芹菜对高血压大鼠降压效果的组织学观察

田奎蓉,孙华林,洪 业,刘俊林，蔺国珍

（西北民族大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730030）

高血压(Hy pertension)以动脉压升高为特征，伴有心脏、血管、脑和肾等组织器官功能性或器质性改变的一种发病率很高的疾病[1]。发病机制复杂，与神经系统功能失调、肾素-血管紧张素系统(RAS) 活性增高、血管内皮细胞功能障碍等众多因素有关[2]。芹菜(Apium graveolens L.)是一种二年生的伞形科芹菜属的草本植物，具有降血压、镇静健胃、利尿、润肺等功效。张桂等对芹菜的根、茎、叶三部分进行了提取研究，实验结果表明，芹菜茎叶中都含有较高的黄酮化合物，且具有降血压功效的主要为芹菜中的黄酮化合物。芹菜中黄酮物质主要为槲皮素、芹菜素和木犀草素[3-6]。芹菜素作为一种分布广泛的天然植物成分，对高血压有一定的治疗作用。芹菜在科学饮食控制高血压的食疗蔬菜中占有十分重要的地位。因此，芹菜不同部位活性物质对高血压降压效果的观察研究具有重要的现实意义。

1 材料与方法

1.1 药品、材料与仪器

实验药品：无水乙醇、氯化钠、甲醛、冰醋酸、二甲苯(均为分析纯)，购自天津市富宇精细化工有限公司;醇溶性伊红、苏木精，购自上海伯奥生物科技有限公司；各熔点石蜡，上海标本模型厂生产。常规试剂购自天津大茂化学试剂厂；“利血平”原产海南制药厂有限公司，购自兰州本地零售药店。

实验仪器：BP-100A 全自动大小鼠无创血压测量系统（成都泰盟软件有限公司）；UV-1800 紫外可见光分光光度计（日本岛津公司）；N-1100D 旋转蒸发器；真空冷冻干燥器（北京博医康实验仪器有限公司）；Nikoncoolpix 4500数码照相机(日本尼康公司)；LEICA Histo stat 820 石蜡切片机；LEI-CA-DM500 光学显微镜（德国莱卡公司生产)；BX-UCB/BX61 图像采集系统、Image-Pro Plus 6. 0 图像测量分析系统(日本奥林巴斯公司)。

1.2 实验动物

60 只Wister 大鼠（雌雄各半），体重200～300g 由兰州兽医研究所提供。

1.3 试验方法

1.3.1 芹菜各部位药液的制备 购置兰州本地毛芹 10 kg，将芹菜水洗后，晾干，切碎后分别放置于烘干箱内，55℃烘干，研磨成粉。70% 的乙醇 65℃ 水浴浸提 2 h，旋转蒸发仪蒸发浓缩（45～60℃）至浓缩液呈膏体状，然后转入真空冷冻干燥机，冷冻干燥完全[5-10]。取其干燥粉末分别配制成含生药 0.001 mg、0.005 mg、0.008 mg/ml 的药液，现配现用。

1.3.2 高血压模型建立 将60 只大鼠（雌雄各半），适应性生存 3 d 后均分为 6 个大组，给予正常饲料进行喂养，按 6% 剂量的氯化钠溶液给予实验组大鼠自由饮用[11,12]，对照组给予等量蒸馏水。待实验组大鼠出现血压升高且恢复正常饮水，血压稳定不降低时建模成功[13,14]。

1.4 芹菜提取物对高盐高血压大鼠模型降压效果

1.4.1 给药治疗 将高盐饮水高血压模型大鼠分为 3 组，分别标记为： 阳性对照组，“利血平”药片研磨成粉末，按大鼠体重进行灌胃（0.001mg·kg-1BW）；实验组，选取 1.3.1 中配制的药液分别标记为低、中、高三个浓度（0.001 mg、0.005 mg、0.008mg/ml）。按体质量给予实验组灌胃治疗(10 ml· kg-1BW)；阴性对照组给予等量生理盐水，治疗期间大鼠自由饮食、饮水；持续2周[15-17]。

1.4.2 显著性差异分析 使用 spss 23.0 软件对测定结果进行差异显著性分析。

1.5 高盐高血压大鼠模型组织切片的制作及相关脏器系数的测定

1.5.1 大鼠心脏系数、肾脏系数、肝脏系数、脾脏系数的测定

称量各组大鼠体质量，颈椎脱臼处死后快速摘除心脏、肾脏、肝脏、脾脏并称重。

1.5.2 组织切片制作 对治疗后大鼠分组进行解剖，取其心脏、血管、肝脏、肾脏用10%甲醛进行固定，然后制作HE染色病理组织切片。（如图1）

图1 芹菜不同部位提取物对大鼠不同组织的影响

A-1 阴性组大鼠心脏 (HE，200×)，A-2 阴性组大鼠肝脏(HE，200×)，A-3 阴性组大鼠肾脏(HE，200×)，A-4阴性组大鼠血管 (HE，200×)。

B-1 芹茎组大鼠心脏 (HE，200×)，B-2 芹茎组大鼠肝脏(HE，200×)，B-3 芹茎组大鼠肾脏(HE，200×)，B-4芹茎组大鼠血管(HE，200×)。

C-1 芹根组大鼠心脏 (HE，200×)，C-1 芹根组大鼠肝脏(HE，200×)，C-1 芹根组大鼠肾脏(HE，200×)，C-1芹根组大鼠血管(HE，200×)。

D-1 芹叶组大鼠心脏 (HE，200×)，D-1 芹叶组大鼠肝脏(HE，200×)，D-1 芹叶组大鼠肾脏(HE，200×)，D-1芹叶组大鼠血管(HE，200×)。

E-1 阳性组大鼠心脏 (HE，200×)，E-1 阳性组大鼠心脏(HE，200×)，E-1 阳性组大鼠心脏(HE，200×)，E-1阳性组大鼠心脏(HE，200×)。

F-1 正常组大鼠心脏 (HE，200×)，F-1 正常组大鼠肝脏(HE，200×)，F-1 正常组大鼠肾脏(HE，200×)，F-1正常组大鼠血管(HE，200×)。

如图 1 所示 A-1中心肌细胞肥大，心肌纤维增粗，纤维间间隙增大，有部分断裂情况出现，局灶区域有炎性细胞浸润；B-1中心肌纤维部分区域出血，纤维间间隙增大，心肌纤维有部分断裂情况和炎性细胞浸润；C-1中心肌纤维略有增粗、纤维间间隙增宽、有炎性细胞浸润；D-1中心肌纤维形态正常，纤维间隙略有增宽；E-1中心肌纤维基本正常，局部区域有炎性细胞浸润；F-1中心肌纤维正常。A-2中肝脏细胞充血水肿，有大量脂滴样空泡出现，局灶地区炎性细胞浸润，B-2、C-2、D-2、E-2 中肝组织有不同程度水肿，但无脂滴空泡和坏死情况出现，局部区域有不同程度炎性细胞浸润。 A-3中肾组织水肿，有浆液性渗出物弥漫，局部地区炎性细胞浸润，肾小管和集合管细胞变性坏死，肾小球纤维化，肾小管萎缩；B-3肾组织水肿，肾小球有部分出血情况并有浆液性渗出物，部分肾小球纤维化伴随局部炎性细胞浸润；C-3肾实质细胞部分坏死，肾组织充血水肿，肾实质细胞中有浆液性渗出物弥漫，组织内有轻微脂滴样空泡出现，局灶地区炎性细胞浸润明显；D-3中肾组织有轻微水肿和浆液性渗出，部分肾组织细胞坏死，肾小管和集合管周有炎性细胞浸润、E-3 中肾组织形态基本正常，有轻微浆液性渗出物，肾小球部分萎缩，有轻微炎性细胞浸润。A-4、B-4、C-4、D-4、E-4 中较 F-4 中有不同程度血管充血、出血，血管周炎性细胞浸润，血管平滑肌纤维细胞纤维化以及变性坏死、血管壁重构等现象，以A-4、C-4中最为严重。

2 结果

由表 1可知中剂量组和高剂量组对大鼠血压降低具有一定作用，中剂量组治疗降压效果与阴性对照组相比具有显著性，高剂量组提取物降压效果与阴性对照组相比具有极显著性差异，而低剂量组降压效果与阴性对照组相比没有统计学意义，低剂量组对大鼠血压降低效果较低，高剂量组治疗效果最好。

表1 芹菜提取物对大鼠血压的影响（`x±s ）

表2 芹菜提取物对大鼠脏器系数的影响(`x±s )

由表 2 可知，中剂量组、高剂量组、阳性对照组心脏系数较阴性对照组均有较明显的降低，低剂量组降低情况不明显；中剂量组、高剂量组、阳性对照组肾脏系数较阴性对照组均有较明显的降低，低剂量组降低情况不明显；低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性对照、阴性对照、正常组肝脏系数和脾脏系数无明显差异。

3 讨论

选用的氯化钠溶液建立大鼠高血压模型。对大鼠组织制作病理组织切片结果显示实验组大鼠各组织器官均有不同程度的病理变化。心脏左室肥大、心脏肌纤维变粗，心肌细胞肥大；肝脏有不同程度炎性细胞浸润；动脉血管壁增厚、细胞充血出血、血管壁重构；肾脏有不同程度的水肿，肾小管、集合管细胞变性坏死，肾脏血管硬化，肾小管萎缩，且采用芹菜提取物治疗的大鼠器官病变相对阴性对照组有一定程度的减轻。科学研究表明芹菜中含有较多的黄酮化合物，且具有降血压功效的主要为黄酮化合物。芹菜中黄酮物质主要为槲皮素、芹菜素和木犀草素。槲皮素降压机制可能与减少氧化应激、干扰肾素-血管紧张素-醛固酮系统( RAAS) 和以内皮依赖性和非依赖性方式改善血管内皮功能等有关[3]，芹菜素能够有效提高高血压大鼠Ang II水平、降低血脂、改善心肌抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤有关[14]。芹菜提取物对大鼠高血压有一定的治疗效果，但具体机制尚未阐述清楚，需要进一步实验进行分析探讨。

4 结论

本实验对芹菜活性物质进行提取并作用于高盐高血压大鼠，实验发现其对高血压症状具有良好的治疗作用。结论如下：芹菜提取物对大鼠高盐高血压模型有良好治疗效果，在一定范围给药浓度越高，治疗效果越好。以高剂量组(0.008 mg/ml)芹菜提取物治疗效果最佳，且与阴性对照组相比差异极显著。中剂量组与阴性对照组相比有显著性差异，低剂量组无显著性差异。