脑胶质瘤患者血清microRNA-375的表达水平及临床意义

白晓斌，霍龙伟，谢万福，徐高峰，王茂德

（1.西安交通大学第一附属医院 神经外科，陕西 西安 710061；2.榆林市第一医院 神经外科，陕西 榆林 719000）

脑胶质瘤的发病机制复杂，主要为抑癌基因失活和原癌基因激活产生的一系列动态演变和基因异常的结果[1]。MicroRNA（miRNA）为一种新的非编码RNA，miRNA 参与多种病理生理过程，为恶性肿瘤的诊断和治疗提供了新思路[2]。血清miRNA 水平比较稳定，检测血清miRNA 水平在恶性肿瘤的诊治及预后评估中具有重要价值[3]。miRNA-375 在多种恶性肿瘤中异常表达，其表达水平在多种恶性肿瘤诊治中具有重要意义[4-7]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月—2013年12月西安交通大学第一附属医院神经外科收治的脑胶质瘤患者120 例作为脑胶质瘤组，选取同期本院健康体检群众120 例作为对照组。脑胶质瘤组患者中男性64 例，女性56 例；年龄（53.46±6.14）岁；脑叶部53 例，脑干和小脑部67 例；肿瘤直径（3.14±0.61）cm，术前KPS 评分（86.37±11.25）分；世界卫生组织病理分级Ⅰ级 28 例，Ⅱ级34 例，Ⅲ级45 例，Ⅳ级13 例。对照组男性62 例，女性58 例；年龄（54.13±5.78）岁。纳入标准：脑胶质瘤患者病理确诊为脑胶质瘤，术前卡氏评分（Kanofsky performance score,KPS）＞50 分，术前未接受放化疗及生物免疫治疗等相关治疗，进行脑胶质瘤手术治疗。排除标准：精神意识障碍无法沟通，自身免疫性疾病，其他恶性肿瘤，严重心、肺、肝及肾等重要脏器疾病，未正规随访或失访者。本研究经本院伦理委员会审批通过，患者均签署知情同意书。

1.2 方法

逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）测定血清miRNA-375 水平。取患者外周静脉血，分离血清，加入RNA 酶混匀，采用酚-氯仿法进行裂解，提取总RNA，逆转录为cDNA，采用RT-PCR 测定血清miRNA-375 水平，PCR 反应条件：95℃预变性20 s，95℃变性10 s，60℃退火20 s，70℃延伸10 s，共42个循环。采用2-ΔΔCt法计算血清miRNA-375 水平。RT-PCR 仪器和相应试剂盒均购自美国Sigma 公司。

1.3 随访

术后电话或门诊随访，手术结束时间为随访开始时间，术后死亡时间或随访截止时间为随访结束时间，随访截止时间为2018年12月31日。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；Kaplan- Meier 法绘制ROC 曲线，比较用Log-rank χ2检验；影响因素的分析用多因素Logistic 回归模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者血清miRNA-375 相对表达量比较

脑胶质瘤组miRNA-375 相对表达量为（0.48± 0.09），对照组为（1.00±0.05），经t检验，差异有统计学意义（t=55.327，P=0.000），脑胶质瘤组低于对照组。见图1。

图1 两组患者血清miRNA-375 相对表达量比较 （n =120，±s）

2.2 不同因素患者血清miRNA-375 水平比较

不同术前KPS 评分、病理分级患者血清miRNA-375水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05），术前KPS 评 分≥80 分、病理分级Ⅲ和Ⅳ级患者血清miRNA-375 水平低于术前KPS 评分＜80 分、病理分级Ⅰ和Ⅱ级患者。不同性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径患者的miRNA- 375 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 不同因素患者血清miRNA-375 水平比较 （±s）

表1 不同因素患者血清miRNA-375 水平比较 （±s）

因素 n miRNA-375 t 值 P 值性别 男 64 0.49±0.11 1.555 0.123 女 56 0.46±0.10年龄 ≥55 岁 49 0.50±0.12 1.415 0.160 ＜55 岁 71 0.47±0.11肿瘤部位 脑叶 53 0.50±0.15 1.506 0.135 脑干和小脑 67 0.46±0.14肿瘤直径 ≥3 cm 66 0.46±0.14 1.825 0.071 ＜3 cm 54 0.51±0.16术前KPS 评分 ≥80 分 45 0.41±0.08 10.259 0.000 ＜80 分 75 0.59±0.10病理分级 Ⅰ、Ⅱ级 62 0.61±0.11 12.457 0.000 Ⅲ、Ⅳ级 58 0.39±0.08

2.3 血清miRNA-375 水平与脑胶质瘤临床病理特征的Logistics 回归分析

以血清miRNA-375 水平作为因变量，以性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、术前KPS 评分及病理分级作为自变量，采用二分类Logistics 回归分析，结果显示，血清miRNA-375 水平与脑胶质瘤术前KPS评分和病理分级相关（P＜0.05）。见表2。

2.4 血清miRNA-375 对脑胶质瘤的诊断价值

血清miRNA-375 诊断脑胶质瘤的ROC 曲线下面积为0.871，血清miRNA-375截断值（临界值）为0.547，敏感性为89.36%（95% CI：0.468，0.964），特异性为90.13%（95% CI：0.493，0.978）。见图2。

2.5 血清miRNA-375与脑胶质瘤预后的关系

以血清miRNA-3750.547 为界，分为低表达miRNA-375 和高表达miRNA-375 患者。低表达miRNA-375 患者总生存时间为（25.37±9.02）个月，无进展生存时间为（15.21±4.02）个月，高表达miRNA-375 患者总生存时间为（35.19±9.16）个月，无进展生存时间为（19.25±3.43）个月，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=4.937 和7.318，P=0.011和0.009），低表达miRNA-375 患者均低于高表达miRNA-375 患者。见图3、4。

表2 血清miRNA-375 水平与脑胶质瘤临床病理特征的Logistics 回归分析参数

图2 血清miRNA-375 诊断脑胶质瘤的ROC 曲线

图3 两组患者总生存时间的生存曲线

图4 两组患者无进展生存时间的生存曲线

3 讨论

脑胶质瘤在成年人中多见，中青年是脑胶质瘤的高发年龄，脑胶质瘤常用的治疗方法为手术治疗、放射治疗和化学治疗。以手术为主的综合治疗在个别早期胶质瘤患者中取得了较好的疗效，但大部分胶质瘤、特别是高级别脑胶质瘤的死亡率仍比较高[8]。除手术治疗、放射治疗和化学治疗外，其他治疗方法尚处在实验阶段，没有在临床上推广。目前最准确的诊断脑胶质瘤的方法为组织病理学检测，但该方法需要外科手术获得标本，为有创性操作，因此探索操作方便、敏感性和特异性较高的胶质瘤治疗方法具有重要 价值[9]。

miRNA 为含有19 ～25 个核苷酸的一种单链核糖核酸，在多种病理生理过程中发挥作用。研究发现，miRNA 在多种恶性肿瘤的发生、发展中具有重要的调控作用，在恶性肿瘤细胞的增殖、凋亡及侵袭等过程中也发挥重要的调节作用[10]。有研究发现多种miRNA 和脑胶质瘤的关系也比较密切，在脑胶质瘤的增殖、侵袭迁移及脑胶质瘤的诊断及预后判断中具有重要价值[11]。

miRNA-375 的生物学功能比较强大，可调控一系列基因的转录，参与葡萄糖有关的胰岛素分泌，参与细胞生长和增殖的调控；在多种恶性肿瘤中表达异常，与多种恶性肿瘤的转移和预后关系密切，如miRNA 375 可调节非小细胞肺癌细胞的存活和凋亡[12]；miRNA 375 在食管癌组织中呈低表达，与食管癌的分化程度、淋巴结转移和TNM 分期关系密切，参与食管癌的发生、发展[13]；上调miRNA-375 可增加人胃癌细胞的顺铂敏感性[14]。ZHANG 等[15]研究发现，miRNA-375 在脑胶质瘤中的表达也存在异常，脑胶质瘤患者的肿瘤组织中miRNA-375 水平降低，过表达miRNA-375 可抑制脑胶质瘤细胞的发展。

血浆和血清中miRNA 比较稳定，在不同疾病中具有特异性，并且可以直接检测出来。胶质瘤血清中多种miRNA 存在异常，多种血清miRNA 可作为胶质瘤诊断和预测进展的标志物[16-17]。在多种恶性肿瘤血清中miRNA-375 也存在异常，如前列腺癌、乳腺癌及原发性肝癌患者血清中miRNA-375 水平均存在异常，与患者则预后关系密切，可作为预后判断的生物标志物[18-20]。本文对脑胶质瘤患者血清miRNA-375水平进行研究，发现脑胶质瘤患者血清miRNA-375水平降低，血清miRNA-375 水平与脑胶质瘤的术前KPS 评分和病理分级关系密切，其诊断脑胶质瘤的ROC 曲线下面积为0.871，敏感性为89.36%，特异性为90.13%；低表达miRNA-375 患者总生存时间和无进展生存时间均低于高表达miRNA-375 患者，表明血清miRNA-375 在脑胶质瘤的诊断和预后预测中具有重要价值。

综上所述，脑胶质瘤患者血清miRNA-375 水平降低，血清miRNA-375 有望成为脑胶质瘤诊断和预后判断的潜在生物标志物。