不同分子亚型乳腺癌患者基质相互作用分子1表达水平的研究

金菊 丁小文 乔恩奇 张喜平*

目前，我国已成为乳腺癌发病率增长最快的国家之一［1］。美国癌症统计研究报告，乳腺癌的发病率在女性恶性肿瘤中位居榜首［2］。乳腺癌的侵袭和转移是一个由多因素调控的复杂、动态过程，但其作用机制尚不清楚。基质相互作用分子1（stim1）是一种钙离子感受器，其可以刺激并激活Orai1分子，引起细胞外钙离子流入，并且进一步诱发相应的细胞活动。stim1作为钙离子调节感受器，对癌细胞的增殖、浸润、转移具有一定程度的促进作用，其与肿瘤细胞的侵袭、转移具有直接关系。由于不同的乳腺癌亚型的分子调节机制有所不同，作者推测stim1在不同亚型乳腺癌中的表达量也会有所区别。本文通过分析不同分子亚型无淋巴结转移的乳腺癌组织中stim1表达水平，探讨其在乳腺癌中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验试剂 stim1抗体购置于Thermo Fisher公司（美国，货号CDN3H4），Western blot检测试剂盒（货号KGP1201）、全蛋白抽提试剂盒（KGA902）、SDSPAGE凝胶配制试剂盒（KGP113）购自江苏凯基生物技术开发有限公司。

1.2 样本来源 选择2012年8月至2013年8本院肿瘤生物样本库中保存的经手术当天取材的无淋巴结转移的三阴性、Her-2阳性、Luminal A型、Luminal B型乳腺癌组织各5例。其中Luminal B型中ER（阳性）、PR（阳性）、Ki 67高表达 2例、ER（阳性）、PR（阳性）、Her-2（阳性）3例。所有患者年龄33～68岁，平均50.3岁；上述患者均通过病理学检测诊断为乳腺浸润性导管癌，术前未进行放化疗及内分泌治疗。所有患者均实施相应的乳腺癌改良或保乳根治术，收集了上述患者的乳腺癌肿瘤组织样本，并放置于样本库中低温保存，术后随访时间截止到2018年12月底。总生存（OS）指随访截止日期的时间或随访中出现死亡的时间；无复发生存（RFS）指随访中出现首次复发转移的时间。

1.3 方法 采用Western blot检测stim1在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达水平，实验方法如下：配制细胞裂解液、将制备的蛋白样品与上样缓冲液混合，并在100℃处理5min，每孔加载100μg细胞总蛋白，进行电泳、转膜、封闭，接着进行一抗杂交、洗膜和二抗杂交和显影。

1.4 统计学方法 各组样本stim1蛋白表达灰度分析采用单因素方差分析（one-way ANOVA），使用COX回归分析，纳入肿瘤的最大直径、不同分子亚型、病理分期和stim1蛋白表达量为变量，分析这4个变量对患者OS和RFS的影响。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Stim1蛋白表达水平在三阴性乳腺癌组织中最高，Her-2阳性乳腺癌组织其次，Luminal A型乳腺癌组织最弱。与三阴性乳腺癌患者样本相比，Her-2阳性乳腺癌组织中stim1蛋白表达有所降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）；Luminal A型患者乳腺癌组织与Luminal B型患者乳腺癌组织中stim1蛋白表达显著降低（P＜0.01）。与Her-2阳性乳腺癌组织相比，Luminal A型与Luminal B型乳腺癌组织stim1蛋白表达显著降低（P＜0.01）。与Luminal A型乳腺癌组织相比，Luminal B型乳腺癌组织stim1蛋白表达虽然略有增加，但差异无统计学意义（P＞0.05）。不同分子亚型乳腺癌组织中肿瘤的最大直径、病理分期和stim1蛋白表达量与OS和RFS无关，各指标差异无统计学意义（P＞0.05），见表 1，图 1、2。

表1 不同分子亚型乳腺癌组织stim1表达水平

图1 各组样本stim1蛋白表达条带图

图2 各组样本stim1蛋白表达灰度分析

3 讨论

钙离子（Ca2+）调节不平衡可诱发乳腺癌，促进乳腺癌的进展。stim1/Orai1在雌激素受体阴性（ERα-）的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中，对于SOCs和细胞迁移很重要。Orai3在雌激素受体阳性（ERα+）的人乳腺癌细胞MCF-7中，表达显著增加，stim1和Orai3对SOCs的调控起主导作用。因此，stim1与Orai相互作用与乳腺癌细胞分型直接相关。内质网中Ca2+的减少导致stim1易位到质膜下点状突起，并激活Orai 1通道。ERα+乳腺癌细胞系中的SOCE由stim1/2和Orai3介导，而ERα-乳腺癌细胞则是经典的stim1/Orai1途径［3］。已发现stim1和Orai1在乳腺肿瘤细胞迁移和转移起重要作用，Stims和Orais有望成为癌症治疗的新靶点。

已发现stim和orai蛋白在较多恶性肿瘤的发展和转移中起着至关重要的作用，例如乳腺癌、前列腺癌等［4］。在多形性脑胶质母细胞瘤中，stim1和Orai1的下调导致入侵的肿瘤细胞显著减少。相比之下，敲除stim1和Orai1基因对脑多形性胶质母细胞瘤细胞增殖几乎无影响。这些结果表明，stim1和Orai1编码SOCE和CRAC电流，并控制脑多形性胶质母细胞瘤细胞的侵袭［5］。一些研究人员发现肝细胞癌细胞系stim1表达升高，其在肝癌组织中的表达水平高于癌旁组织。有研究者提出stim1可作为检测肝癌高转移潜能的预后指标，stim1具有作为转移性肝癌新的分子靶点的治疗潜力［6］。

本资料显示，stim1蛋白表达水平在三阴性乳腺癌组织中最高，Her-2阳性乳腺癌次之，Luminal A型则最弱。Luminal A型与Luminal B型乳腺癌组织stim1蛋白表达水平明显低于三阴性乳腺癌和Her-2阳性乳腺癌，而三阴性和Her-2阳性型乳腺癌又是预后最差的肿瘤。因此，作者认为stim1的表达水平与乳腺癌恶性程度有关，其在乳腺癌发病机制中的作用有待进一步阐明。