参蛤益肺胶囊对COPD稳定期大鼠血清bFGF水平及支气管平滑肌厚度的影响*

廖冬梅 钟红卫 雷章恒△ 陈远霞

1西南医科大学，四川泸州 6460002西南医科大学附属中医医院，四川泸州 646000

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases，COPD)是一种常见的呼吸系统疾病，以持续呼吸症状和气流受限为特征，通常是由于明显暴露于有毒颗粒或气体引起的气道和(或)肺泡异常所导致[1]。随着全球环境污染加重，人口老龄化，COPD的发病率及死亡率呈增长趋势，严重影响患者的生活质量，极大地加重患者和社会的经济负担。因此，针对COPD的防治研究显得格外重要。近年来研究[2-3]指出，中医药治疗COPD具有不错的临床疗效。本研究观察了参蛤益肺胶囊治疗COPD稳定期大鼠对血清碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)水平及支气管平滑肌厚度的影响，旨在为中药制剂防治COPD奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

清洁级SD大鼠50只，其中雌鼠25只，体重(230±10)g；雄鼠25只，体重(290±10)g。遵照《实验动物环境及设施(GB 14925-2010)》，遵守实验动物福利与伦理原则，研究方案获得西南医科大学实验动物伦理委员会批准。

1.2 实验仪器

417R高速冷冻离心机(德国eppendorf公司)，Bx-50光学显微镜(日本OLYMPUS公司)，ML204/02电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，-80℃冰箱(日本SANYO公司)。

1.3 实验试剂及药品

大鼠bFGF ELISA试剂盒(上海泛科实业有限公司，SBJ-R0562)，参蛤益肺胶囊(西南医科大学附属中医医院，批号20160604，0.33 g/粒)，茶碱缓释片(广州迈特兴华制药厂，批号20160118，0.1 g/片)，3%戊巴比妥(Sigma公司，批号05042137)。

1.4 造模方法

适应性喂养1周后，从50只清洁级SD大鼠中，分别挑选出5只雌鼠和5只雄鼠作为空白组(N组)，剩下的40只进行COPD稳定期大鼠造模。根据本实验室研究经验，采用被动吸入香烟烟雾联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法建立COPD稳定期大鼠模型。造模第1周至第3周，经大鼠鼻腔滴入0.1 mL肺炎克雷伯杆菌液(6×108CFU/mL)，每5天进行1次。第1周至第6周，将大鼠置于烟熏箱被动吸入香烟烟雾，每天1次，每次30 min。

1.5 分组及给药

造模成功后，以雌雄各半为原则，随机将40只大鼠分为4组：模型组(M组)、常规剂量参蛤益肺胶囊治疗组(A组)、高剂量参蛤益肺胶囊治疗组(B组)、茶碱缓释片治疗组(C组)各10只。A组、B组、C组大鼠每日给药剂量分别为0.62 g/kg、0.42 g/kg、0.02 g/kg，将每日给药量与50 mL0.9%氯化钠溶液充分混合后进行灌胃处理；N组及M组大鼠以50 mL0.9%氯化钠溶液进行灌胃处理。

1.6 检测指标

将各组大鼠分为2组，分别于造模12周及18周后进行血清bFGF水平检测及支气管平滑肌厚度测定。取材前所有大鼠禁食12 h，麻醉后采集腹主动脉血，将其静置于4℃冰箱4 h，取出后以3000 r/min的转速离心10 min，将其血清置于-80℃冰箱内保存待测，运用ELISA试剂盒进行检测。取材后迅速处死大鼠、开胸、取出大鼠的右肺并分离出中叶，肺组织经常规固定、HE染色后采用显微镜观察，运用计算机图像分析系统测量支气管平滑肌厚度。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 血清bFGF水平比较

造模12周及18周后，M组、A组、B组、C组大鼠血清bFGF水平均明显高于N组(P<0.05)；A组、B组、C组大鼠血清bFGF水平均明显低于M组(P<0.05)；B组大鼠血清bFGF水平明显低于A组、C组(P<0.05)；A组与C组大鼠血清bFGF水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。造模18周后B组大鼠血清bFGF水平明显低于12周后(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠血清bFGF水平比较

与N组比较，*P<0.05；与M组比较，△P<0.05；与B组比较，▲P<0.05；与12周后比较，□P<0.05

2.2 支气管平滑肌厚度比较

造模12周及18周后，M组、A组、B组、C组大鼠支气管平滑肌厚度均明显高于N组(P<0.05)；A组、B组、C组大鼠支气管平滑肌厚度均明显低于M组(P<0.05)；B组大鼠支气管平滑肌厚度明显低于A组、C组(P<0.05)；A组与C组大鼠支气管平滑肌厚度比较，差异无统计学意义(P>0.05)。造模18周后B组大鼠支气管平滑肌厚度明显低于12周后(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠支气管平滑肌厚度比较

与N组比较，*P<0.05；与M组比较，△P<0.05；与B组比较，▲P<0.05；与12周后比较，□P<0.05

3 讨论

血清bFGF是一种多肽分子，具有广泛生物活性，丝裂原活性明显，能促进多种细胞生长、增殖和分化。血清bFGF可通过趋化作用使单核细胞、中性粒细胞浸润到损伤局部参与炎症反应，同时也趋化成纤维细胞、内皮细胞和星形胶质细胞参与局部损伤的修复和重建。研究[4-5]指出，在COPD发病过程中，bFGF参与炎症反应和损伤修复，引起气道黏膜炎症反应加重、黏膜下胶原沉积和平滑肌细胞增生、肥厚，导致气道重塑，因此可作为COPD病情监测的重要观察指标。

本实验COPD稳定期大鼠模型的建立采用被动吸入香烟烟雾联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法，更符合COPD稳定期的病情特点。本研究结果显示，造模12周及18周后比较各组大鼠血清bFGF水平及支气管平滑肌厚度，M组、A组、B组、C组大鼠均明显高于N组，提示造模成功；A组、B组、C组均明显低于M组，提示茶碱缓释片、参蛤益肺胶囊常规剂量及高剂量均对COPD稳定期大鼠有治疗作用；B组大鼠明显低于A组、C组，提示高剂量参蛤益肺胶囊的治疗效果优于茶碱缓释片及常规剂量参蛤益肺胶囊治疗；造模18周后B组大鼠明显低于12周后，提示随着治疗时间延长，高剂量参蛤益肺胶囊治疗效果进一步提升，可有效缓解病情进展。

根据本病临床表现，可归属于中医“肺胀”范畴，古代医家对其病因病机进行了详细描述，《诸病源候论·咳嗽病诸侯·咳逆短气候》曰：“肺虚为微寒所伤，则咳嗽，嗽则气还于肺间，则肺胀；肺胀则气逆。而肺本虚，气为不足，复为邪所乘，壅痞不能宣畅，故咳逆短乏气也。”《寿世保元·痰喘》云：“肺胀喘满，胸高气急，两胁搧动，陷下作坑，两鼻窍张，闷乱嗽渴，声啊不鸣，痰涎潮塞。”肺胀的病理性质多属标实本虚，标实为痰浊、水饮、瘀血和气滞，本虚为肺、脾、肾气虚，晚期则气虚及阳，或阴阳两虚。本病稳定期病因病机为肺脾肾虚、痰瘀互结，治疗应以益气、活血、化痰为原则[6]。参蛤益肺胶囊是西南医科大学附属中医医院院内中药制剂，源自明代朱肃《普济方》的蛤蚧散加减，由蛤蚧、红参、川芎、三七等药物组成，具有补肺益肾、化瘀祛痰、纳气平喘、标本兼治之功[7]。

综上所述，参蛤益肺胶囊可降低COPD稳定期大鼠血清bFGF水平，减少支气管平滑肌厚度，高剂量参蛤益肺胶囊疗效更为显著。