家禽H7N9流感免疫效果监测与分析

董宏伟,王彦华,薛 双

(1.驻马店市动物疫病预防控制中心,河南 驻马店 463000；2.河南省饲草饲料站，河南 郑州 450008)

禽流感(Avian influenza, AI)是禽流行性感冒的简称，是由禽流感病毒引起的一种动物传染病，其严重程度取决于病毒毒株以及被感染禽的种类、日龄和有无并发症等因素。其中H5和H7两个血清型可以引起高致病性禽流感(HPAI)，以传播快、发病急、死亡率高为特征，常可导致感染鸡群的全军覆没，造成严重的经济损失。世界动物卫生组织(OIE)将其列为A类烈性传染病。2013年7月至2017年1月，国家禽流感参考实验室从二十多个省的活禽市场、家禽养殖场和屠宰场共采集11万多份样品，分离到293株H7N9流感病毒。基因组解析发现这些病毒频繁重组，共形成23种不同的基因型，90%以上的毒株具有对人易感的分子特点。2017年1月在广东分离的7株病毒在血凝素基因裂解位点发生变异，动物实验发现，这类变异株对鸡具有高致死性[1]。

为了有效预防家禽H7N9流感疫情的发生，我国从2017年秋季开始，在家禽免疫H5亚型禽流感的基础上，全面开展了H7N9流感免疫。为掌握驻马店市家禽H7N9流感的免疫效果，也为科学评估疫苗提供依据,我们分别于免疫前(2017年5月)和免疫后(2017年12月、2018年5月)对全市家禽H7N9流感抗体进行了抽检与分析,报告如下。

1 材料

1.1 样品

共采集驻马店市24家规模养殖场和部分散养户的健康家禽血清样品908份，其中免疫前血清样品272份，包括规模禽场血清样品210份, 散养户禽血清样品62份。免疫后血清样品636份，包括规模禽场血清样品510份，散养户禽血清样品126份。其中2017年12月采集样品298份(包括240份规模场禽血清样品和58份散养户禽血清样品)，2018年5月采集样品338份(270份规模场禽血清样品和68份散养户禽血清样品)。

1.2 试剂

1%鸡红细胞悬液，按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T18936-2003)规定的方法制备；禽流感病毒H7亚型(H7N9)血凝抑制试验抗原及阴性血清、阳性血清，购自哈尔滨维科生物技术公司；接种疫苗均为政府采购重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗，来自5个禽流感疫苗生产企业。

1.3 主要仪器及耗材

恒温培养箱(型号：DHP-9052)，上海一恒科学仪器有限公司生产；移液器，Eppendorf公司生产；滴头，Axygen公司生产；96孔“V”形微量反应板，海门市如意实验器材厂生产。

2 方法

2.1 检测方法

利用血凝试验(HA)检测H7N9流感标准抗原的血凝价并制备4血凝单位(HAU)抗原，然后利用血凝抑制试验(HI)检测样品抗体效价。具体操作方法按照《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2003)进行。

2.2 结果判定

试验成立的条件:阴性对照孔血清滴度不大于2 1og2,阳性对照孔血清误差不超过 1个滴度,判定试验结果有效。以完全抑制 4 HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度，HI 价小于或等于 3 1og2判定为阴性； HI 大于或等于4 1og2判定为阳性。

3 结果与分析

3.1 免疫前后H7N9流感抗体检测结果与分析

3.1.1 本试验共检测H7N9流感免疫前血清样品272份，结果全部为阴性；共检测免疫后血清样品636份，其中533份抗体为阳性，阳性率为83.81%。其中2017年12月采集的298份样品中220份抗体为阳性，阳性率为73.83%；2018年5月采集的338份样品中，313份抗体为阳性，阳性率为92.6%。详见表1。

表1 免疫前后H7N9流感抗体阳性率比较

3.1.2 本试验共检测免疫前血清样品272份，结果显示：抗体滴度均小于等于2 log2，其中255份抗体滴度小于1 log2(93.75%)； 2017年12月采集的免疫后血清样品检测结果显示：抗体滴度分布前三名的是6 log2(27.18%)、5 log2(21.14%)、<1 log2(19.80%)；2018年5月采集的免疫后血清样品检测结果显示：抗体滴度分布前三名的是8 log2(25.44%)、7 log2(24.56%)、≥10 log2(14.50%)。详见表2。

表2 免疫前后H7N9流感抗体水平检测结果

3.2 不同养殖规模的家禽H7N9流感免疫抗体检测结果与分析

本试验共检测免疫后家禽血清样品636份,其中510份来自规模场,126份来自散养户。

510份规模场血清样品中475份免疫抗体合格，35份免疫抗体不合格，整体免疫抗体合格率为93.14%；126份散养户血清样品中58份免疫抗体合格，68份免疫抗体不合格，整体免疫抗体合格率为46.03%。详见表3。

表3 不同养殖规模的家禽H7N9流感免疫抗体检测结果

4 讨论

据表1和表2，家禽接种重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗后抗体滴度从免疫前的全部小于等于2 log2，上升到大部分(83.31%)大于等于5 log2，最高可达到10 log2以上，说明家禽接种重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗后能很快产生较高滴度的H7N9流感抗体，证明目前我市家禽使用的重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗具有良好的H7N9流感免疫效果。

据表2，2017年12月采集的样品H7N9流感抗体水平虽较免疫前明显升高，但是仅为73.83%，刚刚达到国家要求的群体免疫抗体合格率70%以上的标准，抗体滴度也主要集中在6 log2附近，与2018年5月采集的样品抗体水平相比存在明显差距。这可能与我市2017的免疫实施情况有一定关系。我市从2017年秋季开始使用免疫重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7株)，因疫苗生产及调拨发放时间等因素，到2017年12月采样时，部分养禽场户只进行了1次疫苗免疫接种，免疫抗体水平还较低，持续时间也较短。而2018年5月采集样品时很多养殖场户都已按照免疫程序进行了多次免疫接种，抗体水平比较高，持续时间比较长。

据表3，规模禽场的H7N9流感免疫抗体水平(免疫抗体合格率为93.14%,抗体滴度最高可达10 log2以上)远高于家禽散养户(免疫抗体合格率为46.03%,抗体滴度也主要集中在7 log2上下)，这是因为规模养禽场大多建立了完善的免疫制度，免疫程序比较规范合理，定期进行了免疫接种。而家禽散养户大多依赖防疫员的集中免疫接种，缺乏规范合理的免疫程序，免疫实施存在一定漏洞。