血清CXCL16、CCK-18在胆石症患者中的表达水平及临床意义

胆石症是胃肠道常见的疾病之一，可由年龄、怀孕、肥胖、糖尿病、血脂异常等因素共同作用引起[1-2]。胆石症可分为单纯性胆石症和复杂性胆石症，复杂性胆石症患者的Calot三角充血明显，常规手术治疗时易出血，并可使医源性胆道损伤的发生率升高，因此明确诊断胆石症至关重要[3]。目前，临床诊断胆石症的常规方法为实验室检查及超声检查[4-5]，但有研究报道其诊断复杂性胆石症的准确度较低[6]。因此，临床急需更加敏感、准确的标志物以明确诊断复杂性胆石症。

有研究表明，血清学指标在诊断胆石症方面具有较高的价值[7]。CXC趋化因子配体16(CXCL16)是CXCR16的配体，能抑制氧化的低密度脂蛋白降解。胆囊收缩素-18(CCK-18)是促进胆囊收缩的生理激素之一，能直接影响胆囊收缩。氧化的低密度脂蛋白积聚及胆囊收缩异常均与胆石症的发生、发展密切相关。本研究通过酶联免疫吸附法检测胆石症患者血清CXCL16和CCK-18的表达水平，分析两者诊断复杂性胆石症的效能，以期为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年3月至2018年3月西安医学院附属医院收治的63例胆石症患者作为胆石症组，所有患者均经超声及CT检查确诊。纳入标准：(1)经超声及CT检查确诊为胆囊结石，伴或不伴继发性胆总管结石；(2)不伴梗阻性黄疸。排除标准：(1)伴有胆道肿瘤；(2)合并胆道感染；(3)合并急性或慢性病毒性肝炎；(4)入组前已接受过治疗。另选取40例同期健康体检者作为对照组。胆石症组中男性25例，女性38例，年龄27～62岁，平均年龄(45.27±6.04)岁，体质指数(BMI)为(25.07±3.55)kg/m2；对照组中男性17例，女性23例，年龄24～55岁，平均年龄(44.38±6.13)岁，BMI为(23.78±3.14)kg/m2。两组性别、年龄、BMI的差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。所有受试者均签署知情同意书。本研究获得医院医学伦理委员会批准。

1.2 观察指标

收集受试者的一般资料，包括性别、年龄、心率、BMI、高血压史、糖尿病史、空腹血糖、既往手术史等。所有受试者禁食12 h，清晨空腹状态下采用肝脏B超检查患者肝硬化及腹腔积液情况。抽取受试者外周静脉血5 mL，置于血清管中，室温静置约1 h，待血液自然凝固后，3 500 r/min低温离心15 min，分离上层血清，置于-80 ℃冰箱待测。采用AU5800全自动生物化学分析仪(购自美国贝克曼库尔特公司)检测血清中尿素氮、血尿酸、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(采用贝克曼库尔特公司的配套试剂)；采用己糖激酶法检测患者的空腹血糖水平；采用酶联免疫吸附法检测血清CXCL16水平(试剂盒购自上海康朗生物科技有限公司，批号M22616226)及CCK-18水平(试剂盒购自日本同仁化学有限公司，批号M21916219)。操作严格按照仪器及试剂盒说明书进行。

1.3 胆石症患者亚组划分

63例胆石症患者分为单纯性胆石症组(28例)和复杂性胆石症组(35例)。复杂性胆石症的诊断标准如下：(1)胆囊严重纤维化或Calot三角粘连、瘢痕化，脂肪堆积，分离困难；(2)Calot前三角区及后三角区的界限不清，难以剥离；(3)胆囊严重炎性水肿或萎缩。符合其中1项可诊断为复杂性胆石症[6]。本研究将伴胆总管结石患者划分为复杂性胆石症组。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组的基线资料比较

两组的性别、年龄、心率、BMI、高血压史、糖尿病史、空腹血糖、血清尿素氮及血清尿酸相比较，差异均无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1 两组基线资料的比较

2.2 两组的血清CXCL16、CCK-18表达水平比较

胆石症组患者血清CXCL16及CCK-18的表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组的血清CXCL16、CCK-18表达水平比较()

2.3 复杂性胆石症组与单纯性胆石症组的血清CXCL16、CCK-18表达水平比较

复杂性胆石症组患者血清CXCL16及CCK-18的表达水平明显高于单纯性胆石症组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.4 影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的单因素分析

单因素分析显示，两组患者在既往手术史、TC、HDL-C方面的差异无统计学意义(P>0.05)。与单纯性胆石症组相比，复杂性胆石症组中有肝硬化、腹腔积液的患者比例较高，且TG、LDL-C水平较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表3 两组的血清CXCL16、CCK-18表达水平比较()

2.5 影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的多因素分析

将单因素分析有统计学意义的因素，包括肝硬化、腹腔积液、TG、LDL-C、CXCL16及CCK-18纳入多因素Logistic回归分析。赋值情况如下，肝硬化(有为1，无为0)；腹腔积液(有为1，无为0)；TG(≥2.34 mmol/L为1，<2.34 mmol/L为0)；LDL-C(≥2.76 mmol/L为1，<2.76 mmol/L为0)；CXCL16(≥3.76 ng/mL为1，<3.76 ng/mL为0)；CCK-18(≥45.38 ng/L为1，<45.38 ng/L为0)；胆石症严重程度(复杂性胆石症为1，单纯性胆石症为0)。结果显示肝硬化、腹腔积液、LDL-C、CXCL16、CCK-8与单纯性胆石症进展为复杂性胆石症密切相关。见表5。

表4 影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的单因素分析

表5 影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的多因素分析

2.6 血清CXCL16、CCK-18诊断复杂性胆石症的效能分析

单指标诊断复杂性胆石症时，CXCL16诊断的AUC大于CCK-18(Z=0.036，P=0.972)。CXCL16与CCK-18联合检测诊断复杂性胆石症的模型为：F=-13.368+2.171CXCL16+0.123CCK-18。CXCL16与CCK-18联合检测诊断复杂性胆石症的效能高于两者单独诊断(Z=2.152，P=0.031；Z=2.476，P=0.013)。见表6、图1。

表6 血清CXCL16、CCK-18单独及联合检测诊断复杂性胆石症的效能分析

注：“—”表示无数据

图1血清CXCL16、CCK-18单独及联合检测诊断复杂性胆石症的ROC曲线

3 讨论

CXCL16是一种膜结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸和氧化型低密度脂蛋白的清除因子结合，抑制氧化的低密度脂蛋白降解，诱发胆囊结石[8-9]。相关研究指出，CXCL16在胆石症患者中的表达水平升高，且与患者的临床病理特征存在联系[10]。CCK-18是由十二指肠和空肠黏膜Ⅰ细胞释放的一种调节胆囊收缩运动的肽类激素，能与胆囊平滑肌上的受体结合诱导胆囊排空，当CCK-18分泌增加时，胆囊的收缩功能受到抑制，进而引发胆石症[11]。以往研究表明，CCK-18在胆石症患者中的表达水平明显高于正常人群，提示其与胆石症的发生关系密切[12]。本研究通过检测胆石症患者血清CXCL16、CCK-18的表达水平，分析两者与胆石症严重程度的关系。

本研究结果显示，胆石症患者血清CXCL16及CCK-18的表达水平明显高于对照组，结果与以往研究相符[6,8]，提示CXCL16及CCK-18可能与胆石症的发生存在联系。本研究进一步发现，复杂性胆石症患者的血清CXCL16及CCL-18表达水平高于单纯性胆石症患者，提示血清CXCL16及CCK-18可能与单纯性胆石症进展为复杂性胆石症有关。此外，本研究采用单因素及多因素Logistic回归方法分析影响单纯性胆石症进展为复杂性胆石症的相关因素，结果显示肝硬化、腹腔积液、LDL-C、CXCL16、CCK-8与单纯性胆石症进展为复杂性胆石症密切相关。有研究报道，肝硬化患者的胃肠激素水平下降，可促进胆石症进展[13-14]。腹腔积液易导致患者胆囊壁增厚甚至纤维化，进一步加重胆囊结石严重程度[15]。CXCL16通过抑制LDL-C的代谢，导致脂质代谢物在胆囊积聚，形成结石。CCK-18水平升高，可使胰腺消化酶分泌受到抑制，促进胆石症进展。本研究结果显示，血清CXCL16、CCK-18单独诊断复杂性胆石症的AUC均大于0.8，表明血清CXCL16、CCK-18单独诊断复杂性胆石症的效能均较高。此外，本研究显示血清CXCL16与CCK-18联合检测诊断复杂性胆石症的AUC为0.950，显著大于单指标检测，表明两者联合检测可提高诊断复杂性胆石症的效能。

综上所述，胆石症患者的血清CXCL16及CCK-18表达水平明显升高，两者均参与胆石症的进展过程，检测血清CXCL16及CCK-18的表达水平有助于诊断复杂性胆石症。