再生障碍性贫血和低增生性骨髓增生异常综合征外周血中淋巴细胞亚群的表达研究

赵立新

（河南省三门峡市渑池县人民医院检验中心 渑池472400）

再生障碍性贫血（AA）是一种由多种致病因素单独或共同导致的骨髓衰竭性疾病，因骨髓造血功能衰竭，不能提供足够的血细胞，从而导致外周血的减少。低增生性骨髓增生异常综合征（MDS）是一组克隆性、异质性疾病，主要由造血干细胞增殖分化障碍所导致，临床表现为骨髓增生异常以及外周血全血细胞数减少[1]。AA 以及低增生性MDS 虽然发病机制完全不同，治疗与预后均存在极大的差异，但是两者均以全血细胞减少为主要临床表现，且临床尚无特异性的诊断指标，给两者的鉴别诊断带来较大的困难。现阶段，大量的临床实验研究已证实，机体免疫异常在AA 以及低增生性MDS 发生发展中发挥了重要作用[2]。本研究对比淋巴细胞亚群在AA和低增生性MDS 患者外周血中表达的差异，以期为AA 和低增生性MDS 的诊断提供参考。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2017 年3 月～2019 年1月收治的AA 患者和低增生性MDS 患者各48 例为研究对象，分为AA 组和低增生性MDS 组。AA组中男28 例，女20 例；年龄24～75 岁，平均（45.68±12.37）岁。低增生性MDS 组中男30 例，女18 例；年龄25～77 岁，平均（45.73±12.33）岁。两组性别、年龄等一般资料比较无显著性差异（P＞0.05），具有可比性。所有患者均符合相关血液病诊断标准，对本研究内容知情并签订知情同意书，排除伴有严重的消耗性疾病或恶性肿瘤患者。本次研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 检测方法 以美国Beckman Coulter 公司生产的Epics XL 型流式细胞仪检测两组外周血淋巴细胞亚群。检测方法：肝素抗凝管收集患者外周血3 ml，以全血/髓溶红细胞法制备标本，加单克隆抗体（FITC/PE/Percp/APC）标记细胞后测定并计算外周血T 淋 巴 细 胞 亚 群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+）、NK 淋巴细胞（CD3-CDl6+CD56+NK）及B 淋巴细胞（CDl9+B）比值。

1.3 观察指标 （1）观察两组外周血T 淋巴细胞亚群、NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布情况。（2）根据CD4+/CD8+参考值范围（1.02～1.95），分别将两组划分为比值超高组（＞1.95）、比值倒置组（≤1.02）以及比值正常组，分析NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布与CD4+/CD8+比值的关系。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS20.0 统计学软件处理。计量资料用表示，行t 检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血T 淋巴细胞亚群、NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞分布情况比较 两组外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比较无显著性差异（P＞0.05）；AA 组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例低于低增生性MDS 组，CDl9+B 淋巴细胞比例高于低增生性MDS 组（P＜0.05）。见表1。

表1 两组外周血T 淋巴细胞亚群、NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布情况比较

表1 两组外周血T 淋巴细胞亚群、NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布情况比较

组别 n CD3（+%） CD3+CD4（+%） CD3+CD8（+%） CD4+/CD8+ CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA 组4875.39±8.3743.24±8.4630.13±7.411.49±0.879.23±6.8212.63±5.67低增生性MDS 组4875.45±8.3343.31±8.4030.09±7.461.43±0.8112.44±5.2910.52±7.87

2.2 NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布与CD2+/CD8+比值的关系分析 在比值正常组中，AA 组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例低于低增生性MDS组（P＜0.05），而两组CDl9+B 细胞比例对比无显著性差异（P＞0.05）；在比值倒置组中，AA 组CDl9+B细胞比例高于低增生性MDS 组（P＜0.05），而两组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例对比无显著性差异（P＞0.05）；在比值超高组中，AA 组与低增生性MDS 组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例及CDl9+B细胞比例对比无显著性差异（P＞0.05）。见表2。

表2 NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布与CD4+／CD8+比值的关系分析（%

表2 NK 淋巴细胞及B 淋巴细胞的分布与CD4+／CD8+比值的关系分析（%

组别 n CD3-CDl6+CD56+NK（%） CDl9+B（%）AA组 比值正常组208.72±6.3211.12±6.31比值倒置组1011.26±6.8912.79±7.38比值超高组188.89±6.7910.69±6.74低增生性MDS组 比值正常组1910.59±6.8710.93±6.74比值倒置组1211.24±6.858.25±5.84比值超高组179.02±6.7310.80±6.26

3 讨论

AA 发病机制目前尚未明确，可能有多种病理机制参与其中，但体外实验以及免疫抑制治疗的疗效已证实免疫介导的造血干细胞损伤在AA 发病中发挥了重要作用[3]。低增生性MDS 是MDS 的一种特殊类型，即骨髓增生程度低下，它的临床表现与AA 的相似，均以外周血细胞计数以及骨髓象增生减少为主，且均存在免疫紊乱现象，临床鉴别诊断较难，极易发生误诊[4]。鉴于AA 和低增生性MDS 患者均存在免疫系统异常，而流式细胞术是现阶段在血液病分型诊断中发挥着重要作用的一种检测手段，本研究采用流式细胞术对淋巴细胞亚群在AA和低增生性MDS 患者外周血中的表达进行了检测。

NK 淋巴细胞近年来已被广泛应用于恶性血液疾病的治疗，它是一类在天然免疫中占据重要位置的大颗粒淋巴细胞，能够有效抑制低增生性MDS骨髓造血祖细胞。AA 与低增生性MDS 患者由于全血细胞减少可能导致其相应的大颗粒淋巴细胞低于正常参考值，而低增生性MDS 向恶性白血病转化的风险更高，可能由于大量恶性细胞的存在，故而反馈性地增加了天然免疫相关的大颗粒淋巴细胞。因此在本研究中，AA 组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例低于低增生性MDS 组（P＜0.05）。B 淋巴细胞往往与T 淋巴细胞紧密相连，AA 组CDl9+B 淋巴细胞比例高于低增生性MDS 组（P＜0.05），这可能是由于低增生性MDS 骨髓存在恶性克隆故而导致B 淋巴细胞增殖受阻。T 淋巴细胞在AA 与低增生性MDS 中起着至关重要的作用，大多数学者认为T 淋巴细胞功能异常是AA 患者主要发病机制，AA 患者更易检测到T 淋巴细胞亚群比例异常[5]。但是本研究中两组CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+比较无显著性差异（P＞0.05），这可能是由于本研究样本个体之间存在一定差异。CD4+/CD8+比值对AA 与低增生性MDS 都存在重要影响，故本研究根据其参考值范围对两组患者进行分组比较后发现，在比值正常组中，AA 组CD3-CDl6+CD56+NK 细胞比例低于低增生性MDS 组（P＜0.05），而两组CDl9+B 细胞比例对比无显著性差异（P＞0.05）；在比值倒置组中，AA 组CDl9+B 细胞比例高于低增生性MDS 组（P＜0.05），而两组CD3-CDl6+CD56+NK细胞比例对比无显著性差异（P＞0.05）；在比值超高组中，AA 组与低增生性MDS 组CD3-CDl6+CD56+NK细胞比例及CDl9+B 细胞比例对比均无显著性差异（P＞0.05）。这充分说明了在不同CD4+/CD8+比值条件下，AA 与低增生性MDS 患者NK 淋巴细胞及B淋巴细胞的差异有不同的表现。综上所述，淋巴细胞亚群可作为AA 和低增生性MDS 鉴别诊断的参考指标。