外周血miR-197表达水平与子宫肌瘤患者病情及治疗效果的相关性研究

杨 咏

重庆医科大学附属南川人民医院妇科，重庆市 408400

子宫肌瘤是妇科常见的一种不同年龄段女性均能患病的生殖系统良性肿瘤，育龄期妇女的患病率超过25%，而围绝经期妇女的患病率更是高达40%以上[1]。子宫肌瘤可引起子宫异常出血，肿瘤体积过大时可产生腹痛和压迫症状，严重时甚至导致不孕[2]。目前临床上治疗子宫肌瘤的药物疗效不佳，主要还是以手术切除为主,考虑到部分患者的生育需求或心理因素，手术方法以子宫肌瘤剔除术为主。最近，有研究报道了miRNAs可以调控肿瘤细胞的增殖、迁移以及凋亡，并受雌激素的调节，在子宫肌瘤的发生发展中具有重要功能[3]。miR-197已被多项研究证实在胃癌、肝癌、乳腺癌等多种肿瘤疾病中具有特异性高/低表达[4-5]。而在子宫肌瘤中，miR-197被报道在肿瘤组织中具有特异性低表达[6]，但是miR-197在子宫肌瘤患者外周血中的表达水平及其与患者病情和治疗效果的相关性还未有报道。本研究通过对比100例子宫肌瘤患者术前、术后以及与对照组间miR-197表达水平的差异，来探究其在该病中的意义，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2016年9月—2018年9月于我院妇科就诊的100例子宫肌瘤患者作为观察组。子宫肌瘤的诊断符合《妇产科学》[7](第8版)中的诊断标准。纳入标准：(1)年龄≥18岁；(2)经期规律；(3)符合行子宫肌瘤剔除术的手术指征；(4)最近1个月内没有使用过激素药物治疗。排除标准：(1)合并有其他恶性肿瘤；(2)合并有子宫内膜异位；(3)合并有子宫腺肌病；(4)合并其他重要脏器的功能不全；(5)合并严重的代谢性疾病；(6)存在心理障碍。观察组年龄21～50岁，平均年龄(36.78±7.14)岁，病程4个月～3年，平均病程(2.16±0.68)年。选取同期于我院体检的100例健康妇女作为对照组，年龄20～50岁，平均年龄(35.94±8.26)岁。两组年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有较好的可比性。

1.2 外周血miR-197表达水平检测 所有研究对象于清晨同一时间抽取空腹状态下肘部静脉血2ml，1 500rpm转速离心5min后取上层血清，用trizol试剂(美国invitrogen公司)提取外周血总microRNAs，后使用miRNA逆转录试剂盒(日本takara公司)按步骤说明书逆转录后加入miR-197上下游引物进行实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)， 读取各样本的Ct值。

1.3 肿瘤组织切片ER免疫组化 观察组患者经子宫肌瘤剔除术后切除肿瘤组织，使用快速冰冻切片对肿瘤组织雌激素受体(ER)进行免疫组化染色，染色的强度评分为：无明显着色计1分，浅棕色计2分，深棕色计3分；光镜下随机选取观察窗，无阳性染色细胞计0分，阳性染色细胞占视野下不超过1/4计1分，阳性染色细胞占视野下不超过1/2计2分，阳性染色细胞占视野下超过1/2计3分，ER得分=染色强度总分×阳性细胞比例得分[8]。

1.4 子宫体积和子宫肌瘤体积测量 测量观察组患者治疗前、后子宫体积和子宫肌瘤体积大小，患者手术前、后经阴道彩超测量子宫或肿瘤的长(cm)、宽(cm)、高(cm)，体积=长×宽×高(cm3)。

1.5 统计学方法 所有数据均采用SPSS20.0软件进行分析，计量资料采用均数±标准差表示，两组数据间的比较采用student-t检验，采用Pearson相关性分析。当P<0.05时认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗前两组患者外周血miR-197水平和子宫体积比较 治疗前，观察组患者的外周血miR-197水平明显低于对照组，子宫体积明显大于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。相关性分析显示，患者外周血miR-197水平与子宫体积无明显相关性(r=-0.43，P=0.541)。

表1 治疗前两组患者外周血miR-197水平和子宫体积比较

2.2 观察组治疗前、后外周血miR-197水平和子宫体积比较 观察组患者治疗后外周血miR-197水平明显高于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组患者治疗后子宫体积明显小于治疗前，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 观察组治疗前、后外周血miR-197水平和子宫体积比较

2.3 观察组外周血miR-197水平与肿瘤体积及ER相关性 观察组治疗前外周血miR-197平均水平为0.74±0.12，肿瘤体积为(63.24±21.04)cm3，ER评分为(12.72±4.83)分，Pearson相关性分析显示患者外周血miR-197表达水平与ER表达水平呈负相关(r=-0.67，P=0.012)，与肿瘤体积大小呈负相关(r=-0.58，P=0.034)。

3 讨论

子宫肌瘤作为各年龄段女性的高发性疾病，其确切的病因和发病机制还没有被完全阐明，主流学说认为子宫肌瘤是一种性激素(雌激素和孕激素)依赖性的良性肿瘤，主要是与雌激素和孕激素的水平不稳定，产生较大的波动有关系[9]。大量的临床研究、基础实验以及循证医学研究显示雌孕激素可以促进肿瘤细胞的增殖和迁移能力[10-11]。动物实验报道了异种移植的平滑肌瘤小鼠模型中雌激素和孕激素都是肿瘤细胞增殖以及分泌细胞外基质(ECM)所必需的物质，另外雌激素和孕激素还可以调控各种细胞因子、炎症因子的相互作用[12]。通过对比分析子宫肌瘤患者切除的肿瘤组织的冰冻切片显示，肿瘤组织中雌激素受体和孕激素受体的表达水平均明显高于正常子宫肌层组织，且激素受体的表达水平越高，肿瘤的生长速度越快[13]。临床研究报道了药物治疗的子宫肌瘤患者，肿瘤体积的缩小比例和ER免疫组化呈阳性的细胞百分比呈明显的正相关性[14]。有一项研究报道了处于妊娠期的子宫肌瘤患者，肿瘤组织中的ER表达水平与正常肌层组织中的ER表达水平无明显差异，而PR表达量明显高于正常肌层组织，这一结果解释了妊娠期子宫肌瘤的肿瘤体积不会持续增大的原因是ER的低表达，使肿瘤细胞对雌激素的敏感性差，肿瘤细胞的增殖受阻[15]。因此，雌激素是子宫肌瘤发生发展的必需条件。在本次研究结果中，Pearson相关性分析显示患者外周血miR-197表达水平与ER表达和肿瘤体积大小均呈负相关(P<0.05)。这表明子宫肌瘤患者外周血miR-197表达水平是可以反映患者病情的有效指标之一。

已有多项研究证实miRNAs在子宫肌瘤以及子宫平滑肌细胞中广泛表达并对肿瘤的生长具有重要的正性/负性调节作用。miR-197是众多miRNAs中的一员，且已被报道其参与细胞的多种生物学功能，尤其是参与了多种肿瘤疾病的发病过程。细胞学实验证实，miR-197可以通过调控上皮—间充质转化(EMT)来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭[16]。miR-197在甲状腺滤泡癌中的表达水平明显高于其他类型的甲状腺癌[17]。在子宫肌瘤中，miR-197在肿瘤组织中的表达水平明显低于周围正常的肌组织[6]，该研究表明miR-197与子宫肌瘤的发病过程密切相关，但是检测肿瘤组织中的miR-197表达水平过程复杂，不易实现，限制了miR-197的临床应用潜能。在本次研究中，子宫肌瘤患者的外周血miR-197表达水平明显低于正常对照人群，且肿瘤组织体积越大，ER表达水平越高，miR-197的表达水平越低。而手术后，患者的外周血miR-197表达水平明显升高，这些结果均说明外周血miR-197表达水平在一定程度上可以反映子宫肌瘤患者的肿瘤大小、ER表达水平，且治疗后患者外周血miR-197水平明显升高，是患者病情及治疗的良好观察指标，值得在临床上推广应用。