乳腺癌组织中microRNA表达情况对乳腺癌患者临床预后的影响

孙菊琴 楼敏君 张莉霞

乳腺癌是常见的恶性肿瘤，其发病率居女性恶性肿瘤的第1位[1-2]，随着医疗技术的进步和早期筛查的普及，目前乳腺癌患者的生存率已得到明显提高[3-4]。乳腺癌治疗的主要方法是行乳腺癌根治术，辅以术后放化疗，以彻底杀灭肿瘤细胞，在现有技术下，进一步降低乳腺癌患者术后复发率的根本在于早期发现和早期治疗[5-6]。但不同生物学特性的肿瘤细胞生长和转移能力不同，即使在早期，也可有部分乳腺癌患者术前存在微小转移灶，这种微小转移灶难以通过手术根除，这也是乳腺癌患者术后复发的主要原因。现有研究表明，microRNA与各种肿瘤细胞的生长和转移能力有关，其表达失衡是导致肿瘤易感性增加、肿瘤细胞生长和转移的影响因素之一[7-10]。本研究探讨乳腺癌组织中microRNA表达情况对乳腺癌患者临床预后的影响，为临床防治乳腺癌提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象 回顾2014年1月至2016年1月我院行改良乳腺癌根治术的乳腺癌患者154例，术后随访2年，根据术后2年内是否复发，将患者分为复发组42例和对照组112例。纳入标准：（1）乳腺癌经病理检查确诊；（2）TNM 分期为Ⅱ期或Ⅲ期；（3）年龄 18～65 岁；（4）临床病历资料齐全；（5）患者知情同意，且签署知情同意书。排除标准：（1）乳腺癌复发；（2）远处转移；（3）全身性感染；（4）术前行新辅助放化疗等特殊治疗；（5）肝、肾、心、脑、肺等脏器功能不全；（6）转移性乳腺癌或合并其他恶性肿瘤；（7）研究期间放弃治疗、转院、不配合治疗或失访。两组患者术前一般资料均无统计学差异（均P＞0.05）。见表1。本研究经本院伦理委员会批准患者及家属知情同意。

表1 两组患者一般资料的比较

1.2 方法 两组患者均行乳腺癌根治术，术中留取乳腺癌组织标本1mm×1mm×1mm，去除血液和其他组织，提取组织中总RNA：1mlTrizol试剂中将乳腺癌组织剪碎，均浆机上均浆，直至组织完全溶解于Trizol试剂中，转移至1.5mlEP管中，加入0.2ml氯仿，混匀后离心（12 000r/min，15min），取上清液 500μl置于另一 EP 管中，加入等体积异丙醇，混匀后静置10min，继续离心（12 000r/min，10min），弃上清液，倒置 EP 管，滤纸吸去水分，加入75%乙醇1ml洗涤沉淀，离心（12 000r/min，5min），弃上清液，去乙醇，风干见白色固体，DEPC水溶解，混匀，NANODrop200测定相应RNA浓度和吸光度。实时荧光定量测定相应RNA基因表达量：将RNA逆转录为cDNA，进行荧光定量测量，U6为内参，采用2-ΔCt计算相应microRNA相对表达量，包括miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718、miR-1285-5p、miR-205-5p、miR-100-5p。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。采用多因素logistics回归分析探讨microRNA对乳腺癌术后复发的影响。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者乳腺癌组织中microRNA表达水平的比较 与对照组比较，复发组miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718 均明显增高（均P＜0.05）；miR-1285-5p、miR-205-5p、miR-100-5p均明显降低（均P＜0.05）。见表2。

2.2 micro RNA表达水平对乳腺癌患者术后复发的影响进一步多因素logistics回归分析显示miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高以及miR-1285-5p、miR-100-5p降低是乳腺癌患者术后复发的危险因素（均P＜0.05）。见表3。

3 讨论

micro RNAs是非编码的调控RNAs，是内生的小分子，长度为20～24个氨基酸，目前在各类癌症中是一个研究的热点，有望为各类肿瘤的早期诊断、预后评估提供新的标志物。micro RNAs主要通过对目标mRNA降解、翻译抑制骑着转录后负调控作用，从而调控肿瘤细胞增殖、分化、肿瘤血管生成和肿瘤转移的过程。为探讨microRNAs在乳腺癌患者中的作用，笔者设计本研究，结果发现在术后复发的乳腺癌患者中miR-183-5p、miR-194-5p和miR-4718显著增高，miR-1285-5p、miR-205-5p 和 miR-100-5p 显著降低，miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高以及miR-1285-5p、miR-100-5p降低均是乳腺癌患者术后复发的危险因素（均P＜0.05）。

micro RNAs广泛存在于生物体中，参与了众多蛋白质的转录和转录后的调控，在人体的正常发育中发挥重要作用。最近研究显示micro RNAs还可以作为癌基因和抑癌基因，参与肿瘤的形成。miR-183-5p是miR-183家族中的一员，有研究显示miR-183下调，可以抑制乳腺癌细胞的生长和迁移能力[11]，而高表达的miR-183可以促进乳腺癌细胞的生长和转移[12]。miR-194-5p是miR-194家族成员的一员，在乳腺癌患者中的研究也已经证实miR-194-5p的高表达与乳腺癌细胞的生长和转移有关，miR-4718的高表达增强乳腺癌细胞的转移能力也同样被证实[13]。目前关于miR-1285-5p在乳腺癌患者中的研究尚缺乏，但在原发性肝细胞癌患者中的研究显示miR-1285-5p可以通过下降的表达，从而抑制肿瘤细胞的生长和转移[14]。miR-1285-5p在早期肺磷癌患者中的研究显示miR-1285-5p低表达，可以作为肺磷癌的一个早期预测指标[15]，miR-1285-5p可能是通过调节p53的功能从而调控肿瘤细胞的生长和转移[16]。miR-100-5p至miR-100的家族成员，研究显示miR-100-5p与其他恶性肿瘤的药物耐药性、转移和侵袭能力均有关联[17-19]。刘一诺等[20]研究也显示miR-100家族可以抑制乳腺癌细胞的生长和转移。综上表明，micro RNAs的失衡（miR-183-5p、miR-194-5p、miR-4718增高、miR-1285-5p、miR-100-5p降低）共同参与了乳腺癌细胞的生长和转移过程，从而导致乳腺癌患者术后复发率增高。但目前相关研究尚缺乏，尤其是国内。

表2 两组患者乳腺癌组织中microRNA表达水平的比较

表3 micro RNA表达水平对乳腺癌患者术后复发的影响

综上所述，乳腺癌组织中microRNA表达失衡，与术后复发有关。但目前尚不清楚micro RNAs对乳腺癌细胞化疗药物耐药性的影响，急需进一步研究证实。