体检人群自身抗体检测结果分析及意义

郑 佳，李子安，阿祥仁

(青海省人民医院医学检验科，青海西宁 810007)

血清中自身抗体是自身免疫反应和自身免疫性疾病(AID)的重要标志之一，及时准确地检测这些自身抗体，除可用于AID的诊断、预后判断、疾病活动性监控及疗效评估外，也可作为AID的风险预测指标[1]。近年来随着人们生活水平和健康意识的提高，自身抗体检测渐渐被纳入了体检项目，这对AID的早期发现、及时诊断和治疗起了一定的积极作用。但是目前，对于自身抗体在健康体检人群中的阳性分布情况及临床意义的研究资料较少，故本研究对2 342名体检人群血清中自身抗体检测结果进行分析，以了解这些自身抗体在健康人群中的分布情况，筛选就诊人群进行随访，探讨体检人群自身抗体检测的临床意义，提高自身抗体在疾病诊疗中的应用价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 健康体检人群来自于2013年2月至2014年8月和2016年1月至2017年11月，居住在青海地区(海拔2 280～3 500 m)，在青海省人民医院体检中心进行体检的2 342名体检者，年龄13～90岁。其中男性1 379例，平均年龄为(43.3±9.9)岁；女性963例，平均年龄为(42.3±10.3)岁。

1.2仪器与试剂 检测仪器为欧蒙印迹法自动操作仪(EUROBlot Master)。所有试剂均使用德国欧蒙医学实验诊断有限公司产品。

1.3方法 全部受检对象均于清晨采集空腹静脉血3～5 mL于血清真空采血管中，所有样本3 000 r/min，离心10 min，分离血清待测。采用间接免疫荧光法(IIF)检测血清标本中的抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗壁细胞抗体(PCA)和抗线粒体抗体(AMA)。采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司抗原片(包括Hep-2细胞、猴肝、鼠胃和鼠肾)，按照试剂操作说明，血清稀释后与抗原基质片反应30 min(同时设阳性和阴性对照)，浸泡5 min，加入荧光标记的二抗避光孵育30 min，浸泡5 min，加甘油封片后荧光显微镜下判读结果，以抗体滴度≥1:100为阳性。

采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司线性免疫印迹法(LIA)检测ANA谱特异性抗体，包括抗nRNP/Sm、Sm、SS-A(天然SS-A和Ro-52)、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、着丝点蛋白B(CENP B)、增殖细胞核抗原(PCNA)、双链DNA(dsDNA)、核小体、组蛋白、核糖体(rRNP)和线粒体-M2(AMA-M2)共14种不同抗原的IgG抗体。1∶100稀释的患者血清1.5 mL与膜条上的靶抗原反应30 min，洗涤3次(5 min/次)，加入1.5 mL酶标记的抗人IgG(酶结合物)反应 30 min，洗涤3次(5 min/次)，加入底物液反应15 min，蒸馏水清洗膜条终止反应，肉眼判读结果。

1.4统计学处理 采用SPSS16.0软件进行统计分析，男性与女性组抗体阳性率的比较采用χ2检验，不同年龄组抗体阳性率的比较采用秩和检验，趋势检验采用Gamma法。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各种自身抗体阳性率比较 2 342例标本中，ANA阳性的标本数为580例，阳性率为24.77%，SMA阳性的标本数为7例，阳性率为0.30%，PCA阳性的标本数为62例，阳性率为2.65%，AMA阳性的标本数为26例，阳性率为1.11%。ANA谱阳性的标本数为162例，阳性率为6.92%，各抗体检出率分别为nRNP 15(6.55%)、Sm 2(0.87%)、SSA 56(24.45%)、Ro52 60(26.20%)、SSB 14(6.11%)、Scl-70 5(2.18%)、PM-Scl 10(4.37%)、组蛋白 12(5.24%)、Jo-1 4(1.75%)、核小体 2(0.87%)、PCNA 3(1.31%)、CENP B 11(4.80%)、rRNP 13(5.68%)、AMA-M2 22(9.61%)。

2.2不同性别受检对象的阳性率分析 结果显示ANA(χ2=21.367，P<0.05)、AMA(χ2=4.528，P=0.033)、ANA谱(χ2=17.647，P<0.05)阳性率体检健康人群中女性高于男性，而SMA、PCA阳性率在男女性别间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 不同性别组自身抗体阳性率比较[n(%)]

2.3不同年龄段自身抗体阳性率比较 体检健康人群中ANA、PCA、AMA阳性率随年龄增加而升高，而SMA、ANA谱阳性率在不同年龄段间比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 不同年龄段自身抗体阳性率比较[n(%)]

2.4阳性滴度情况 2 342名健康体检人群血清标本中ANA、PCA、SMA、AMA阳性滴度以小于1∶320的低滴度居多，分别占79.69%、71.43%、51.61%、73.08%，见表3。

表3 不同阳性滴度所占百分比[n(%)]

2.5筛选就诊人群进行随访 综合考虑体检者抗体检测结果，IIF检测ANA阳性并滴度大于1∶320且伴有其他自身免疫疾病相关实验室检测指标异常，筛选出26例就诊人群，进行随访。其中男性7例(26.92%)，平均年龄为(54±14.05)岁，女性19例(73.08%)，平均年龄为(47.4±11.43)岁。最终确诊为AID的患者2例，原发性胆汁性肝硬化(PBC)1例，结缔组织病1例，均为女性。

3 讨 论

随着自身免疫病治疗的迅速发展，自身抗体的早期诊断和早期治疗提高了患者的生活质量和疾病预后[2]。由于自身抗体可以在自身免疫病患者典型临床症状出现前若干年检测到，因此，自身抗体筛查在自身免疫病的早期诊断中显得非常重要，自身抗体对自身免疫病的早期筛查是近年来自身抗体检测在临床应用的重要进展。本研究2 342名健康体检人群ANA阳性率为24.77%，而我国有些学者研究报道的阳性率仅为11.27%[3]，这可能和体检人群所处环境有关，高原低氧环境影响机体的免疫调节功能[4]。本文体检人群主要居住在青海地区(海拔2 260～3 500 m)，高原地区海拔高、缺氧、寒冷干燥，对人体的免疫系统有一定的影响，很多免疫指标与平原地区有一定差异[5]。ANA谱各抗体也有一定的表达，阳性率为6.92%，以抗SSA和抗Ro-52抗体为多，与我国学者郭亚平等[6]的研究结果基本相符，这两种抗体检测灵敏度高，但特异度不如抗SSB抗体。不同性别组的阳性率分析显示ANA、AMA、ANA谱阳性率体检人群中女性高于男性，而SMA、PCA阳性率在男女性别间比较差异无统计学意义(P>0.05)。AID好发于女性，通常抗体滴度越高，ANA谱越容易检测出相应抗原，患AID的可能性越大，但也不绝对。健康体检人群中ANA、PCA、AMA阳性率随年龄增加而升高，而SMA、ANA谱阳性率在不同年龄段间比较差异无统计学意义(P>0.05)。自身抗体是指由于各种原因导致机体自身组织成分的抗体，按临床意义不同可分为疾病标志性自身抗体、疾病特异性自身抗体、疾病相关性自身抗体、疾病非特异性自身抗体和生理性自身抗体[7]。由于正常机体也会存在微弱的自身免疫应答，产生生理性的自身抗体，因此，健康人群包括孕妇、老年人等也会检测到低滴度的ANA[8]，肩负着清除体内衰老和死亡细胞的作用，并非自身免疫疾病特异性自身抗体，另外，感染性疾病、肿瘤等也会由于机体的自身免疫反应产生ANA，ANA阳性并非一定为AID[9-10]。

ANA检测是AID疾病诊断、治疗、监控病情活动以及疗效评估一项非常重要的试验[11]，近年来，AID发病率明显上升，其总体发病率占世界人口的3%～5%[12]，现有的研究结果显示自身抗体是AID的早期标志物，AID患者体内自身抗体的出现往往早于临床症状的出现，如RA相关抗CCP抗体可以在RA患者出现临床症状前平均4.5年检测到[13]，PBC患者体内的AMA-M2可以在患者任何临床症状或其他实验室检测指标异常前10年出现[14]，ANA及其特异性抗体可存在于SLE、SS患者出现临床症状前数年[15-16]，因此，自身抗体筛查在AID的早期诊断中非常重要，本研究筛查出26例就诊人群进行随访追踪，到目前确诊为AID的患者2例。虽然自身抗体的存在并不意味着AID，但是一些自身抗体有很好的预警作用，健康体检人群开展自身抗体检测有助于早期发现AID，对于处在亚临床期的患者也应定期复查，随访监测。