通元针法对慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠行为学的影响

祝晓忠　吴晓玲　张贵锋

【摘要】 目的：觀察通元针法对慢性不可预知温和应激抑郁症模型大鼠行为学的影响，探索针刺干预抑郁症的临床优化方案。方法：SD大鼠60只，按照处理方法不同分成空白对照组10只，造模组50只。空白对照组不予处理，造模组采用慢性不可预知温和应激法进行造模。选造模成功大鼠40只，按照随机数字表法分成模型对照组、帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组，每组10只;模型对照组予生理盐水灌胃，帕罗西汀组每日予帕罗西汀灌胃，常规针刺组电针百会、印堂，通元针法组电针百会、大椎、气海、关元;采用体质量、糖水偏好实验、旷场实验、悬尾实验评价干预治疗效果。结果：与空白对照组比较，造模后各组大鼠体质量均显著减轻、糖水偏好度均显著降低、中央区域停留时间均显著缩短、悬尾不动时间均显著延长（P<0.05）。干预2周后，帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组大鼠各项指标与模型对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05），常规针刺组与通元针法组大鼠的糖水偏好度、中央区域停留时间、悬尾不动时间比较，差异均有统计学意义（P<0.05），帕罗西汀组与通元针法组的大鼠悬尾不动时间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能有效改善抑郁症模型大鼠的抑郁症状，通元针法对观测指标的改善效果更加明显。

【关键词】 通元针法; 抑郁症; 针刺; 行为学; 大鼠模型

Effect of Tongyuan Acupuncture Method on Behavior of Chronic Unpredictable Moderate Stress Depression Rats/ZHU Xiaozhong，WU Xiaoling，ZHANG Guifeng.//Medical Innovation of China，2019，16（20）：0-032

【Abstract】 Objective：To observe the effect of tongyuan acupuncture on behavior of chronic unpredictable mild stress depression model rats.Method：60 SD rats were divided into blank control group（n=10）and model group（n=50）according to different treatment methods.The blank control group was not treated，and chronic unpredictable mild stress method was adopted in the model group.40 rats were selected for successful modeling，and were divided into model control group，Paroxetine group，routine acupuncture group and tongyuan acupuncture group according to random number table method，with 10 rats in each group.Normal saline was given to the model control group and Paroxetine was given to the paroxetine group daily，routine acupuncture group electroacupuncture baihui，yintang，tongyuan acupuncture group electroacupuncture baihui，dazhui，qihai，guanyuan.The effects of intervention were evaluated by body mass，sugar water preference test，open-field test and tail suspension test.Result：Compared with the blank control group，the body mass of the rats in each group were significantly reduced after modeling，the preference degree of sugar and water were significantly reduced，the stay time in the central region were significantly shortened，and the tail suspension time were significantly prolonged（P<0.05）.After 2 weeks of intervention，all the indicators of the Paroxetine group，the conventional acupuncture group and the tongyuan acupuncture group were compared with the model control group，the differences were statistically significant（P<0.05）;comparison of sugar water preference，central region residence time and tail suspension time between the conventional acupuncture group and the tongyuan acupuncture group showed statistically significant differences（P<0.05），comparison of tail suspension time between Paroxetine group and tongyuan injection group showed statistically significant difference（P<0.05）.Conclusion：Paroxetine，routine acupuncture and tongyuan injection can effectively improve the depression symptoms of the depression model rats，and tongyuan injection has a more obvious effect on the improvement of the observation indexes.

【Key words】 Tongyuan acupuncture method; Depression; Acupuncture; Behavior; Rat Model

First-authors address：Zhaoqing Hospital of Traditional Chinese Medicine，Zhaoqing 526020，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.20.007

抑郁症是人类的一种常见精神疾病，主要表现为高级认知功能紊乱，以情绪低落、兴趣减少、思维缓慢、睡眠障碍等为典型临床特征，严重者可出现自杀倾向[1]。大量研究证实针刺治疗抑郁症具有操作便捷、适用人群广、安全经济、不良反应少的优势[2]。“通元针法”是广东省名中医赖新生教授创立的一种新型针刺方法，对抑郁性神经症有显著效果[3]。笔者在文献[4]研究基础上，观察了通元针法对抑郁症模型大鼠行为学的影响，并与常规针刺、帕罗西汀的干预效果进行了比较，探索针刺干预抑郁症的临床优化方案，现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1 动物与分组 在南方医科大学实验动物中心采购SPF级健康成年SD雄性大鼠60只[实验动物使用许可证编号SYXK（粤）2016-0167，大鼠批号44002100013989]，180～220 g，6～7周龄。单笼饲养于通风良好、温度（24±2）℃、湿度50%～60%、保持12 h明暗周期的SPF级动物实验室。60只大鼠按照处理方法不同分为空白对照组10只和造模组50只。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 造模组50只大鼠采用慢性不可预知温和应激法（CUMS）造模[5-8]，在21 d内随机给予12种不同应激刺激：禁水24 h、禁食24 h、潮湿垫料24 h、昼夜颠倒24 h、频闪照明12 h、束缚2 h、36 V电击足底5 min、4 ℃冰水游泳5 min、45 ℃温水游泳5 min、水平震荡5 min、夹尾3 min、倾斜鼠笼24 h，上述刺激重复1～2次，共21种，纳入随机表格中，每天随机给予1种刺激，使大鼠不能预料将发生何种刺激。造模结束后，用行为学指标检测抑郁症大鼠模型是否成功建立。

1.2.2 干预方法 从造模组中选择40只合格的抑郁症模型大鼠，按照随机数字表法分为模型对照组、帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组，每组10只。从第22天开始，分别接受不同的干预，时间均为2周。（1）空白对照组：单笼饲养，自由饮水摄食，不予任何处理。（2）模型对照组：给予生理盐水灌胃处理，生理盐水灌胃量同帕罗西汀组灌胃量，自由饮水摄食。（3）帕罗西汀组：每日予帕罗西汀（盐酸帕罗西汀片，购自南方医科大学南方医院）灌胃治疗，按1.844 mg/kg给药，1次/d，治疗期间自由饮水摄食。（4）常规针刺组：固定大鼠，取百会、印堂，消毒后用0.25 mm×13 mm针灸针进行针刺，进针后均匀捻转30 s，接通G6805-Ⅰ型电针仪，频率15 Hz，连续波，电流强度约1 mA，以大鼠安静耐受为度，每次20 min。（5）通元针法组：固定大鼠，取百会、大椎、气海、关元，消毒后用0.25 mm×13 mm针灸针进行针刺，进针后均匀捻转30 s，接通G6805-Ⅰ型电针仪，频率15 Hz，连续波，电流强度约1 mA，以大鼠安静耐受为度，20 min/次。腧穴定位参照《实验针灸学》中大鼠的腧穴定位方法[9]。

1.3 观察指标 造模前、造模3周后、干预2周后3个时间点进行相关指标的检测。（1）体质量：将1个容器放在天平上，去皮归零将大鼠放于容器内，待读数稳定后，记下称体质量读数，记录3次的体质量，取平均值。（2）糖水偏好实验：第一个24 h在安静环境给予大鼠2瓶质量相当的浓度为1%的蔗糖水;第二个24 h给予质量相当的1%蔗糖水、纯净水各1瓶。禁食禁水24 h后，同时给予质量相当的1%蔗糖水1瓶、纯净水1瓶，记录1 h内大鼠摄入纯净水和蔗糖水的量。糖水偏好度（%）=糖水消耗量/（糖水消耗量+纯净水消耗量）×100%[7]。（3）旷场实验：将实验箱（型号63007，购于深圳市瑞沃德生命科技有限公司）底部平均划为25格，中央9格为中央区域，周边16格为外周区域;在安静且昏暗房间，捏住大鼠尾巴轻放入实验箱中央，测量大鼠在5 min内在中央区域停留时间[10-11]。（4）悬尾实验：将大鼠尾端固定于铁架台上成倒挂状态，头部距底部5 cm，悬挂6 min，统计大鼠后4 min内保持不动的累计时间（放弃挣扎呈倒立竖直状态）[12-13]。

1.4 统计学处理 数据整理后采用SPSS 22.0进行统计学处理，计量资料用（x±s）表示，计量资料组内比较用重复测量方差分析，组间比较用多因素方差分析。统计推断采用双侧检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组体质量比较 造模前，各组大鼠体质量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，造模后各组大鼠体质量显著减轻（P<0.05）。干预2周后，模型对照组、常规针刺组大鼠体质量与空白对照組比较，差异均有统计学意义（P<0.05）;与模型对照组比较，帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组大鼠体质量均显著增加（P<0.05）。见表1。

2.2 各组糖水偏好实验结果比较 造模前，各组大鼠糖水偏好度比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，造模后各组大鼠糖水偏好度均显著降低（P<0.05）。干预2周后，组间比较差异有统计学意义（F=9.54，P<0.01），帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组与模型对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05），常规针刺组与通元针法组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3 各组旷场实验结果比较 造模前，各组大鼠中央区域停留时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，造模后各组大鼠中央区域停留时间均显著缩短（P<0.05）。干预2周后，组间比较差异有统计学意义（F=16.42，P<0.01），帕羅西汀组、常规针刺组、通元针法组与模型对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），常规针刺组与通元针法组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

2.4 各组悬尾实验结果比较 造模前，各组大鼠悬尾不动时间比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组比较，造模后各组大鼠悬尾不动时间均显著延长（P<0.05）。干预2周后，组间比较差异有统计学意义（F=30.51，P<0.01），帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组与模型对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05），常规针刺组、帕罗西汀组与通元针法组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

抑郁症动物模型要求满足症状相符、致病因素一致、能被抗抑郁药治疗三个条件。症状相符指动物模型要与抑郁症患者具有相同的表现，如食欲不振，体质量减轻，快感缺失及社会交往障碍;致病因素一致指导致抑郁症的物理心理因素相同，如遗传因素、环境因素等;能被抗抑郁药治疗指模型动物的抑郁样表现能被现阶段有效的阳性抗抑郁剂所逆转[7]。慢性不可预测温和应激抑郁动物模型是国际公认的一种抑郁症动物模型，给予动物慢性不可预见性温和刺激，可以较好地模拟人类绝望、快感消失、探索欲望下降等抑郁行为[14]。本研究采用慢性不可预测温和应激建立抑郁症大鼠模型，结果表明造模成功大鼠的体质量、糖水偏好度、旷场实验中央区域停留时间、悬尾不动时间与造模前及空白对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.05），提示造模成功;经过2周的干预后，帕罗西汀组、常规针刺组、通元针法组大鼠的相关指标均显著改善，提示三种方法均能有效改善大鼠的抑郁症状。

体质量测量是评价大鼠情绪状态及食欲的重要指标[15]。本研究证实，慢性不可预测温和应激刺激会导致抑郁模型大鼠体质量显著减少，经过干预后，大鼠的体质量显著增加，与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），表明帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能提高抑郁症模型大鼠的食欲，促进体质量增加。糖水偏好实验用于评价大鼠对奖赏性行为的反应性，以及对事物的感兴趣程度[16]。本研究提示，慢性不可预见性温和刺激会导致抑郁模型大鼠糖水偏好率明显下降，经过干预后，大鼠的糖水偏好率显著增加;表明帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能提高抑郁模型大鼠对奖赏性行为的反应性，改善大鼠的抑郁样行为。旷场实验可以评价大鼠在新环境中自主行为、探究行为与紧张度[10]。本研究结果发现，慢性不可预见性温和刺激会导致大鼠在中央区域停留时间的显著缩短，在靠近箱壁的边缘区域活动时间相对增加，提示大鼠的探究行为降低、紧张度增加;经过干预后，在中央区域停留时间的显著增加，说明帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能提高抑郁模型大鼠对新环境中自主行为、探究行为，减轻大鼠的抑郁症状。悬尾实验主要用于反映抑郁症动物的行为绝望，是评价焦虑与抑郁情绪的经典方法[17]。本研究发现，慢性不可预见性温和刺激会使大鼠保持不动的累计时间显著延长;经过干预治疗后，大鼠保持不动的累计时间显著缩短，说明帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能减轻抑郁大鼠的绝望状态。尽管帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能显著改善模型大鼠的抑郁症状，但是糖水偏好实验、旷场实验、悬尾实验的结果均显示，通元针法的治疗效果要显著优于常规针刺法;糖水偏好实验、旷场实验结果显示，通元针法对于抑郁症模型大鼠的抑郁状态改善效果与帕罗西汀相当，而悬尾实验的结果显示，通元针法在减轻抑郁大鼠的绝望状态方面要优于帕罗西汀。

抑郁症属于中医“郁证”范畴，病因病机与阴阳失衡、气血失和、五脏功能失调、元神失养、痰浊阻滞等密切相关，然其根本在于阴阳失衡、元神失养[18]。“通元针法”即“通督养神、引气归元针法”，由全国老中医药专家学术经验继承工作指导老师、广东省名中医赖新生教授创立，赖新生教授认为经络之气阴阳相应、脏腑腹背气相交贯，疏通经络必须调气，而调气关键在于引气归元，阴病取阳之背俞，阳病取阴之腹募，两者兼而取之，则阴阳二气贯通归元，实现阴平阳秘[19]。已有研究证实，通元针法治疗抑郁性神经症、产后抑郁症效果显著[3，20]。

《证治汇补·郁证》记载：“郁病虽多，皆因气不周流，法当顺气为先。”任脉为阴脉之海，督脉为阳脉之海，两者是调节全身气血阴阳的关键，本研究以督脉的百会穴、大椎穴通督养神，以任脉的气海穴、关元穴引气归元，四穴配合，燮理阴阳、调和气血，因此对抑郁症模型大鼠有显著的治疗效果。

综上所述，帕罗西汀、常规针刺、通元针法均能有效改善抑郁症模型大鼠的抑郁症状，通元针法对观察指标的改善效果更加明显，为针刺治疗抑郁症提供了一条新思路和新方案。

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