妊娠期糖尿病胎盘PPAR水平及其对新生儿体重、体脂影响的研究

李 娜

(广西柳州市柳铁中心医院妇产科，柳州市 545007)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是指妊娠期首次发生或发现的葡萄糖不耐受或糖耐量异常，是糖尿病的一个独立类型。大样本流行病学调查发现，GDM会增加巨大儿、早产、新生儿产伤等风险，增加难产及剖宫产率[1]。过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor，PPAR)是人体重要的代谢转录因子和脂肪生成因子，在糖、脂代谢中发挥着重要的调控作用，并与体内胰岛素抵抗密切相关[2]。在GDM病程中PPAR对胎儿影响的研究较少，本研究探讨GDM孕妇胎盘PPAR水平对新生儿体重、体脂的影响，报告如下。

1 对象与方法

1.1 临床资料 选取2016年10月至2017年10月在我院妇产科进行常规产检的孕妇292例，于孕24～28周进行葡萄糖耐量试验(口服葡萄糖75 g)，空腹血糖值≥7.0 mmol/L，和/或服糖后2 h血糖值≥11.1 mmol/L诊断为GDM[3]。其中GDM孕妇86例(GDM组)，非GDM孕妇206例(对照组)。纳入标准：(1)妊娠前血糖正常；(2)单胎妊娠，并完整随访至分娩；(3)完成新生儿各项体格测量；(4)孕妇及家属知情同意并签署同意书，同意提供胎盘标本。两组孕妇年龄、孕前BMI、分娩时孕周、孕次比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。

表1 两组孕妇临床资料比较 (x±s)

1.2 新生儿体格测量 新生儿娩出后测量体重(g)、身长(cm)、总脂肪质量(kg)。BMI=体重(kg)/身高(m)2，体脂率=1.2×BMI+0.23×年龄-5.4-10.8×性别(男1，女0)。 新生儿体重≥4 000 g诊断为巨大儿[4]。

1.3 PPAR检测

1.3.1 胎盘标本的处理 娩出胎盘后，在胎盘中央无出血点、无钙化处快速剪取胎盘组织约1 cm×1 cm×1 cm，用生理盐水清洗，干净纱布吸干水分后放入液氮中保存[5]。

1.3.2 胎盘RNA提取 从液氮中取出胎盘组织，剪取约100 mg，倒入液氮研磨成粉末，严格按照说明书步骤操作，应用RNAiso for Small RNA 进行Small RNA提取。最后加入50 μL无RNA酶水溶解RNA，取1 μL样品用分光光度计测量RNA浓度，RNA溶液于-80 ℃冷冻保存。

1.3.3 逆转-录聚合酶链反应(RT-PCR) 用RNA抽提试剂盒和cDNA逆转录试剂盒(日本TaKaRa@公司提供)提取RNA并合成cDNA。设计合成PPAR引物，上游5′-GGGATCAGCTCCGTGGATCT-3′，下游5′-TGCACTTTGGTACTCTTGAAGTT-3′，以GATPDH为内参照。引物为：上游5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′，用ABI 750 扩增，利用2-ΔΔCT计算数据，标本均重复3次。

1.3.4 PPAR水平检测 提取胎盘组织总蛋白，10% SDS-PAGE胶分离蛋白，以4 ℃、100 V、60 min条件，将蛋白转到PVDF膜(美国MILLIPORE公司，批号：KOEA238C)上，PPAR抗体(美国Proteintech公司，1 ∶1 000)4 ℃过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗(北京中彬金桥生物技术有限公司，批号：ZB-2301，1 ∶5 000)室温孵育2 h，以GAPDH(上海康成生物科技有限公司，批号：KC-5G4)为内参，ECL发光试剂盒(上海炎熙生物科技有限公司)检测蛋白表达。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。计量资料用均数±标准差(x±s)表示，组间比较用t检验；采用Pearson进行相关性分析；计数资料用例数(n)或百分率(%)表示，组间比较用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 新生儿体格比较 GDM组新生儿体重、BMI、总脂质量和体脂含量均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。GDM组巨大儿9例(10.47%)，对照组巨大儿10例(4.85%)，两组比较差异有统计学意义(χ2=4.264，P<0.05)。

表2 两组新生儿体格比较 (x±s)

2.2 胎盘PPAP mRNA、PPAP蛋白比较 GDM组胎盘PPAP mRNA、PPAP蛋白相对表达明显低于对照组(P<0.05)。见表3、图1。

表3 两组孕妇胎盘PPAR mRNA及蛋白比较 (x±s)

图1 Western blot检测图

2.3 相关分析 将胎盘PPAR mRNA及蛋白相对表达量与新生儿体脂含量进行Pearson相关分析，结果显示：GDM组PPAR mRNA及蛋白相对表达量与新生儿体脂含量呈负相关(r=-0.573和-0.691，P<0.05)。

3 讨 论

我国孕产妇GDM发病率为19.7%[6]，并有逐年升高之趋势。GDM是最常见的妊娠合并症之一，如得不到科学合理的处置，可发生巨大儿、胎儿畸形、新生儿低血糖及增加子代糖尿病的风险，难产及剖宫产率增加，对妊娠结局及母婴健康造成严重影响[7]。

GDM的发病机制至今未明确，一般认为是机体对胰岛素敏感性降低、胰岛素抵抗及胰岛素相对不足而引起糖脂代谢紊乱。过去数十年认为GDM的发病机理以糖代谢为中心，即“糖代谢中心论”。而最近的研究表明脂代谢异常、分布异常、过度堆积是胰岛素抵抗的主要原因，即“脂代谢中心论”[8]。现已确认脂肪组织不仅是能量储存器官，还是内分泌器官，能产生多种蛋白质激素和细胞炎性因子，参与调节机体的能量代谢，其中包括脂联素、瘦素对胰岛素敏感性的正向调控，抵抗素、白介素-6、肿瘤坏死因子-α等其他脂肪因子的负向调控，而且这些脂肪因子的表达大都受PPAR的调控[9]。临床观察发现，GDM孕妇的血清甘油三酯水平明显升高，而甘油三酯水平与新生儿出生体重呈正相关[10]。本研究结果显示，GDM组新生儿体重为(4 108.9±544.2)g、BMI(17.84±1.63)kg/m2、总脂质量(0.67±0.21)kg和体脂含量(18.50±3.28)%，均高于对照组(P<0.05)。GDM组巨大儿发生率为10.47%，高于对照组的4.85%，差异有统计学意义(P<0.05)。孕妇血清中的甘油三酯虽不能穿过胎盘进入胎儿体内，但可被胎盘中的脂蛋白酶水解成游离脂肪酸进入胎儿体内，因此，孕妇甘油三酯水平越高则进入胎儿体内的游离脂肪酸越多。游离脂肪酸具有抵抗胰岛素的作用，如果胎儿胰岛素抵抗作用增强，则氨基酸转移系统活化加速，促进蛋白质合成，脂肪分解减慢，导致脂肪在胎儿体内沉积而形成巨大儿[11]。

PPARs有PPARα、PPARβ/δ、PPARγ三个亚型。吕妍等[12]的研究表明，GDM孕妇腹直肌及腹部皮下脂肪组织中PPARβ mRNA和蛋白表达均显著低于非GDM孕妇，且与稳态模型胰岛素抵抗指数、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平均呈显著负相关(均P<0.01)，与高密度脂蛋白胆固醇呈显著正相关(P<0.01)，表明PPARβ表达下降导致妊娠期糖尿病胰岛素抵抗，引起脂代谢紊乱。血糖升高引起PPARβ表达减少，进一步加重胰岛素抵抗及脂代谢紊乱，导致恶性循环[13]。Holdsworth-Carson等[14]研究发现，GDM孕妇胎盘上PPAR mRNA及其蛋白的表达明显低于非GDM孕妇，提示PPAR 与GDM有着明显的相关性。马蓉等[5]研究发现，GDM孕妇胎盘组织中PPARγ mRNA 表达和蛋白水平明显降低，且与胰岛素水平呈负相关。本研究结果亦表明，GDM组胎盘PPAP mRNA及蛋白相对表达量分别为(0.433±0.098)、(0.892±0.112)，明显低于对照组胎盘的(1.132±0.101)、(1.043±0.124)，且胎盘PPAP mRNA及蛋白相对表达量与新生儿体脂含量呈负相关(r=-0.573和-0.691，P<0.05)。马蓉等[5]研究还发现，APN是GDM的保护因子，GDM孕妇母血APN水平与孕晚期体重及体重指数呈正相关，胎盘APN mRNA与PPARγ mRNA表达及脐血APN水平呈正相关。GDM孕妇胎盘APN mRNA水平明显降低，IL-6水平明显升高，APN mRNA和空腹胰岛素水平、IL-6 mRNA和蛋白水平表达变化均呈负相关。据此推断GDM孕妇之胎盘组织中APN表达下调，PPARγ表达受抑制，局部炎症反应增加，胰岛素敏感性降低。胎盘局部葡萄糖脂代谢紊乱可能会透过胎盘，影响胎儿的生长发育[2，5，15]。

有研究[2]表明，PPAR在妊娠全过程中对胎儿的生长发育具有重要的调控作用。在妊娠早期，PPARγ表达主要在胎盘中具有侵蚀能力的合体滋养层细胞；妊娠中期则主要表达在固定绒毛柱和细胞滋养层；妊娠晚期则启动分娩过程。

本研究结果表明GDM孕妇的新生儿体重、总脂质量和体脂含量均高于非GDM孕妇。GDM组胎盘PPAP mRNA及蛋白明显降低, 胎盘PPAP mRNA及蛋白相对表达量与新生儿体脂含量呈负相关。认为PPARγ激动剂(如噻唑烷二酮类药物激活剂)可以提高胎盘局部及全身循环脂联素水平，可作为GDM治疗的新思路。