黑水虻对杂交鳢生长、肌肉组成和血清指标的影响

王国霞，莫文艳，范怡杰，李国立，黄文庆，陈晓瑛，黄燕华,

( 1.广东省农业科学院 动物科学研究所，广东 广州 510640； 2.农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室，广东 广州 510640； 3.广东省畜禽育种与营养研究重点实验室，广东 广州 510640；4.广州飞禧特生物科技有限公司，广东 广州 510640 )

杂交鳢[乌鳢(Channaargus)♂×斑鳢(C.maculata)♀]，俗称生鱼，是乌鳢和斑鳢的杂交后代，属鲈形目、攀鲈亚目、鳢科、鳢属，是中国南方重要的淡水经济养殖鱼类[1]。杂交鳢肉质细嫩、味道鲜美，无肌间刺，属于淡水鱼类中的佳品，其还具有补气、补血、祛风湿、治胃寒等功效，同时它含有丰富的二十二碳六烯酸和二十碳五烯酸，具有较高的药用价值和营养价值[2]。在中国南方地区，尤其是两广和港澳地区，杂交鳢被视为病后康复和体虚者的滋补珍品。广东是杂交鳢的主产区，杂交鳢养殖产量占全国产量的50%以上。杂交鳢对饲料蛋白质量需求较高，近几年，随着鱼粉价格的不断上涨，以及杂交鳢需求不平衡和消费疲软的多重影响，导致其养殖效益及价格持续下滑[3]。因此，在满足杂交鳢营养需求的前提下，使用低鱼粉饲料配方时，如何有效提高杂交鳢摄食量而不影响生长，成为众多水产营养研究者关注的课题。

促摄食物质作为一种非营养性饲料添加剂，是目前研究较多的一类，具有改善饲料风味和水产动物对饲料的适口性，提高摄食量和饲料利用率，促进水产动物觅食和生长，降低饵料系数和环境污染[4]等优点。乌贼膏作为优良的诱食剂和营养补充原料，对鱼虾有明显的诱食作用，在水产饲料中有着广泛的应用。但是乌贼膏中脂肪、水分含量高，易发生变质，此外由于加工及处理方式不同，质量差异大[5-7]，尤其是重金属镉和汞超标导致的卫生安全隐患，严重制约其使用，寻找新的可替代的有效诱食剂产品也是必然的需求。黑水虻，学名为亮斑扁角水虻(Hermertiaillucens)，是一种大型双翅目、水虻科、扁角水虻属昆虫。因其在自然界分布较广、资源丰富、对环境安全、养殖难度较低[8]和易产业化等特点，黑水虻作为新型的功能性动物饲料很早就被学者关注[9-10]，最近几年更是国际社会关注和重视的资源昆虫，其幼虫富含蛋白质和脂肪等。黑水虻虫粉在水产饲料中替代鱼粉的应用已有相关报道[11-15]，虫浆也有零星报道[16]，而笔者前期观察到黑水虻干虫粉有明显的虫香味，混入饲料中可引起鱼虾抢食现象。但黑水虻在杂交鳢饲料中的诱食和应用研究未见报道。本研究以杂交鳢为研究对象，通过比较在饲料中添加乌贼膏、黑水虻幼虫干粉和鲜虫浆3种物质对其生长性能、形体指标、肌肉营养成分和血清指标的影响，筛选出适用于杂交鳢的诱食性物质，为其实用饲料配方的优化提供参考和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

各组饲料配方及营养水平见表1。以基础料中添加乌贼膏(购自浙江兴业集团有限公司油脂饲料加工厂)为对照组，分别添加5%黑水虻幼虫干粉(以下简称虫粉，由鲜虫在120 ℃短时间干燥粉碎制得)和10%黑水虻鲜幼虫浆(以下简称虫浆，干物质3%，由鲜虫直接粉碎打浆)为试验组，3组饲料为等氮等能饲料。黑水虻干虫和鲜虫均由广州飞禧特生物科技有限公司提供。各原料粉碎过60目筛，按照配方准确称量原料逐级混匀，加适量自来水搅拌混匀后用Valva-60-Ⅰ型膨化机(广州市维拉维机械设备有限公司)将其制成直径为3.0 mm的膨化颗粒饲料，55 ℃烘干，自然冷却后装入密封袋中置干燥阴凉处保存备用。

1.2 试验鱼及饲养管理

养殖试验在广东省农科院农业现代化科技示范区水产养殖实验基地1.5 m×1.5 m×2 m的渔排网箱中进行。鱼苗购自中山市三角镇霍华方水产种苗孵化场，购买的鱼苗在网箱中暂养至适宜规格后，挑选健康、规格一致的体质量为(83.24±0.13) g的杂交鳢180尾，随机分为3组，每组3个平行，每个平行20尾。分别投喂3种试验饲料。每日表观饱食投喂2次(8:30—9:00和17:30—18:00)。试验期间自然光照，水温19～34 ℃，pH 8.0～8.5，溶解氧水平>5 mg/L，氨氮质量浓度≤0.1 mg/L，亚硝酸盐质量浓度≤0.05 mg/L。饲养周期为10周。

1.3 样品采集与分析

1.3.1 指标计算

饲养试验结束后，禁食24 h，称量质量和统计存活尾数，计算质量增加率、特定生长率、饲料系数和成活率。每平行取4尾鱼，称量体质量及测量体长(吻端到脊椎骨末端)，采集鱼体背部肌肉用于营养成分测定，同时解剖分离出内脏团、肝脏和全肠并称量质量，记录，用于计算形体指标。所用计算公式如下：

质量增加率/%=(m2-m1)/m1×100%

特定生长率/%·d-1=[lnm2-lnm1]/t×100%

饵料系数=m3/(m2′-m1′)

平均摄食量/g·尾-1=m3/[(n1+n2)/2]

存活率/%=n2/n1×100%

肥满度=100m/L3

脏体比/%=m4/m×100%

肝体比/%=m5/m×100%

肠体比/%=m6/m×100%

式中，m1为试验鱼初始均质量(g)，m2为试验鱼终末均质量(g)，t为试验时间(d),m1′为试验鱼初始质量(g)，m2′为试验鱼终末质量(g)，m3为摄入饲料量，n1为试验鱼初始数量(尾)，n2为试验鱼终末数量(尾)，m为试验鱼体质量(g)，m4为试验鱼内脏质量(g)，m5为试验鱼肝脏质量(g)，m6为试验鱼肠道质量(g)。

表1 试验饲料配方及营养水平(风干基础) %

注：1.其他指L-赖氨酸0.5%、L-蛋氨酸0.1%、维生素C磷酸酯(35%)0.1%、氯化胆碱、维生素预混料0.2%、矿物预混料0.5%、磷酸二氢钙1.0%. 维生素预混料及微量元素预混料均由广州飞禧特生物科技有限公司提供. 每千克维生素预混料: VA 3 000 000 IU、VD31 200 000 IU、VE 15 g、VK310 g、VB110 g、VB215 g、VB615 g、烟酸40 g、泛酸钙40 g、叶酸1.8 g、肌醇70 g、VB120.06 g、生物素 0.1 g、水分≤10%；每千克矿物质预混料: Mg 28 g、Fe 6.0 g、Zn 20 g、Mn 2.0 g、Cu 1.0 g、Co 0.1 g、I 0.5 g、Se 0.040 g、水分≤ 10%.

1.3.2 饲料和背肌成分分析

水分含量采用105 ℃烘箱干燥法(GB/T 6435—2014)测定、粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(GB/T 6432—1994)测定、粗脂肪含量采用乙醚抽提法(GB/T 6433—2006)测定、灰分含量采用550 ℃灼烧法(GB/T 6438—2007)测定、钙含量采用乙二胺四乙酸二钠络合滴定法(GB/T 6436—2002)测定、总磷含量采用钼黄比色法(GB/T 6437—2002)测定。

1.3.3 血清指标测定

每个重复随机取4尾鱼，用1 mL无菌注射器进行鱼尾静脉取血，混合后于4 ℃下静置2 h，3500 r/min离心(80-2台式电动离心机)10 min，分离血清于-80 ℃冰箱保存，用于生化和免疫抗氧化指标等的测定。血清白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、球蛋白、血糖、总蛋白含量采用日立7600全自动生化分析仪检测(广州金域医学检验中心)。二胺氧化酶、内毒素、D-乳酸、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、碱性磷酸酶采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定，具体测定方法参照试剂盒说明书进行。

1.4 统计分析

试验数据用平均值±标准误表示，采用SPSS 18.0软件中单因素方差分析进行分析处理，若符合方差齐性则用Duncan法进行多重比较，否则用Dunnett-T3检验法进行多重比较。P<0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 黑水虻对杂交鳢生长性能的影响

各试验组杂交鳢的成活率均达到100%。干虫粉组和鲜虫浆组杂交鳢末均质量和质量增加率均较乌贼膏组(对照组)增加，其中干虫粉组的显著高于对照组(P<0.05)，鲜虫浆组有高于乌贼膏组的趋势(P=0.055)，干虫粉组和鲜虫浆组的特定增长率均显著高于对照组(P<0.05)；干虫粉组和鲜虫浆组的饵料系数均显著低于对照组(P<0.05)(表2)。各组摄食量，及形体指标肥满度、脏体比、肝体比和肠体比差异均不显著(P>0.05)。

2.2 黑水虻对杂交鳢背肌营养组成的影响

与对照组相比，干虫粉组和鲜虫浆组杂交鳢背肌粗脂肪含量增加，其中干虫粉组显著高于对照组(P<0.05)；试验中各组杂交鳢背肌的干物质、粗蛋白、灰分、钙及总磷含量差异均不显著(P>0.05)(表3)。

2.3 黑水虻对杂交鳢血清生化指标的影响

干虫粉和鲜虫浆组血清胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05)，干虫粉和鲜虫浆组血清甘油三酯均高于对照组，其中干虫粉组显著高于对照组(P<0.05)；试验各组间血清中的血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、球蛋白及总蛋白含量差异不显著(P>0.05)(表4)。

表2 3种不同投喂组合的杂交鳢的摄食和生长性能

注:同行肩标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，下同.

表3 3种不同投喂组合的杂交鳢背肌营养组成 %

表4 3种不同投喂组合的杂交鳢血清各生化指标含量

2.4 黑水虻对杂交鳢血清抗氧化和肠道屏障功能指标的影响

各组间血清免疫抗氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶含量差异不显著(P>0.05)；血清中肠道屏障功能指标二胺氧化酶、内毒素和D-乳酸含量差异不显著(P>0.05)(表5)。

表5 3种不同投喂组合的杂交鳢血清抗氧化和肠道屏障指标

3 讨 论

3.1 黑水虻对杂交鳢生长性能的影响

该试验结果表明，饲料中添加黑水虻干幼虫粉、黑水虻鲜虫浆与乌贼膏对照组比较，摄食量没有差异，且均能促进杂交鳢的生长、降低饵料系数，说明黑水虻干虫粉和鲜虫浆在摄食上与乌贼膏具有同样作用。添加黑水虻干虫粉与对照组比较，质量增加率显著提高38.19%，特定生长率显著提高25.47%，饲料系数显著降低28.22%。这与黑水虻虫粉在黄颡鱼(Pelteobagrusfulvidraco)[12]、建鲤 (Cyprinuscarpiovar.jian)[13]和锦鲤(C.carpiokoi)[14]中替代鱼粉对其生长性能影响不显著的结果不一致，分析原因跟虫粉使用量及其质量(一般鱼粉优于黑水虻虫粉，虫粉优于豆粕[18])和鱼种类不同有关。研究发现，黑水虻幼虫不仅含有丰富的蛋白质、必需氨基酸、不饱和脂肪酸以及奇数碳脂肪酸，还含有抗菌肽、几丁质和壳聚糖等生物活性成分，可作为一种新型的饲料原料在水产饲料中应用[17-18]。黑水虻干幼虫粉替代鱼粉试验中，建鲤[15]和锦鲤[14]的生长性能分别在75%和70%替代组出现最大值，但跟鱼粉对照组没有差异，说明黑水虻幼虫粉使用适宜剂量时效果优于同等量鱼粉，分析原因跟其含有抗菌肽、几丁质等活性物质有关。有研究报道，20%鲜蝇蛆浆能明显提高黄鳝(Monopterusalbus)的质量增加率并降低饲料系数，且效果优于存放180 d和冷冻后的蝇蛆浆[19]。本试验中添加黑水虻鲜虫浆与对照组比较显著提高了杂交鳢的生长参数，显著降低了饵料系数，说明适量的鲜虫浆可以提高鱼的生长。而与在幼镜鲤饲料中添加不同含量的黑水虻虫浆(最高组10%)养殖8周对其生长性能和体组成没有差异的报道[16]不一致，可能跟试验动物品种和黑水虻虫浆品质有关。

肝体比是评价鱼体健康程度的重要指标，肝指数较低，表明鱼体的肝脏负荷可控制在其自身肝功能调节的范围内[15]，而当脏体比、肝体比、肠体比增加，说明内脏因脂肪等沉积进而引起肥大，不仅影响其功能，而且还会降低饲料利用效率[20-21]。本试验结果显示，各组杂交鳢的脏体比、肝体比、肠体比差异不显著，表明在饲料中添加黑水虻虫粉和黑水虻虫浆与使用乌贼膏时一样对杂交鳢的肝功能调节能力没有影响。研究表明，某些蛋白替代品对水产动物肝体比不会产生显著影响[22-23]，与本试验中黑水虻虫粉的试验研究结果一致。

3.2 黑水虻对杂交鳢背肌营养组成的影响

本试验中各组之间杂交鳢的水分、粗蛋白、灰分、钙及总磷含量差异均不显著，说明杂交鳢的营养水平(除粗脂肪外)受这几种诱食物质(在该添加水平下)的影响不大，处于一个相对平衡的状态。研究发现，饲料中添加1%～2%乌贼膏对杂交鳢背肌的营养组成没有显著影响[2]，与本试验一致。在动物生产过程中，肌内脂肪的增加对提高肉质品质和风味具有重要作用[24]，本试验结果中黑水虻干虫粉组杂交鳢肌肉粗脂肪含量显著高于乌贼膏和鲜虫浆组，这可能与黑水虻虫粉本身具有较高的脂肪含量有关，且黑水虻脂肪有利于肌肉脂肪的沉积，而黑水虻油脂含量要达到一定量才能够有效果，这可能是黑水虻鲜虫浆组(换算成黑水虻干物质为3%，低于干虫粉组5%的用量)杂交鳢背肌脂肪含量低于干虫粉组的原因。研究发现，饲料中添加一定量蝇蛆浆能降低黄鳝肌肉中的脂肪含量，且跟蝇蛆浆新鲜程度没有关系[19]，与该试验结果不一致，可能跟昆虫种类及虫浆的营养组成尤其是脂肪酸组成及含量不同有关[18-19]。

3.3 黑水虻对杂交鳢血清指标的影响

血液的生理生化指标是反映动物生理机能及代谢状况的重要指标，也是衡量动物健康标准的指标[25]。已有研究发现，黑水虻预蛹替代鱼粉降低舌齿鲈(Dicentrachuslabrax)[26]血浆胆固醇的含量，可能是黑水虻预蛹和脱脂虫粉胆固醇含量低于鱼粉，导致替代饲料中的胆固醇含量降低引起鲈鱼血浆胆固醇含量低，饲料中胆固醇含量直接影响养殖动物血液胆固醇含量[27-28]。文远红等[29]也发现蝇蛆粉替代鱼粉使黄颡鱼血清胆固醇含量降低。本试验中用黑水虻虫粉、虫浆替代乌贼膏的结果与上述研究结果基本一致。也有不同报道，黑水虻虫粉替代鱼粉(黑水虻虫粉用量为3.5%和7.0%)对建鲤[13]血清胆固醇和甘油三酯含量没有影响。本试验中黑水虻虫粉、虫浆组血浆中的甘油三酯含量与对照组比较有增加，血清甘油三酯含量可反应脂肪组织发育和脂肪沉积能力，其含量增加提示脂肪沉积能力增强[30]，试验组背肌粗脂肪含量增加也验证了这一点。该试验中脱脂虫粉、虫浆替代乌贼膏后杂交鳢血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶有下降趋势，与用黑水虻替代鱼粉后锦鲤血浆中谷丙转氨酶显著下降、谷草转氨酶下降的结果[14]一致。

3.4 黑水虻对杂交鳢血清抗氧化和肠道屏障功能指标的影响

生物在生长发育过程会产生大量的自由基，这些自由基如果不能及时被机体抗氧化防御系统清除，过量的自由基即可诱发氧化应激，并导致氧化损伤[31]。器官和组织对氧化应激的易感性依赖于机体氧化与抗氧化的动态平衡。超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶等作为生物抗氧化体系重要调控酶，其活性高低直接影响机体抗氧化能力，而丙二醛作为机体氧化应激程度标志物质，与机体氧化应激呈正相关[32]。研究表明，黑水虻虫粉对锦鲤血浆超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽含量具有促进作用[14]，蛹肽蛋白分别替代大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼鱼配合饲料中45%和60%的鱼粉，能够显著增加大菱鲆幼鱼肝脏超氧化物歧化酶活性[33]，饲料中添加20%蝇蛆蛋白可有效提高凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)血清超氧化物歧化酶活性[34]，与本研究中添加黑水虻幼虫干粉一定程度提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的含量结果类似，这可能是因为昆虫粉中含有抗氧化蛋白及抗菌肽[35]，且其作用效果跟虫粉用量也有关。饲料中添加黑水虻虫浆2.5%～10%可使幼镜鲤血清过氧化氢酶升高，丙二醛显著下降[16]，而本试验中，10%的黑水虻虫浆对杂交鳢抗氧化指标没有显著影响，分析可能与虫浆品质及试验鱼种类有关，需要更多试验验证。

肠道不仅是重要的内分泌器官，调节营养物质消化与吸收，还是重要的免疫器官，其形成的屏障功能能够屏蔽肠腔内的有害物质(像二胺氧化酶、内毒素、D-乳酸)进入体内对机体造成损伤。肠道时刻与外界相通，接触外界微生物的次数也最多，因此也更容易产生氧化应激，造成氧化损伤[36-37]。二胺氧化酶是一种含有脱胺的腐胺和组胺的细胞内酶，大部分存在于小肠黏膜，肠黏膜受损时细胞坏死该酶被释放进入血液。内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖成分，是细菌大量增殖或是死亡裂解后释放出的有毒物质。D-乳酸是肠道固有细菌的代谢产物，血液中的D-乳酸基本上来源于肠道。因此测定血清中二胺氧化酶、内毒素、D-乳酸含量可以综合评定肠黏膜的通透性高低。本试验结果表明，各组杂交鳢血清二胺氧化酶、内毒素、D-乳酸含量没有显著差异，表明各组鱼肠道屏障功能没有差异。

4 结 论

综合比较乌贼膏、黑水虻干虫粉、黑水虻鲜虫浆3种物质在杂交鳢饲料中的应用效果，结果发现，5%的黑水虻干虫粉或10%鲜虫浆可以用于杂交鳢饲料中替代乌贼膏作为促摄食物质使用，而且较乌贼膏具有更好的促生长作用。