4 种消毒剂对猪源大肠杆菌和沙门氏菌的杀灭作用对比

刘新雷

（默沙东动物保健品（上海）有限公司，上海 200233）

自2018 年以来，猪病呈现新的流行趋势，原有的传染性疾病没有减少，甚至还出现了增多的趋势，更可怕的是还有新的烈性传染性疾病进入中国，给中国养猪业造成毁灭性的打击。预防和控制动物传染性疾病的发生即是一项长期而艰巨的任务，又是眼前迫在眉睫需要面对的一项挑战。动物传染病的发生和流行必须同时具备传染源、传播途径和易感动物等三个条件[1]。因此，在预防控制动物传染病时，除了降低易感动物易感性、消灭传染源之外，做好生物安全，切断病原的传播途径才是高效且成本最低的措施。生物安全成为我们当前预防传染病的主要手段，科学消毒是生物安全中最重要的环节，而消毒剂的效果又是决定消毒成败的核心因素，因此消毒剂的选择至关重要。好的消毒药可以在病原微生物进入动物体内前将其消灭，阻断传染病的传播途径，起到防控疾病的目的[2]。目前市场上销售的消毒药种类很多，其中以戊二醛类和碘制剂使用最多。

戊二醛消毒剂的作用机理：戊二醛是一种很好的蛋白质交联剂，主要通过与菌体蛋白质中的氨基相结合让其变性或者使蛋白质分子烷基化，进而起到破坏细菌表面蛋白受体的作用。戊二醛具有固定蛋白的作用，在戊二醛存在时能够造成膜蛋白交联，导致膜蛋白的构象发生改变，膜蛋白的三级结构趋于收缩。膜蛋白在交联作用的影响下膜蛋白的流动性受到约束，使蛋白功能受到影响，进而起到杀灭细菌的作用。在碱性溶液里面，戊二醛分子之间发生聚合作用，形成醛醇型不饱和聚合物，更容易与蛋白质的赖氨酸发生交联作用。大量的戊二醛分子渗入菌体内部，改变细胞膜的通透性，使细菌胞内的内容物外渗，导致细菌死亡[3]。碘类消毒剂的作用机理：碘类消毒剂中起杀菌作用的主要是游离碘和次碘酸。游离碘能够迅速穿透细胞壁，次碘酸具有很强的氧化作用，对不同病原体而言，他们的杀灭作用也不尽相同。对细菌和芽孢而言，游离碘的灭活效果要高于次碘酸，而对于病毒的杀灭效果而言，次碘酸要高于游离碘。经过初步的研究推测，碘通过多种途径跟病原体发生反应，其中主要是通过与羟基、氨基、烃基、巯基相结合导致蛋白质变性沉淀，使病原微生物灭活。

市场上销售的以戊二醛和碘制剂为主要成分的消毒剂很多，效果也有着较大的差别，本次试验选取国产戊二醛消毒剂、国产碘制剂消毒剂、进口复方戊二醛消毒剂、进口碘制剂消毒剂4 类，分别对大肠杆菌和沙门氏菌进行作用，收集试验结果，评估消毒剂对常见病原的杀灭效果。

1 试验设计

从市场上购得以下4 种消毒剂：1）国产戊二醛消毒剂；2）国产碘制剂消毒剂；3）进口复方戊二醛消毒剂；4）进口碘制剂消毒剂。按说明书要求配成现场使用的比例，敞开放置于空气中，每天分别跟大肠杆菌菌液和沙门氏菌菌液相互作用后涂于LB 平板，12 h 后观察菌落生长情况，并且与对照组进行比较，记录结果，进而评价消毒剂的效果。

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 试验细菌

猪源大肠杆菌（分离自哈尔滨周边某猪场）、猪源沙门氏菌（分离自哈尔滨周边某猪场）。

2.1.2 培养基

血琼脂培养基、LB 平板培养基、血清肉汤培养基。

2.1.3 主要试剂

蛋白胨、牛肉膏、琼脂粉、氯化钠、磷酸氢二钾、甘油、吐温-80、卵磷脂、犊牛血清、生理盐水等。

2.1.4 主要仪器

恒温培养箱、压力蒸汽灭菌器、超净工作台、37 ℃恒温摇床、冰箱、电子天平、移液器等。

2.1.5 消毒剂

国产戊二醛消毒剂、国产碘制剂消毒剂、进口复方戊二醛消毒剂、进口碘制剂消毒剂，均购自兽药大市场。

2.2 试验方法

先将在猪场采集的肛门拭子在无菌环境下划线涂于血液琼脂培养基，37 ℃温箱恒温培养18 ～24 h，革兰氏染色镜捡，分离得到大肠杆菌和沙门氏菌。分别接于LB 培养基进行单纯培养，然后挑取典型的菌落接种于血清肉汤培养基中，恒温37 ℃培养12 ～18 h 后，菌液出现浑浊之后菌落计数。然后用无菌生理盐水将菌落总数测定的细菌分别制成5×105～5×106CFU/mL 悬液备用。

4 种消毒药分别为进口复方戊二醛消毒剂，进口碘与磷酸合剂，国产戊二醛与季铵盐合剂，国产碘制剂。按使用说明书中的比例（表1）稀释成溶液并分组编号，敞口置于环境中，对照组不加何消毒剂，用生理盐水代替。

分组配制消毒稀释液完成后，每组各取消毒溶液500 μL 与稀释好的大肠杆菌菌液500 μL 进行混合作用10 min，然后均匀涂于LB 平板上放置在37 ℃培养箱内进行培养，对照组500 μL 大肠杆菌菌液与500 μL 生理盐水混合作用10 min后涂于LB 平板上，放入温箱培养。按上述同样方法再将各分组溶液与稀释好的沙门氏菌进行作用，然后涂板进行培养，对照组500 μL 沙门氏菌菌液与500 μL 生理盐水混合作用10 min 后涂于LB 平板上，放入温箱培养。12 h 后观察平板细菌生长情况。所配4 组稀释液敞口放置7 d，每天重复上述操作。

表1 消毒剂溶液配制

3 试验结果

每天对接种过细菌的平板进行观察和拍照记录，所得到的试验结果见表2 和表3。

从表2 和表3 中可以看出，国产戊二醛组在配制成溶液后仅第1 天和第2 天沙门氏菌长菌略少于对照组，第3 天以后跟对照组没有差别。国产碘制剂仅在配置完成后当天作用的沙门氏菌长菌略少于对照组，之后就跟对照组没有差别。进口碘制剂和进口复方戊二醛，自配制完成后第1 天到第7 天均没有见到长菌。

4 讨论

通过上述试验可以初步得出以下结论，市场上所购买的国产消毒剂无论是戊二醛还是季铵盐类，在刚刚配制好之后对沙门氏菌有不是很明显地杀灭效果，对大肠杆菌没有效果。放置超过24 h 后对大肠杆菌和沙门氏菌都没有任何杀灭效果。进口复方戊二醛消毒剂和进口含碘消毒剂在配制成稀释液之后在环境中放置，在7 d 之内均可以保证对大肠杆菌和沙门氏菌有完全杀灭作用。

表2 不同消毒剂对大肠杆菌杀灭效果（与对照组相比）

表3 不同消毒剂对沙门氏菌杀灭效果（与对照组相比）

图1 杀菌效果

近日各地猪价开始上涨，养猪业的又一个暴利时代已经来临，眼下只要有猪就能赚取暴利，因此保证自己的猪场安全才是重中之重，而做好生物安全又是目前防控重大疫情的唯一有效手段。消毒是生物安全体系中非常关键的一环，也只有选择有效的消毒剂才能保证消毒环节起到真正的作用，告别过去形式化、走过程的习惯，做到真正的有效消毒，才是生存下去高盈利的王道。

因此建议大家在这关乎生死的时刻选择消毒产品时一定要选择大品牌且是已经认证过的有效产品，避免出现“选择不对，努力白费”的情况。