高建华,何颖辉
(杭州市西湖区中西医结合医院,杭州 310000)
随着国内经济的高速发展和人们生活物质水平的不断提高,冠心病(coronary heart disease,CHD)在我国的年发病率呈逐年上升的态势[1-2],已引起了国内老年病学、心血管病学专家的广泛关注。近年来,有报道显示幽门螺杆菌(helicobacterpylori,HP)感染与冠心病的发生、发展存在着密切联系,但有关机制尚不完全清楚,可能与HP感染引起的炎症、免疫反应、吸收功能障碍等因素相关[3-5]。另外,HP感染与胃肠道疾病发生密切相关[6-7]。有文献报道HP的细胞毒素相关蛋白(CagA)是引起CHD的重要致病因子之一,其在CHD的发病中起到重要作用[8-9]。目前,在CHD并发HP感染者中,有关血清HP抗体谱和炎性因子特征的报道较少。因此本文旨在探讨CHD并发HP感染者HP阳性率、炎性因子、血清HP抗体谱以及血清型分布特征,间接说明其与CHD发生的相关性。详细的研究如下。
1材料与方法
1.1 研究对象 收集2016年12月~2017年12月,西湖区中西医结合医院收治的疑似CHD病人,采用选择性冠状动脉造影,选择左主干、左前降支、左回旋支及右冠状动脉中至少有一支狭窄程度≥50%者诊断为CHD[10],共收集296例CHD患者(疾病组)血清样本,其中男性158例,女性138例,平均年龄66.5±12.4岁。另收集同期体检者228例非冠心病血清,其中男性128例,女性100例,平均年龄65.7±12.6岁。所有研究对象近期均未出现消化系统疾病、肝肾功能不全及抗HP治疗等。
1.2 试剂和仪器 血清幽门螺杆菌抗体检测试剂盒(杭州艾康生物有限公司),幽门螺杆菌免疫印迹试验(WB)试剂盒(深圳市伯劳特生物制品有限公司),血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和同型半胱氨酸(Hcy)(北京利德曼生化股份有限公司),于雅培C16000全自动生化分析仪上检测。采用西门子公司生产的IMMULITE 1000全自动化学发光仪及其配套试剂测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)。
1.3 方法
1.3.1 标本收集:患者清晨空腹采样,常规无菌采集静脉血,分离血清3 ml,-70℃冻存备用。
1.3.2 血清HP抗体及炎性因子检测:采集与分离受检者血清标本,严格按照试剂盒说明书操作和判断结果。血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6),全部操作严格按照仪器操作规程和试剂说明书执行。
1.3.3 血清抗体谱检测(WB)和血清分型:若研究对象血清HP抗体检测结果为阳性,则进行HP血清抗体谱(WB)分析,严格按照试剂盒说明书进行操作;区带结果有:当尿素酶亚单位(UreA-66KD,UreB-30KD)、空泡毒素(VacA-95KD,VacA-91KD)和细胞毒素相关蛋白(CagA-116KD),并进行分型结果判断:依据说明书进行分型,若CagA,VacA区带抗体中有任一个区带抗体阳性,结果判为血清型I型;三者都阴性而UreA,UreB阳性则为II型。
2结果
2.1 疾病组与对照组间HP抗体阳性率及炎性因子比较 见表1。
表1 两组hs-CRP,IL-6,TNF-α和Hcy含量比较
对疾病组和对照组进行HP抗体和炎性因子检测可知,在两组人群中疾病组的HP抗体阳性率(52.03%,154/296)高于对照组(35.09%,80/228),两组间差异具有统计学意义(χ2=14.95,P<0.05)。疾病组各炎性因子(hs-CRP,IL-6,TNF-α和Hcy)含量均高于对照组,两组间差异均具有统计学意义(t=-33.34~19.96,均P<0.05)。
2.2 疾病组与对照组间HP抗体谱、血清型特征分析 见表2。
表2 疾病组与对照组间血清抗体谱与血清型差异性比较[n(%)]
经比较对照组与疾病组并发HP感染的抗体谱分析:VacA-95KD,VacA-91KD,UreA-66KD和UreB-30KD抗体,在两组间的差异无统计学意义(χ2=0.22~3.49,均P>0.05),而疾病组并发HP感染患者血清CagA-116KD抗体阳性率(76.62%,118/154)高于对照组中HP感染者(62.5%, 50/80),且两组间的差异具有统计学意义(χ2=5.19,P<0.05),疾病组中并发HP感染者血清I型阳性率(76.62%,118/154)高于对照组并发HP感染者(62.5%,50/80),两组间差异具有统计学意义(χ2=5.19,P<0.05)。
2.3 疾病组中不同HP感染血清型及非HP感染患者的炎性因子水平调查 见表3。疾病组按照HP感染血清型间及与非感染患者血清因子间比较,I型血清型hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy的含量高于II型血清型,且II型血清型hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy的含量高于非HP感染患者,各组间差异具有统计学意义(均P<0.05)。
表3 疾病组中不同HP感染血清型及非HP感染患者的炎性因子含量情况
3讨论在我国,随着经济稳步发展和人们物质生活水平的提高,CHD的发病率也在逐年增加,而且发病年龄明显年轻化,青壮年的发病率逐年增加[1-2],这引起了我国卫生领域专家、学者的广泛关注。最早于1994年由MENDALLN等[11]首次报道了HP感染可能与CHD发生、发展存在关联性,由此越来越多的国内外学者对HP感染在CHD发生、发展中的作用展开了相关研究。慢性HP感染是否为CHD独立危险因素,目前尚无明确结论,并且其致病机制仍存在争议[12]。HP为全球范围内流行的病原菌,HP具有感染性强的特点,有调查显示在我国正常体检人群HP的流行率在40%~46%,并且随着年龄的增长,HP感染率也随之升高[13]。
截至目前医学界有关HP感染与CHD发生、发展的可能性机制推测有[12,14-15]:①炎性反应:HP感染可激活炎症细胞分泌TNF-α,IL-6在内的细胞因子,引起局部炎症、内皮细胞损伤或功能障碍,导致平滑肌细胞增殖。②HP感染可引起脂代谢紊乱,促进动脉粥样斑块形成。③营养吸收障碍:HP感染可引起胃肠功能异常,致使维生素B12,B6和叶酸吸收不良,进而引起维生素B12,B6和叶酸缺乏,导致Hcy水平升高,加剧CHD的发生。④免疫反应:CagA抗体与内皮细胞表面抗原、平滑肌细胞发生交叉反应,促使动脉粥样硬化的发生。以上机制看似相互独立,但彼此之间却存在着内在的密切联系,本研究就其部分机制间的关联性进行了研究。
本文研究显示在CHD患者中HP感染的阳性率要高于非CHD组(见表1),差异具有统计学意义(P<0.05),与国内外文献报道一致,间接提示HP感染与CHD的发生发展存在关联性。另外本文比较了CHD组与非CHD组炎性因子(hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy)的含量,发现CHD组炎性因子hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy的含量要高于对照组,同样证实了文献报道的hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy这些因子与CHD的发生、发展存在着直接联系。然而,各炎性因子与HP感染及不同血清型别间是否存在联系?我们对疾病组与对照组间并发HP感染的血清型别和抗体谱进行调查发现(见表2),疾病组中并发HP感染的患者血清型以I型为主(CagA抗体为主要分型依据),且阳性率高于对照组,两组间的差异存在统计学意义(P<0.05),说明了HP感染CagA抗体阳性或血清型I型较HP感染CagA抗体阴性或血清型II型,对CHD的发生、发展起到了关键作用。另外我们将疾病组依据HP感染的血清型别及是否HP感染进行再分组(血清型I,血清型II,非HP感染) (见表3),发现这三个亚组中,I型血清型hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy 的含量高于II型血清型,II型血清型hs-CRP,TNF-α,IL-6和Hcy的含量高于非HP感染CHD患者,各组间差异具有统计学意义(P<0.05),进一步说明了HP感染引起CHD发生的各机制间相互交织在一起,HP感染血清型I型(CagA抗体阳性)较血清型II型可能会更大程度的引起血管发生免疫反应,同时严重的免疫反应又加剧了炎性反应的发生,但详细的发生过程有待于进一步的研究证实。
综上所述,HP感染作为CHD发生的一个重要因素,其机制尚不完全清楚,本文研究积累了CHD并发HP感染的流行病学资料以及血清特征性抗体谱资料,发现了CHD并发HP感染患者中各致病机制间存在着内在的关联性,为进一步研究CHD的发生、发展以及治疗奠定了科学依据。