半乳糖凝集素-9与IgA肾病相关性研究

苏波峰 李铎 尤小寒

IgA肾病（IgAN）是我国慢性肾小球肾炎最常见的病理类型，发病机制与CD4+T细胞功能紊乱有关［1-2］。半乳糖凝集素-9（Galectin-9）与其受体结合后可通过诱导CD4+T细胞亚群凋亡，发挥免疫负调控作用，与某些自身免疫性疾病和肾脏病的发生发展有关。作者通过检测IgA肾病血清Galectin-9的水平，并与24h尿蛋白定量、肾功能（eGFR）等临床指标进行相关性分析，以期阐明Galectin-9与IgA肾病的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年7月至2018年12月本院就诊并经肾活检确诊为IgA肾病患者58例为观察组（A组），男26例，女32例；平均年龄（35.1±10.3）岁。纳入标准：（1）年龄18～60岁；（2）未经激素及免疫抑制剂治疗。排除标准：（1）过敏性紫癜、肝硬化等引起的继发性IgA肾病患者；（2）患有其他自身免疫性疾病、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、哮喘、感染（细菌、真菌、病毒）、恶性肿瘤、糖尿病等可导致Galectin-9水平变化的患者；（3）患有严重系统性疾病如肝硬化、心力衰竭等患者。依据24h尿蛋白定量水平分为3个亚组：A1组（18例）≤1.0g，1.0g＜A2组（22例）≤2.0g，A3组（18例）＞2.0g。同期选取30例体检健康者为对照组（B组），男14例，女16例；平均年龄（33.5±12.1）岁。两组均签署受试知情同意书。

1.2 方法 （1）样本收集及常规检查：抽取两组人员外周血5ml，静置30min后室温离心分离血清，-20℃低温保存，用于血清Galectin-9检测。同时检测患者血肌酐（按Cockcroft-Gault公式计算eGFR评估肾功能）、血尿酸、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、C反应蛋白等指标。A组患者留取24h尿标本测定24h尿蛋白定量，并测定血IgA水平。IgA肾病患者绝大部分都有血尿，但尿检红细胞结果容易受饮水、留置时间等多种因素的影响，波动较大，故未纳入本次研究范畴。（2）Galectin-9检测：取上述分离的血清，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定，其测定原理及操作步骤按所购试剂盒相关说明书进行。Galectin-9 ELISA试剂盒购自武汉USCN公司。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件。计量资料以（s）表示，两样本均数比较采用t检验，多组均数比较采用单因素方差分析，计数资料比较采用χ2检验。两变量间的关系采用Pearson相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床资料及实验室检查指标比较 见表1。

表1 两组临床资料及实验室检查指标比较（s）

表1 两组临床资料及实验室检查指标比较（s）

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2.2 IgA肾病组患者不同程度蛋白尿外周血Galectin-9水平比较 见表2。

表2 IgA肾病不同蛋白尿水平亚组间实验室检查指标比较（s）

表2 IgA肾病不同蛋白尿水平亚组间实验室检查指标比较（s）

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2.3 IgA肾病组血清Galectin-9水平和临床指标的相关性分析 Pearson相关分析显示，A组患者血清Galectin-9水平和性别、年龄、血尿酸、血白蛋白、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、C反应蛋白、血IgA水平等无相关，与24h尿蛋白量呈正相关（r=0.709，P＜0.01），和 eGFR 呈负相关（r=-0.711，P＜0.01），见图1。

图1 IgA肾病组患者血清Galectin-9与24h尿蛋白、eGFR相关性

3 讨论

慢性肾小球肾炎是终末期肾脏病（ESRD）的主要病因，IgA肾病是最常见的病理类型，约有15%～20%及30%～40%的IgA肾病患者分别在明确诊断10年及20年内进展至ESRD［3］。目前认为，IgA肾病在某种程度上是一种自身免疫性疾病。IgA肾病患者体内IgA1糖基化异常导致其被正常抗体识别并结合，形成免疫复合物沉积于肾小球系膜区，激活补体，引起炎症因子及血管紧张素Ⅱ等释放，最终导致系膜细胞增生和足细胞损伤。IgA肾病患者产生的多聚IgA1是由多克隆活B细胞生成，而B细胞分泌多聚IgA1则受到CD4+T细胞的调控。越来越多的研究表明，IgA肾病的发生发展与CD4+T细胞功能紊乱有关。CD4+T细胞亚群Th1/Th2失衡对于IgAN发生发展的作用已得到证实［4］。IgA肾病患者外周血中Th1/Th2比例失衡［5］，导致IL-2，IL-6，TNF-α，INF-γ等［6］大量炎症细胞因子分泌。促炎因子产生增多参与IgA肾病的进展，与临床病理及临床表现密切相关［7］，最终导致肾脏纤维化［8］。

半乳糖凝集素-9（Galectin-9）是T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（Tim-3）的配体。Tim-3主要分布于CD4+T细胞亚群Th1细胞表面，Galectin-9与Tim-3结合后可诱导Th1细胞细胞凋亡，调节Th1/Th2失衡，从而在体液免疫和细胞免疫各个阶段中发挥负调控功能。近年来Galectin-9/Tim-3与自身免疫性疾病的关系逐渐成为研究热点。研究表明，系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血Galectin-9和其受体Tim-3表达均升高，且升高水平与疾病活动度SLEDAI评分呈正相关［9］，Galectin-9/Tim-3可能通过促进相关淋巴细胞亚群细胞凋亡发挥免疫负调控和抗炎作用［10-11］。类风湿性关节炎患者外周血和外周关节液Galectin-9/Tim-3通路水平也明显升高，与疾病活动度呈负相关，其表达增加有助于控制疾病活动［12］。

Galectin-9/Tim-3与肾脏疾病的研究也逐渐增多。日本学者发现2型糖尿病伴慢性肾脏病（CKD）的患者血清Galectin-9水平明显升高，与其肾小球滤过率（GFR）呈负相关［13］。Guo等证实狼疮性肾炎患者肾脏组织中Tim-3阳性率显著高于对照组，且Tim-3表达强度与疾病病理分级及活动度显著相关［14］。而在自身免疫性疾病抗GBM肾小球肾炎的小鼠模型中［15］，注射Galectin-9激活Galectin-9/Tim-3通路可以减轻抗GBM肾炎小鼠肾脏新月体形成，阻止肾功能进一步恶化，其肾保护作用是通过调整免疫失衡，抑制Th1和Th17介导的免疫反应和促进Th2细胞功能实现的。

本资料结果表明，Galectin-9水平随着蛋白尿的增多而增高，与24h尿蛋白定量呈正相关，与肾功能（e-GFR）呈负相关，即Galectin-9水平随着疾病严重程度增加而增高，提示Galectin-9有可能参与IgA肾病的发生发展过程。鉴于Galectin-9/Tim-3的免疫负调控作用，本资料中观察组血清Galectin-9水平的升高可能是机体对IgA肾病状态下免疫性炎症的代偿性反应，机体通过升高Galectin-9，增强与Tim-3的结合，促进相关细胞凋亡，调节CD4+T细胞亚群失衡，从而发挥体液和细胞免疫的负调控作用，减轻肾损害。已有实验证实Galectin-9可以改善抗GBM肾小球肾炎小鼠模型的肾损伤害［15］，因此下一步实验可将Galectin-9应用于IgA肾病动物模型以观察其对IgA肾病的影响，并对具体机制进行研究。