不同剂型桂枝茯苓丸的溶出度比较*

张佳欢 李智慧 石森林 葛卫红 吴素香

浙江中医药大学 浙江 杭州 311402

桂枝茯苓丸由桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁组成，桂枝为君药，赤芍和牡丹皮等为臣药，主要有效成分分别为肉桂酸、芍药苷和丹皮酚等，其极性差别较大，溶解性能不同。丸剂是一种传统剂型，多为复方，成分复杂，体外溶出研究对其质量评价意义重大。本文测定了桂枝茯苓方大蜜丸、小蜜丸、水泛丸、浓缩丸和蜡丸的体外溶出度，采用相似因子f2对5种丸剂的溶出曲线进行比较，为桂枝茯苓丸的质量控制和评价提供了依据。

1 材料

1.1 仪器：高效液相色谱仪（德国Kanuer，LUMTECH，检测器 UV DETECTOR K-2501）；Hypersol C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm，大连依利特）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP-211D分析电子天平（十万分之一，德国Sartorius公司）；ZRS-6G型智能释放试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；DK-S24电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）；DFY-400摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）。

1.2 药品及试剂：肉桂酸对照品（批号：110786-200503）购自中国药品生物制品检定所；芍药苷对照品（批号：YY20100505），丹皮酚对照品（批号：20110422）均购自上海源叶生物科技有限公司；桂枝茯苓丸均为实验室自制（批号如下：大蜜丸：1203201，小蜜丸：1203202、水泛丸：1203203，浓缩丸：120225、120318、120426，蜡丸：1203205）；甲醇、乙腈为色谱纯；纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件：色谱柱为Hypersol C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为乙腈，B为0.1%磷酸水溶液；梯度洗脱（0～17min，14%A～45%A；17～24min，45%A～44%A；24～26min，44%A～14%A)，流速为 1.0ml/min，柱温30℃；检测波长在0～17min时为230nm，17～26min时为274nm；进样量20μl。上述色谱条件下，桂枝茯苓丸中肉桂酸、丹皮酚以及芍药苷色谱成分峰与其他成分色谱峰分离度良好，见图1。

图1 桂枝茯苓丸HPLC色谱图

2.2 对照品溶液制备：精密称取肉桂酸、芍药苷及丹皮酚对照品适量，置于棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，分别制成肉桂酸0.5mg/ml、芍药苷2.5mg/ml及丹皮酚2.5mg/ml的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备：按照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0931溶出度与释放度测定法第二法（桨法），溶出条件为pH1.2的溶出介质900ml，温度37±0.5℃，转速100r/min。取桂枝茯苓浓缩丸6份，分别投入6个溶出杯内，立即启动并开始计时，在规定时间点吸取溶液适量，经0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液制备：根据桂枝茯苓丸处方比例，按“2.3”方法制成缺桂枝、赤芍、牡丹皮的阴性对照溶液。

2.5 专属性实验：取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液各20μl，进样，按照“2.1项”下色谱条件进行测定，结果表明在肉桂酸、芍药苷以及丹皮酚的保留时间处，阴性对照无干扰，说明专属性良好。

2.6 线性关系考察：精密吸取混合对照品溶液适量，分别置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成一系列浓度的混合对照品溶液，肉桂酸0.0005、0.0025、0.005、0.025、0.05、0.06mg/ml；芍 药 苷0.0075、0.0375、0.075、0.375、0.75、0.9mg/ml；丹皮酚0.0075、0.0375、0.075、0.375、0.75、0.9mg/ml。按“2.1”下色谱条件分别进样20μl，以对照品的浓度X（mg/ml）为横坐标，对照品色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果得肉桂酸标准曲线方程Y=215.06X+39.87，r=0.9994，芍药苷标准曲线方程Y=94.25X+40.63，r=0.9996，丹皮酚标准曲线方程Y=27.20X+19.64，r=0.9997。上述色谱条件下，肉桂酸 0.0005～0.06mg/ml，芍药苷0.0075～0.9mg/ml，丹皮酚0.0075～0.9mg/ml范围内与峰面积呈良好的线性相关性。

2.7 体外溶出试验：取桂枝茯苓丸，按照2015年版《中华人民共和国药典》四部通则0931溶出度与释放度测定法第二法（桨法），pH1.2的溶出介质900ml，转速为100r/min，温度为37±0.5℃，依法测定。分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12h取样5.0ml（同时补充等温等量溶出介质)，离心，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液20μl进样测定，计算累积溶出度。

2.8 不同丸剂的体外溶出比较：分别测定不同丸剂在pH1.2溶出介质中的溶出度，以时间为横坐标，累积溶出度为纵坐标，绘制溶出曲线。结果如图2、图3。2h内溶出速率较快的是浓缩丸、水泛丸和小蜜丸，浓缩丸＞水泛丸＞小蜜丸，2～4h累积溶出度增值较大的是大蜜丸，而蜡丸释放速率及最终累积溶出度都相对较小。

2.9 溶出曲线相似因子拟合及溶出差异比较：为更精确地对不同丸剂的溶出度进行比较，本文采用相似因子法对各溶出曲线进行分析。相似因子法基本公式：

f2为相似因子，如果50≤f2≤100，表示两制剂的溶出度相似，越接近100，相似程度越高，无显著性差异。其中R t，Tt分别为各时间点参比制剂和供试制剂的溶出度，n为测试点数。根据公式，计算浓缩丸、大蜜丸、小蜜丸、水泛丸及蜡丸的f2。结果见表1，由表可得，以浓缩丸为参比制剂，水泛丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚的相似因子f2均＞50，表明水泛丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚的溶出度与浓缩丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚基本相似。以大蜜丸为参比制剂，小蜜丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚的相似因子f2均＞50，表明小蜜丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚的溶出度与大蜜丸中肉桂酸、芍药苷和丹皮酚基本相似。因此，可初步认定水泛丸和浓缩丸的溶出度基本相似；大蜜丸和小蜜丸中各指标成分溶出度基本相似；而大蜜丸、小蜜丸和蜡丸中各指标成分与浓缩丸各指标成分的溶出度有较大差异。

表1 桂枝茯苓丸相似因子f2拟合结果

3 讨论

桂枝茯苓丸溶出曲线中10h后测定丹皮酚的累积释放度有所降低，分析原因可能是因为丹皮酚的不稳定性所致[1]。此外，各丸剂均有缓释特征，小蜜丸、水泛丸及浓缩丸前期的体外释放速度较快，2h后开始缓慢释放；而大蜜丸、蜡丸在2～4h时间段的释放速率达到最大。结果显示大蜜丸能够持续较长时间发挥药效，但蜡丸的累积释放度相对最低，分析其原因，可能是因为辅料石蜡为水不溶性物质，将药材包裹后有效成分的溶出比较困难。一般来说，体外溶出度是评价不同品种药品质量的重要依据，食品药品监督管理局（FDA）推荐使用相似因子法评价试验药品与对照药品间的溶出度差异，且认定试验药品的相似因子f2＞50为等效[2-3]。由实验结果发现5种不同的剂型丸剂的指标成分溶出行为并不一致，存在显著性差异，这也表明了桂枝茯苓丸剂型的改变会影响有效成分的溶出行为，继而影响药物疗效。