哮喘患儿外周血Th17、Th22、调节性T细胞及相关因子变化情况分析

孙丽好

洛阳北方企业集团有限公司职工医院儿科，河南省洛阳市 471000

支气管哮喘是以气道重塑和炎性反应为主要病理特征的慢性呼吸道疾病，高发于儿童[1]。流行病学调查显示，我国儿童支气管哮喘发生率为2%～5%，且发病年龄呈逐渐减小趋势[2]。支气管哮喘的发病机制目前仍未完全明确，其中T淋巴细胞亚群异常活化为效应T细胞被认为是支气管哮喘发病的关键环节，也是气道炎性反应扩大的重要因素[3]。本文以支气管哮喘初诊患儿为观察对象，检测了外周血Th17、Th22、调节性T细胞及相关细胞因子在哮喘发病、缓解中的变化情况，为哮喘发病机制的研究提供参考。

1 对象与方法

1.1 观察对象 选取2016年6月—2017年10月间本院收治的支气管哮喘初诊患儿116例为初诊组，其中男64例，女52例，平均年龄(6.85±2.18)岁。另取90例经哮喘治疗后症状缓解的患儿为缓解组，其中男49例，女41例，平均年龄(6.63±1.84)岁。初诊组和缓解组均符合儿童支气管哮喘诊治指南(中华医学会儿科学分会，2016版)中的诊断标准；排除肺结核、肺炎、支原体感染等疾病。选取同期在本院行常规体检的健康儿童60例为对照组，其中男32例，女28例，平均年龄(6.90±1.42)岁。各组性别构成、年龄之间比较差异无统计学意义(P>0.05)；本文经伦理委员会批准，受试儿童或其监护人均签署知情同意书。

1.2 方法 抽取儿童空腹肘静脉血3ml，肝素抗凝，96孔板中分别加入100μl静脉血和100μl DMEM细胞培养基，滴加刺激剂和阻断剂各20μl，放入37℃ 5%CO2培养箱中孵育5～8h，取200μl加入流式细胞管，分别滴加10μl的CD3-H7、CD4-Fitc单克隆抗体，避光反应45min，依次加入固定剂、破膜剂各100μl，分别避光反应20min，分别滴加10μl的IL-17-Cy5、IL-22-Pe单克隆抗体，避光反应30min，磷酸缓冲液重悬细胞，上流式细胞仪检测，以CD3+CD4+IL-17+IL-22-为Th17细胞，CD3+CD4+IL-17-IL-22+为Th22细胞。另取100μl静脉血加入流式细胞管，滴加CD4-Fitc、CD25-Pe、CD127-Cy5单克隆抗体，避光反应20min，滴加细胞裂解液300μl，2 000r/min离心10min，弃去上清，磷酸缓冲液重悬细胞，计算CD4+细胞中CD4+CD25+CD127+百分率为调节性T细胞水平。酶标法常规检测血浆中IL-17、IL-21、IL-22、IL-35水平。

2 结果

2.1 各组Th17、Th22、调节性T细胞及嗜酸性粒细胞水平比较 初诊组外周血调节性T细胞水平明显低于缓解组和对照组，Th17细胞、Th22细胞、嗜酸性粒细胞水平明显高于缓解组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；缓解组外周血调节性T细胞水平明显低于对照组，Th17细胞、Th22细胞、嗜酸性粒细胞水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 各组T细胞相关细胞因子水平比较 初诊组外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明显高于缓解组和对照组，IL-35水平明显低于缓解组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；缓解组外周血IL-17、IL-21、IL-22水平明显高于对照组，IL-35水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 各组Th17、Th22、调节性T细胞及嗜酸性粒细胞水平比较

注：与对照组相比，aP<0.05；与缓解组相比，bP<0.05。

表2 各组T细胞相关细胞因子水平比较

注：与对照组相比，aP<0.05；与缓解组相比，bP<0.05。

2.3 嗜酸性粒细胞计数与Th17、Th22、调节性T细胞水平的相关性 Pearson相关性分析显示，外周血嗜酸性粒细胞计数与Th17、Th22水平呈正相关(r=0.864、0.928，P<0.05)，与调节性T细胞水平呈负相关(r=-0.675，P<0.05)。

3 讨论

支气管哮喘是儿童常见的慢性气道炎性疾病，自身免疫系统功能紊乱与病情的发生、发展密切相关，其中T淋巴细胞亚群平衡失调发挥关键作用[4]。调节性T细胞可通知多种细胞因子，对抗原特异性免疫反应发挥直接或间接的抑制作用，诱发机体出现免疫耐受[5]。Th17细胞是可特异性分泌IL-17的辅助性T细胞亚群，细胞因子IL-17可聚集并活化中性粒细胞，发挥修复受损组织、抗病原微生物等生理活性[6]；Th17细胞还可分泌IL-21，通过自分泌方式经STAT3通路刺激Th0细胞向Th17细胞的分化，同时诱导CD4+Th0细胞分泌IL-17，可维持并增强Th17细胞的生理作用[7]。Th22细胞是可特异性分泌IL-22的辅助性T细胞亚群，在胃癌、肺癌、肝癌等肿瘤及自身免疫性疾病、病毒感染的发生、发展中发挥重要作用[8]。

本结果显示，支气管哮喘患儿外周血调节性T细胞和细胞因子IL-35水平均较正常儿童明显减少，且随病情的缓解调节性T细胞和IL-35水平明显升高。提示调节性T细胞介导的免疫耐受参与了病情的进展，且与呼吸道炎症存在关联。支气管哮喘患儿嗜酸性粒细胞水平较正常儿童明显升高，且与哮喘严重程度相关，与Th17、Th22水平呈正相关，与调节性T细胞水平呈负相关。本文中Th17细胞及细胞因子IL-17、IL-21水平在支气管哮喘患儿中明显升高，可能与Th17细胞经IL-17、IL-21加重体内病理性免疫应答，诱导哮喘症状加重有关。相关研究显示，支气管哮喘患者活检、痰标本、肺泡灌洗液中IL-17表达水平明显高于健康人群，与本文结果一致[9]。本文中支气管哮喘患儿初诊和缓解者外周血Th22细胞水平均较正常儿童明显上升，提示Th22细胞水平与哮喘患儿病情严重程度相关，可能参与疾病的发生、发展。