骆越壮酒抗疲劳及耐缺氧实验研究

李耀燕，张 曼，李 彤*，白燕远，谢阳姣，闫国跃

(1.广西中医药大学 瑶医药学院，广西 南宁 530001；2.广西壮瑶医药与医养结合人才小高地，广西 南宁 530001)

疲劳是指机体生理过程不能持续其机能在一特定水平或各器官不能维持预定的运动强度[1]，是机体复杂的生理生化变化过程，疲劳的产生标志着机体原有工作能力暂时下降，或是机体发展到伤病状态的先兆[2-3]。由于现代社会环境、饮食、生活节奏加快、竞争压力大等原因，使人体更容易出现疲劳状态。

现有研究发现一些中草药及一些天然植物中含有抗疲劳、抗氧化的成分。如黄精、枸杞子、益智仁、阿胶、大枣都是较好的补益之品，具有很好的抗疲劳、抗氧化，或两者兼有的作用[4-9]。骆越保健方是广西武鸣县阮氏家族祖传秘方，含多种中药及壮、瑶药，临床发现，骆越保健方对亚健康失眠男性睡眠生活质量及性功能有正干预效应[10]。本实验探讨以骆越保健方泡制的药酒——骆越壮酒对小鼠抗疲劳及耐缺氧作用的影响。

1 材料

1.1 实验动物

SPF级昆明种小鼠160只，雌雄各半，体质量20～22 g。购于甘肃中医药大学科研实验中心动物培育中心，许可证号：SYXK(甘)2015-0003。

1.2 药物与试剂

骆越壮酒及其溶媒体白酒(广西武鸣骆越壮酒有限公司)；阳性对照品红景天(北京索莱宝科技有限公司，10338-51-9)；全血乳酸检测试剂盒(南京建成生物工程研究所A019-1)；血尿素检测试剂盒(南京建成生物工程研究所C013-2)；乳酸脱氢酶检测试剂盒(南京建成生物工程研究所A020-2)；血红蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所A059)。

1.3 仪器与设备

紫外分光光度计(日本岛津，UV-2401PC)；电热恒温水槽(金坛成辉仪器厂，HH-W600)；电子天平(日本岛津，ER-120A)。

2 方法

2.1 动物筛选及给药

实验动物试验前于室温环境下，自由饮水，常规饲料饲养1周适应环境，进行旷场实验，筛选行为学评分相近的小鼠，分组如下。

抗疲劳实验分为：①正常对照组；②溶媒对照组；③低剂量骆越壮酒组；④中剂量骆越壮酒组；⑤高剂量骆越壮酒组；⑥红景天阳性对照组。

耐缺氧实验分为：①正常对照组；②溶媒对照组；③低剂量骆越壮酒组；④中剂量骆越壮酒组；⑤高剂量骆越壮酒组；⑥红景天阳性对照组。

亚硝酸钠毒性实验分为：①正常对照组；②低剂量骆越壮酒组；③中剂量骆越壮酒组；④高剂量骆越壮酒组。

所有动物于每日晨起8时定时灌胃1次，灌胃28 d后进行各项试验。骆越壮酒组的剂量以毒性试验为参考选定。灌胃体积以骆越壮酒高剂量组灌胃体积为标准，各组不足部分以生理盐水补充。各组给药剂量如下，正常对照组：灌胃与高剂量等体积生理盐水；溶媒对照组：灌胃与中剂量等体积的溶媒(骆越壮酒的溶媒白酒)；低剂量骆越壮酒组：13.39 mL/kg；中剂量骆越壮酒组：21.81 mL/kg；高剂量骆越壮酒组：35.52 mL/kg；红景天阳性对照组：按干品1 g/kg·wet·d的剂量灌胃。

2.2 抗疲劳实验

2.2.1 负重游泳实验 小鼠连续灌胃给药28 d后，于末次灌胃120 min后，在尾根部负荷5%体重的铅皮，放入自制游泳箱中游泳并避免各小鼠之间的相互影响，水温34℃，水深38 cm，记录游泳开始至小鼠游泳疲劳而沉入水中7 s不能浮起的时间为负重游泳时间。

2.2.2 抗疲劳生化指标测定 小鼠末次给药120 min后，无负重在温度为(30±0.5)℃的水中游泳90 min，捞出小鼠擦干60 min后，拔眼球采血0.5～1 mL (整个采血控制在30 s内完成)，血液在室温(30 ℃)静置30 min使血液凝固，以5 000 r·min-1离心10 min，取血浆，置冰箱中冷藏备用，检测血浆中乳酸、尿素氮含量及乳酸脱氢酶活力。同时迅速取出小鼠肝脏和股四头肌，放入液氮罐保存备用以检测肝糖原和肌糖原含量。

血乳酸(LD)的测定、尿素氮(BUN)的测定、肝糖原和肌糖原的测定及乳酸脱氢酶(LDH)的测定均按相应测试盒说明进行测定。

2.3 耐缺氧实验

2.3.1 常压耐缺氧实验 小鼠连续灌胃给药28 d，于末次灌胃60 min后，将小鼠放入250 mL事先盛有纱布包好的15 g碱石灰的广口瓶中，每瓶1只，涂抹凡士林密封瓶口，记录从密封至小鼠呼吸停止的时间。

2.3.2 急性脑缺血性缺氧实验 末次给药60 min后，对每组动物称重，各组小鼠自颈部逐只断头，记录小鼠断头后至张口喘气停止的时间。

2.4 亚硝酸钠中毒存活试验

小鼠末次给药后120 min，均腹腔注射亚硝酸钠溶液(0.1 mL/10 g)，立即计时，记录动物存活时间。

2.5 数据统计分析

3 结果

3.1 骆越壮酒对小鼠负重游泳时间的影响

负重游泳试验结果，详见表1。表明中剂量骆越壮酒和红景天一样，可显著延长小鼠的负重游泳时间(P<0.01)，且负重游泳时间比红景天阳性对照组和正常对照组分别提高11.55%和33.16%。低剂量组的负重游泳时间与正常对照组之间差异无统计学意义(P<0.05)，但溶媒组和高剂量组的负重游泳时间显著少于正常对照组(P<0.01)。结果表明适量的骆越壮酒具有抗疲劳作用，但过量的骆越壮酒与溶媒白酒一样令小鼠更加疲劳。

组别游泳时间t(min)正常对照组7.69±1.01红景天组9.18±0.78**溶媒组5.31±0.50**高剂量5.15±0.83**中剂量10.24±1.59**低剂量7.33±0.83

注：与正常对照组比较，**P<0.01。

组别生化指标血乳酸(mmol/L)血清尿素氮(mmol/L)乳酸脱氢酶(U/L)肝糖原(mg/g)肌糖原(mg/g)正常对照组5.41±0.1911.46±0.312 292.70±118.101 228.90±64.9210.62±0.47红景天组3.12±0.17**7.59±0.22**2 100.10±204.371 943.90±57.27**12.32±1.01**溶媒组5.44±0.1612.44±0.40**2 425.10±352.451 519.00±262.92**9.30±0.26**高剂量3.23±0.16**7.54±0.22**2 221.50±334.061 753.80±199.02**11.62±0.90**中剂量4.83±0.21**9.74±0.35**2 415.00±262.241 554.90±106.99**12.29±0.68**低剂量4.90±0.14**10.52±0.38**2 325.40±213.121 497.10±150.05**11.11±0.74

注：与正常对照组比较，**P<0.01。

3.2 骆越壮酒对运动后小鼠抗疲劳生化指标的影响

由表2可见，与正常对照组相比，骆越壮酒低、中、高剂量和组红景天均可显著降低运动后小鼠的血乳酸值(P<0.01)，降低的幅度分别为9.43%、10.72%、40.30%、42.33%，说明骆越壮酒与红景天一样，可以降低小鼠运动后血乳酸的生成。溶媒组与正常对照之间血乳酸值差异无统计学意义(P<0.05)。

运动后，骆越壮酒低、中、高剂量组及红景天阳性对照组小鼠血清尿素氮显著低于正常对照组(P<0.01)，分别下降8.20%、15.01%、34.21%和33.77%，而溶媒组血清尿素氮显著高于正常对照(P<0.01)。

运动后，小鼠的乳酸脱氢酶在正常对照组和红景天组、溶媒组、骆越壮酒各剂量组之间无显著差异(P<0.05)，表明给药对小鼠运动后的乳酸脱氢酶的活性影响不大。

骆越壮酒各剂量组及红景天阳性对照组、溶媒组的肝糖原数值在运动后均显著高于正常对照组(P<0.01)，其中红景天组又显著高于其他各组(P<0.05)，骆越壮酒组肝糖原数值随用药剂量升高而升高。

骆越壮酒中剂量组、高剂量组及红景天阳性对照组的肌糖原数值在运动后极显著高于正常对照组(P<0.01)。低剂量组与正常对照组的肌糖原数值间差异无统计学意义(P<0.05)，而运动后溶媒组小鼠肌糖原数值极显著低于正常对照组和骆越壮酒各组(P<0.01)。

由表3可见，中剂量组小鼠的常压耐缺氧时间虽然显著低于红景天阳性对照组，但却高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；低剂量组小鼠常压耐缺氧时间与正常对照组差异不显著(P<0.05)，溶媒组和高剂量组常压耐缺氧时间极显著低于正常对照组(P<0.01)。低剂量组和中剂量组小鼠急性脑缺血时间极显著高于正常对照组(P<0.01)；高剂量组小鼠的急性脑缺血时间与正常对照组差异无统计学意义(P<0.05)，但两者显著高于溶媒组(P<0.01)。

3.3 骆越壮酒对小鼠耐缺氧时间的影响

组别小鼠耐缺氧时间常压耐缺氧时间(min)急性脑缺血时间(s)正常对照组23.07±0.9416.00±1.06红景天组26.12±1.55**23.35±1.16**溶媒组18.54±0.55**14.13±1.01**高剂量19.84±0.86**15.93±0.66中剂量24.25±1.19*21.78±1.10**低剂量22.80±2.2917.63±1.18**

注：与正常对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3.4 骆越壮酒对小鼠亚硝酸钠中毒存活时间的影响

组别亚硝酸钠中毒存活时间t(min)正常对照组19.06±0.69高剂量25.14±0.77**中剂量20.70±0.94**低剂量18.64±0.71

注：与正常对照组比较，**P<0.01。

由表4结果可见，尽管骆越壮酒低剂量组小鼠亚硝酸钠中毒存活时间与正常对照组之间差异无统计学意义(P<0.05)，但中剂量和高剂量骆越壮酒却可以显著延长小鼠亚硝酸钠中毒存活时间(P<0.01)。

4 讨论

运动耐力下降是疲劳最直接的表现，而测定机体持续运动到力竭的时间可以反映机体的耐力，因此，负重力竭游泳时间一直被作为是反映运动耐力的重要指标[4-6，11]。实验结果表明，骆越壮酒中剂量组的负重游泳时间比红景天阳性对照组和正常对照组分别提高11.55%和33.16%，表明骆越壮酒可显著提高小鼠的运动耐力，但不具有“剂量—效应”关系。

乳酸、尿素氮和糖原都是常用的抗疲劳生化指标[12]。实验结果可见，骆越壮酒与红景天一样能显著降低运动后小鼠的血乳酸及血清尿素氮的浓度，提高小鼠肝糖原和肌糖原含量。对血乳酸和血清尿氮素的影响，高剂量组与红景天组的效果相当；对肝糖原的影响中红景天效果显著优于骆越壮酒各剂量组；而对肌糖原的影响中，中剂量组的效果与红景天组相当。在实验中，骆越壮酒对运动后小鼠乳酸脱氢酶影响不大，暗示通过提高体内乳酸脱氢酶活性而加速血乳酸清除的机制可能并非骆越壮酒抗疲劳的机制之一。

研究表明，缺氧与中枢疲劳和外周疲劳都有密切的关系。人体在剧烈运动时，缺氧会促使肌肉进行糖的无氧酵解，能量(ATP)减少，乳酸增多，导致疲劳[13]。缺氧也可导致脑突触传递功能受阻，从而导致神经疲劳的发生[14]。机体耐疲劳能力与耐缺氧能力密切相关，耐缺氧时间越长，耗氧量越低，反映机体组织对氧的利用率越高，有利于体内能量的节省，可以提高体力和脑力的活力效能[15]。实验结果显示，中剂量的骆越壮酒可显著延长小鼠常压耐缺氧时间及耐急性脑缺氧时间，但不存在“量—效”关系。急性亚硝酸钠中毒实验结果也表明，骆越壮酒可以显著延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间，且在一定范围内存在“量—效”关系。

综上所述，骆越壮酒可以提高小鼠抗疲劳及耐缺氧能力。中医认为酒性温，味甘苦辛，有毒，入心、肝、肺、胃经。酒可饮用，与药结合引药入经、通经活络、温补阳气、祛寒止痛等，更是理想的有机溶媒，能溶解药物有效成分，降低毒副作用[16]。实验结果显示，酒与骆越保健方药物结合，较之溶媒体白酒，有更好的抗疲劳和提高耐缺氧作用。