MAGE-D4在非小细胞肺癌组织中的表达及其意义

李晓英 方文△ 杨梅 游云 杨玉涛 葛正行 尹超 夏志鸿 张航

(1.贵州医科大学检验学院，贵州 贵阳 550001；2.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550001；3.贵州医科大学附属肿瘤医院，贵州 贵阳 550001；4.兰州市第一人民医院，甘肃 兰州 730000)

目前肺癌的5年生存率约为15%，是全球最常见的癌症相关致死疾病之一，非小细胞肺癌作为肺癌最常见的一种类型，约占所有肺癌发病率的80%[1-2]，积极探索寻找针对非小细胞肺癌的肿瘤标志物及治疗作用靶点成为主要研究方向。黑色素瘤相关抗原MAGE-D4(Melanoma-associated antigen D4)作为MAGE家族中较新发现的一种新成员，目前其已在胶质母细胞瘤及脑膜瘤等部分肿瘤中发现处于高表达状态，同时由于已发现MAGE基因能编码部分抗原肽而激活免疫细胞使其杀伤肿瘤细胞，故MAGE部分成员成为理想的肿瘤治疗靶点[3]。本次试验希望通过对非小细胞肺癌中MAGE-D4的表达情况的研究能初步阐述非小细胞肺癌与MAGE-D4的发病关系，为MAGE-D4可能作为临床治疗的靶点提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1研究对象 30例非小细胞肺癌及其癌旁组织收集自贵州中医药大学第二附属医院，且所有病例均已由病理科专业医师确诊为非小细胞肺癌，并获得患者的知情同意及院伦理委员会同意。

1.2主要仪器及试剂 普朗DNM-9606酶标分析仪(北京普朗新技术有限公司)；Human MAGED4-Ab ELISA试剂盒(武汉江莱生物科技有限公司，批号：)兔抗MAGE-D4抗体购自美国SANTA CRUZ公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠二抗购自北京中杉生物技术有限公司；免疫组化其他相关试剂购自北京中杉生物技术有限公司；其余试剂均为国产分析纯。

1.3方法 酶联免疫检测法(ELISA)，免疫组织化学技术，具体测定方法严格按照试剂说明书进行。

2 结 果

2.1ELISA检测非小细胞肺癌及癌旁组织中MAGE-D4的表达情况 ELISA结果显示，非小细胞肺癌组中MAGE-D4(24.51±8.23) ng/mL的相对表达量与癌旁组织(1.33±0.31) ng/mL相比较，其在癌组织的表达水平显著升高，差异具有统计学意义(P<0.01)。见图1。

2.2免疫组化中非小细胞肺癌及癌旁组织中MAGE-D4的表达水平 免疫组化结果显示，非小细胞肺癌中MAGE-D4呈现高表达状态，与癌旁组织相比较，差异具有统计学意义(P<0.01)，见图2。

3 讨 论

肺癌作为当前全球影响人类健康的最危险的恶性肿瘤之一，受到了广泛关注，且不断探索在传统手术治疗的基础上寻找新的靶向治疗药物，同时为了响应当前精准医疗的治疗思想，寻找能早期发现的肿瘤标志物同样具有积极的意义。目前黑色素瘤相关抗原MAGE-D4有报道与部分肿瘤的发生有一定联系，但与肺癌的相关研究甚少，因此本次研究通过检测非小细胞肺癌中MAGE-D4的表达情况初步阐明MAGE-D4与非小细胞肺癌的相互关系，结果证实MAGE-D4确实与非小细胞肺癌的发病有关。

MAGE是一个包含有众多亚基的大家族，其中MAGE-D4最初被命名为MAGE-E1[4]，当前对MAGE-D4的研究更多的局限于mRNA水平，但也有部分报道其与食管癌、乳腺癌、肝癌及神经胶质瘤等相关肿瘤的增殖、迁移相关[5-7]。此外，据报道[8-9]，MAGE-D4的mRNA的比例小于蛋白质水平，分析认为这可能与mRNA转录后修饰、蛋白酶体降解等有关，但这一影响决定了在蛋白水平研究MAGE-D4的表达比在mRNA水平上研究要更准确，因此免疫组化及ELISA等蛋白研究技术也是被更多人所运用。研究[10]显示，在非小细胞肺癌的鳞状细胞癌中的MAGE-D4比腺癌表达稍高，MAGE-D4总体上是促进非小细胞肺癌的增殖，但其在远期预后各阶段的表达差异不明显。这一结论与本次研究的结果基本一致，这也进一步说明MAGE-D4参与了非小细胞肺癌的发病过程。

由于本次研究只是一项初步的探索与验证，未来还可以在条件允许的情况下增加病例数量，进一步探索完善MAGE-D4在非小细胞肺癌中的具体功能作用和相作用的生物活性分子，寻找其潜在的分子信号转导机制，进一步完善并报道MAGE-D4与非小细胞肺癌的相互关系。

(本文图1～2见封三)