农田土壤中3种典型饲料添加剂含量分析方法的建立与优化

邓辅财 廖桂红 陈诗其 严家俊 罗毓钧 牛显春

摘要：研究建立了农田土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇等3种典型饲料添加剂含量分析方法，并进行优化。结果表明：0.05mol/L磷酸二氢钾作为提取液的提取效果明显优于rrl醇：水（1：1）、纯甲醇2种提取液;超声提取法也优于斡旋振荡和摇床振荡提取法;优化后的分析方法对上述3种药物的一次加标回收率分别为45.1%-50.0%、54.1%-65.2%和87.4%-100.6%.

关键词：氨苯胂酸;洛克沙胂;喹乙醇;农田土壤;高效液相色谱

中图分类号：S816.7文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.06.004

0引言

氨苯胂酸（Arsanilicacid）又称阿散酸，是一种5价有机砷制剂[1]。砷是一种原浆毒，对蛋白的巯基有很强的亲和力，砷可与酶蛋白分子上的2个巯基或羟基结合生成稳定的复合物或环状化合物，它们可抑制组织中大量巯基依赖性酶并使其失去活性，即引起细胞变性，进而影响正常代谢细胞[2]。洛克沙胂（Roxarsone）化学名为3一硝基-4-轻基一苯胂酸，其分子量为26304，分子式C_{6H6AsN06。洛克沙胂是砷的有机形态，可以转化成毒性较强的金属盐[3]。有机胂药物饲料添加剂（氨基苯胂酸、洛克沙胂）南于具有抗菌、促生长、改进动物生产品质等作用，在动物养殖方面广泛应用[1]。喹乙醇（Olaquindox）是一种喹嗯琳类药物，商品名为快育灵[5]。长期使用喹乙醇饲养动物可引起动物中毒。喹乙醇会引起鸡中毒，中毒症状为不进食，鸡冠呈紫黑色，缺乏活力，腹泻，最后挣扎而死。毒理学研究发现，喹乙醇及其代谢物会引起动物体光毒反应、肾脏毒性反应、遗传毒性、致突变性和致癌性[6]。目前对这些药物的分析方法大多集中为禽畜农产品[7]、饲料[8]、禽畜粪便[9-10]等样品，对土壤样品则报道较少。同时灵敏、准确检测土壤样品中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇残留的检测方法则更是缺乏。因此，研究拟建立一种准确、快速分析土壤中氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇残留的方法，对防治土壤饲用药物污染和农产品安全生产具有重要的理论和现实意义。}

1材料与方法

1.1试剂与药品试验用的3种饲用药物（氨苯胂酸、洛克沙胂、喹乙醇）标样均采购于上海恒远生物科技有限公工司其纯度均大于96%，乙腈和甲醇均为色谱纯级;冰醋酸和磷酸二氢钾均为分析纯;试验用水为高纯水，配置缓冲溶液用水为超纯水。

1.2方法

1.2.1土壤中3种饲用药物不同提取液加标回收率测定准确称量1.00009土壤样品放入离心管中，加入102ug/mI的氨苯胂酸标准品贮备液、138ug/mI的洛克沙胂标准品贮备液和174ug/ml.的喹乙醇标准品贮备液各1mI，平衡48h后，分别以5mI0.05mol/I磷酸二氢钾、甲醇与水溶液（1：1）和纯甲醇3种试剂作为提取液，分别超声提取30、60min后，置于离心机中，4000r/min离心5min，将上清液转移至另一个干净离心管中。向沉淀土样中再加入提取液5mL，重复上述步骤，重复提取一次，收集并合并提取液，最后用MultivaporP-12型平行蒸发仪将提取液浓缩至1mI。提取液过0.22um滤膜净化后，收集于色谱瓶中，待测。同时做不加3种标准贮备液的土样空白对照。

1.2.2土壤中3种饲用药物的提取方法回收率对比试验采用0.05mol/L磷酸二氢钾提取液5mI溶液，采用3种不同提取方法（斡旋震荡法、摇床震荡法、1.3的超声提取法）对土样中的上述3种药饲用物进行加标回收率的测定，同时做不加土样处理的空白对照。1.2.3高效液相色谱（HPLC）检测方法色谱条件：流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾一0.3%乙酸与乙腈溶液的比例为0.9：0.1，流速为1mL/min;检测波长为266nm，进样体积为20uL，平衡时间为30min，采用Waters018色谱柱，柱温为30℃。

2结果与分析

2.1提取液的优化将0.05mol/L磷酸二氢钾、甲醇与水（1：1）、纯甲醇3种溶液作为提取液时超声30min和60min加标回收率见图1、图2、图3。氨苯胂酸、洛克沙胂和喹乙醇3种饲用药物均能被磷酸二氢钾提取液超声提取出来，3种药物的30min超声提取回收率分别为47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分别为62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取时间的回收率差异不大。而甲醇与水（1：1）和纯醇2种提取液不能同时把3种物质提取出来。另外，采用这些提取液提取空白土样时均未检出待测目标物，所以这些提取液不会对实际土样的测定产生干扰。

2.2提取方法的优化

目前对上述含有3种饲用药物的实际环境样品的前处理方法研究主要有消化、斡旋震荡、摇床震荡、超声等提取方法，如王付民采用1111HNO₃：H₂O₂（V：V）对猪场附近稻田土壤中的阿散酸进行消化提取;张冲[12]采取了超声方法对土壤中喹乙醇进行提取。但这些提取方法要么繁琐操作不便，要么仅局限于单独含有砷[11]或者喹乙醇样品[10.12]， 对3种物质同时存在，需要对3种物质同时进行前处理的情况却鲜见报道。故研究采用0.05mol/L磷酸二氢钾提取液5mL溶液，采用3种不同提取方法（斡旋震荡20min、摇床震荡1h、超声提取法）对上述3种饲用药物共存的土样，同时进行加标回收率测定，以探索同时提取3种藥物的可行性，试验结果见图4。3种方法中超声提取法的回收率最高，其余2种方法均太低，不宜使用。张冲[12]对比超声破碎仪提取、振荡提取和超声提取3种不同提取方法对土壤中喹乙醇的提取效率时也发现超声提取效率最高，与研究的结果大致一致。故研究确定最优的提取方法：采用磷酸二氢钾作为提取液进行超声提取，超声时间设为30min，且为保证提取完全，提取次数为2次。

3 结束语

研究优化了土壤中3种饲用药物的分析检测方法。3种饲用药物均能被磷酸二氢钾提取液超声提取出来，3种药物的30min超声提取回收率分别为47.7%、58.3%和92.4%，60min提取回收率分别为62.7%、64.9%和116.9%;30min和60min提取时间的回收率差异不大。0.05 mol/L磷酸二氢钾作为提取液的提取效果明显优于甲醇与水（1：1）、纯甲醇2种提取液;超声提取法也优于斡旋震荡和摇床震荡提取法。

参考文献

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