HPLC法测定辛芳鼻炎胶囊中欧前胡素的含量

宋 纹，陈博知

(天津宏仁堂药业有限公司，天津 300385)

辛芳鼻炎胶囊是由辛夷、白芷、细辛、柴胡等15味中药组成的复方制剂，具有宣肺通窍，发表散风，清热解毒的功效，临床上主要用于治疗慢性鼻炎，鼻窦炎，过敏性鼻炎[1]。方中白芷宣通鼻窍，解表散寒，祛风止痛，为辛芳鼻炎胶囊的君药之一，而欧前胡素为白芷最具代表性的成分[2]。本试验采用HPLC法测定辛芳鼻炎胶囊中欧前胡素的含量，为建立辛芳鼻炎胶囊的质量标准和生产工艺的完善提供参考依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津(SHIMADZU)LC-20A(方法学)、安捷伦(Aglient)1200 Series(耐用性)；梅特勒托利多(METTLE TOLEDO)XS205DU电子天平；AS超声波清洗机(AS20500A)。欧前胡素对照品由中国食品药品检定研究院提供(纯度为99.6%，批号110826-201616，供含量测定用)。辛芳鼻炎胶囊(天津宏仁堂药业有限公司，批号分别为H09005、H09001-1、H09001-2、H09003)。甲醇、乙腈为色谱纯(Merk公司)，乙醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，水为Milli-Q超纯水。

2 方法与结果

2.1色谱条件 方法学采用phenomenex Luna色谱柱，耐用性采用Aglient TC与ACCHROM Unitary 色谱柱，以上均为C18填充剂(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以乙腈-水(46∶54)为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长为300 nm；柱温：30～35 ℃；进样量均为10 μl。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液的制备 精密称定欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1 ml含10 μg的溶液，即得。

2.2.2供试品溶液的制备 取“装量差异”项下的辛芳鼻炎胶囊内容物适量，混匀，取约2 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备 按处方配比，取白芷药材以外的各味药材，制成辛芳鼻炎胶囊阴性样品，再按“2.2.2 ”项下方法制备阴性对照溶液。

2.3阴性对照试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析，结果显示阴性样品无干扰，供试品主峰保留时间与对照品主峰的保留时间基本一致。结果见图1。

2.4标准曲线的制备 取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含120.815 μg的对照品储备液，精密量取3、5、10、15和20 ml的储备液分别稀释至100 ml量瓶中，使其欧前胡素的浓度梯度分别为3.624 4、6.040 7、12.081 5、18.122 2和24.163 0 μg/ml，分别精密吸取上述各溶液10 μl，测定出各自的峰面积，横坐标为对照品浓度(μg/ml)，纵坐标为峰面积，求得线性回归方程：Y=24 870.76X-198.94(r=1.00)。结果表明浓度在3.624 4～24.163 0 μg/ml范围内欧前胡素呈现良好的线性关系。

2.5重复性试验 取辛芳鼻炎胶囊(批号H09005)“装量差异”项下的内容物，混匀后精密称定2 g，共6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，测定每份供试品中欧前胡素的含量。其平均值为0.106 8 mg/g，RSD为0.61%，表明该方法具有较好的重复性。

2.6精密度试验 精密吸取“2.5”项下供试品溶液3，连续进样6次，测定其峰面积RSD为0.42%。表明HPLC仪器具有较好的精密度。

1.欧前胡素

2.7稳定性试验 将“2.5”项下供试品溶液1分别在0、4、8、12和24 h 5个不同的时间点进样，测定各自欧前胡素峰面积，RSD值为1.78%。试验表明24 h内供试品溶液稳定。

2.8回收率试验 精密称定“装量差异”项下(批号H09005)样品1 g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入2.175 2 μg/ml的对照品溶液各50 ml，按“2.2.2”项下方法制得加样回收供试品溶液，通过测得结果计算回收率。结果回收率平均值为100.31%，RSD为0.81%。见表1。

表1 加样回收试验测定结果(n=6)

2.9样品测定 对不同批次的样品进行了欧前胡素的含量测定，平均值为0.027 4 mg/粒，RSD为1.93%。结果见表2。

表2 不同批次样品测定结果(n=2)

3 讨论

3.1提取条件的考查 本试验设计分别对样品的提取溶剂、提取方式、提取时间、提取溶剂用量进行了考查，采用不同浓度的甲醇、乙醇等溶剂进行回流或超声提取。结果显示，用甲醇的提取效率最高；30 min已基本能提取完全；超声处理方式与加热回流方式的提取效率相差不大，故选用操作相对简单、方便的超声处理作为提取方式；溶剂用量50 ml的测定值最高，当选用50 ml作为样品提取溶剂量时发现供试品中欧前胡素的峰面积较低，不利于积分，故对溶液进行了适当的浓缩，对比浓缩前后供试品溶液的峰面积，二者成相应比例，证明浓缩未造成损失。

3.2流动相的选择 参考大量文献[3-13]及《中国药典》2015年版一部[14]有关该成分含量的测定方法对流动相进行摸索考查，分别采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸、乙腈-0.2%冰醋酸等组分按不同比例进样，结果显示乙腈-水(46∶54)时，各峰分离效果最好且峰形对称，无其他成分干扰，且出峰时间比较适中。同时，发现有文献[15]虽可同时测定辛芳鼻炎胶囊中的木兰脂素和欧前胡素，但其包含杂峰，且所选波长也不是最大吸收波长，故未采用。

3.3耐用性试验

3.3.1不同色谱柱考查 以同一仪器(岛津)分别采用phenomenex Luna C18(2) (250 mm×4.6 mm,5 μm)；Aglient TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5 μm)；ACCHROM Unitary C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)三个品牌的色谱柱，测定样品中欧前胡素的含量，结果RSD为2.42%，表明不同色谱柱对含量测定的结果无显著影响。

3.3.2不同仪器考查 以同一色谱柱(phenomenon)分别采用岛津 LC-20A和Aglient 1200高效液相色谱仪，测定样品中欧前胡素的含量，结果RAD为0.46%，表明不同仪器对含量测定的结果无显著影响。

3.4在目前环境污染比较严重的条件下，辛芳鼻炎胶囊作为治疗鼻炎、过敏性鼻炎的药物，在市场上的使用更加广泛，对于该产品的质量把控也尤为重要，法规中该产品的质量标准目前只有白芷的鉴别方法。本试验采用HPLC法，对辛芳鼻炎胶囊中欧前胡素的含量进行测定，并完成了方法学的考查与研究。结果表明该方法的重现性好，灵敏度高，可对辛芳鼻炎胶囊的质量进行有效的控制，为完善提高该品种的质控标准提供了良好的参考与借鉴。