和分析。

2 结果

2.1 离群值筛查

经数据分析，2种检测系统无离群值。如图1。

2.2 精密度比较

两种仪器的CV值均小于8.33%的日间CV允许范围。测得两个水平质控的均值（），变异系数（CV），标准差（SD）,见表1。

2.3 线性回归

两种仪器的线性回归方程及相关性分析如图1所示。相关系数R2=0.998 5＞0.95，截距a=0.097 7，斜率b=1.125 1，回归方程Y= 1.125 1X +0.097 7表明回归统计的斜率和截距是可靠的。两台仪器测定甲胎蛋白的检测结果有显著的相关性，可用于评估两台仪器测定甲胎蛋白的偏倚。

2.4 结果偏倚评估

甲胎蛋白医学决定水平分别为20 ng/mL和400 ng/mL，在Abbott I4000上测定的结果以Beckman测定为参比方法的SE%，均＜1/2TEa。见表2。

3 讨论

甲胎蛋白是临床上使用最广泛的肝细胞癌标志物[3]，是一种血清糖蛋白，作为肿瘤相关蛋白，其对肝细胞癌的阳性诊断率约为70%。李峰等[4]也提出肝癌是肿瘤的进展性结果，如果在癌症早期得到充分的重视，对改善患者的预后具有重要的指导意义。血清甲胎蛋白水平可用于评估经导管动脉化疗栓塞联合射频消融术后原发性肝癌患者的预后[5]。近年来，随着医学检测技术的不断发展，以及对肿瘤标志物临床意义的深入研究，再加上国民健康意识的普遍提高，甲胎蛋白已逐渐成为体检的常规项目，为满足工作需要，本科有Beckman C o u l t e r A c c e s s D X I 8 0 0 与Abbott I4000两台化学发光免疫测定系统，因甲胎蛋白医学决定水平分别为20 ng/mL和400 ng/mL，如果两种仪器同时报告结果，在这两个水平的偏倚过大，将会对临床的诊断和治疗带来干扰。医学检验结果的相互认可是医学检验发展的需要，报告相互认可的基础是不同检验系统中相同检验项目的结果是否具有可比性[6]，所以笔者对两台仪器检测甲胎蛋白做了比对实验。当比对结果超过规定偏倚时，应分析原因并纠正，以减少不同仪器之间的结果差异，以便正确报告。

本科两台仪器测定甲胎蛋白的两个水平质控日间及总CV均＜8.33%，表明两组仪器检测结果可靠，精密度高。在保证检测系统精度和准确性的前提下，建立了各种检测系统的标准化长期比较机制，用于实现不同检测系统之间测量结果的一致性和可比性具有重要的意义[7]。本实验选择的甲胎蛋白AFP（alpha-fetoprotein）水平在20 ～ 400ng/mL，在该范围内检测甲胎蛋白异质体L3（alpha-fetoprotein L3）AFP L3，测得的结果基本上能反映早期原发性肝癌和非肿瘤性肝病的AFP L3水平状况[8]。因此，今后可在此基础上扩展实验，深入研究甲胎蛋白（AFP）、甲胎蛋白异质体L3（AFP L3）和高尔基体跨膜糖蛋白73（golgin 73）对诊断原发性肝癌的意义[9-10]。作为原发性肝癌诊断的新型肿瘤标志物，甲胎蛋白异质体L3可有效弥补单独检测甲胎蛋白的不足，并且结合临床影像学和病理学诊断方法，可以有效提高诊断原发性肝癌的准确性[11]。它还可以扩展到研究慢性乙型病毒性肝炎（乙肝）肝硬化患者的外周血甲胎蛋白（AFP）、丙酮酸激酶M2（pyruvate kinase M2）、白蛋白（albumin）mRNA表达及其临床意义[12]。

图1 两台仪器测定结果均值散点图

综上所述，此次实验结果显示：此实验使用的仪器检测甲胎蛋白的结果无统计学意义（P＞0.05），并且存在良好的相关性（R2＞0.95 ）。甲胎蛋白的允许总误差（allowable total error）TEa为25%，以临床可接受的SE%＜1/2TEa为标准，而甲胎蛋白医学决定水平分别为20 ng/mL和400 ng/mL，在这两个取值范围附近的比对结果未出现较大偏差，均符合SE%＜1/2TEa的标准。因此，实验结果显示两种仪器的检测结果具有可比性，系统偏差在可接受的范围内，并且可以同时报告而不影响患者病情的临床判断。为患者提供诊断依据，并节省因为不确定病情而导致浪费治疗时间，值得推广及应用[13]。